老哥俱乐部

细胞简介：

兔脑静脉血管平滑肌分离自脑静脉组织；与脑动脉相比，脑静脉管壁较薄
。与身体其他部位的静脉不同
，脑静脉管壁中没有静脉瓣，静脉血的回流依赖高位的势能。脑静脉血的回流路径可以归纳为
：大部脑静脉血经脑深部静脉和脑血窦流入颈内静脉；小部脑静脉血经眼部翼状静脉丛
，进入静脉导血管再到头皮，后流入椎管中的椎旁静脉系统。脑静脉系统有大量交通枝静脉丛，即使两侧颈内静脉都被阻塞，大脑静脉血仍可经椎静脉和颈外静脉系统完成其回流

。脑静脉平滑肌细胞原代分离培养3天后，可见细胞贴壁伸展，细胞形态大小不一，呈梭形、不规则形、三角形或扇形，核卵圆形、居中
；2周后细胞汇合，多数细胞伸展呈长梭形，胞浆丰富
，有分枝状突起，细胞平行排列成单层或部分区域多层重叠生长，高低起伏
；细胞密度低时，常交织成网状；密度高时

，则排列为旋涡状或栅栏状。传代后细胞生长较快
，4-6天即可汇合
，并保持上述形态学特征和生长特点
。

方法简介

：

实验室分离的兔脑静脉平滑肌采用-胶原酶联合消化法结合差速贴壁法制备而来，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶。

质量检测

实验室分离的兔脑静脉血管平滑肌经α-SMA免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1
、HBV、HCV、支原体
、细菌、酵母和真菌等。

培养信息
：

培养基：含FBS
、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率
：每2-3天换液一次

生长特性：贴壁

细胞形态
：成纤维细胞样

传代特性
：可传5代左右；3代以内状态佳

消化液：0.25%

培养条件：气相：空气
，95%；CO2，5%

兔脑静脉血管平滑肌体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的佳培养状态。

实验报告：

一
、分离与培养：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织
，然后用PBS将此组织块清洗2次
，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶）
，混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液
，自然沉淀并收集上清
，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s
，置37℃消化10 min后
，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置

，重复此步骤2-3次
，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液
，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃
，5％CO2 培养箱中培养；

5
、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二
、免疫荧光鉴定：

1
、待心房肌细胞生长至80%融合时

，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后在4℃条件下
，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗
，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5

、PBS冲洗细胞3次

，每次10min，按1
：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6
、用PBS冲洗3次，每次10min
，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

公司正在出售的产品：

大鼠前列腺酸性0酸酶(ACP3)检测试剂盒
，英文名
： ACP3 ELISA Kit

Mouse angiopoietin receptor Tie1 (ANG-R-Tie1) ELISA Kit 小鼠血管生成素受体Tie1(ANG-R-Tie1)检测试剂盒

RatCyclin-D2ELISAKit 大鼠细胞周期素D2(Cyclin-D2)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforGRHELISAKit大鼠促生长激素释放激素

细胞单胺氧化酶A型(MAO-A)活性比色法定量检测试剂盒20次

RatiggeringReceptorExpressesonMyeloidCells-1,EM-1ELISAKit大鼠髓系细胞触发受体-1(EM-1)检测试剂盒规格：96T/48T

BCL2L1重组小鼠 BCL2L1 / Bcl-XL 蛋白 (aa 1-212, His 标签) Protein

白介素17(IL17)重组蛋白 Recombinant Interleukin 17 (IL17)

GOT1重组人 GOT1 / Aspartate aminotransferase 蛋白 Protein

HMGB1 Protein Human 重组人 HMGB1 / HMG1 蛋白

PROCR Protein Cynomolgus 重组食蟹猴 Epcr / PROCR 蛋白 (Fc 标签)

P选择素(SELP)重组蛋白 Recombinant Selectin, Platelet (SELP)

HMGB1 Protein Human 重组人 HMGB1 / HMG1 蛋白

ERBB3重组小鼠 HER3 / ErbB3 蛋白 Protein

ALCAM Protein Cynomolgus 重组食蟹猴 CD166 / ALCAM 蛋白 (Fc 标签)

APCS重组人 Serum amyloid P component / APCS / SAP 蛋白 Protein

小鼠L苯解酶(PAL)ELISA 试剂盒 96T/48T

Rat dehydroepiandrosterone S7 (DHEA-S7) ELISA Kit 大鼠脱氢表雄酮S7(DHEA-S7)检测试剂盒

Humanesogen,EELISAKit 人雌激素(E)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

HumanCollageypeⅢ,ColⅢ检测试剂盒人Ⅲ型胶原(ColⅢ)检测试剂盒规格：96T/48T

组织5’-核苷酸酶(5’-)活性比色法定量检测试剂盒20次

Humaeceptoyrosinekinase,KsELISAKit人受体酪激酶(Ks)检测试剂盒规格
：96T/48T

兔脑静脉血管平滑肌细胞兔可溶性凋亡相关因子(sFAS/Apo-1)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

兔可溶性P选择素（sP-selectin）检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

兔抗糖蛋白抗体(GP)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

兔抗平滑肌抗体(ASMA)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

注意事项
：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好
，培养液是否有漏液、浑浊等现象
，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息
，如细胞形态
、所用培养基

、血清比例
、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面
，显微镜下观察细胞状态
。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象
。观察好细胞状态后
，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h
。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞
，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养
。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养

。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片
，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流
。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代 
。

9.注意
： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。