老哥俱乐部

细胞简介：

兔淋巴结淋巴分离自淋巴结；淋巴结是哺乳类的周围淋巴器官，由淋巴细胞集合而成
。呈豆形，位于淋巴管行进途中，是产生免疫应答的重要器官之一

。淋巴结表面包有被膜，被膜的结缔组织伸入淋巴结内形成小梁，构成淋巴结的支架
。被膜下为皮质区
，淋巴结的中心及门部为髓质区。皮质区有淋巴小结、弥散淋巴组织和皮质淋巴窦（简称皮窦），髓质包括由致密淋巴组织构成的髓索和髓质淋巴窦（简称髓窦）。淋巴窦的窦腔内有许多淋巴细胞和巨噬细胞，从输入淋巴管流来的淋巴液先进入皮窦再流向髓窦，后经输出淋巴管离开淋巴结。淋巴结的主要功能是滤过淋巴液，产生淋巴细胞和浆细胞，参与机体的免疫反应。淋巴结肿大或疼痛常表示其属区范围内的器官有炎症或其他病变。主要功能是滤过淋巴液，产生淋巴细胞和浆细胞，参与机体的免疫反应；当局部感染时，细菌
、病毒或癌细胞等可沿淋巴管侵入
，引起局部淋巴结肿大。如该淋巴结不能阻止和消灭它们
，则病变可沿淋巴管的流注方向扩散和转移。淋巴结淋巴细胞是白细胞的一种，由次级淋巴器官淋巴结产生，是机体免疫应答功能的重要细胞成分；细胞为圆形细胞核，细胞质少。成熟淋巴细胞需依赖抗原刺激而分化增殖，继而发挥其免疫功能。

方法简介：

实验室分离的兔淋巴结淋巴采用分离淋巴结组织、研磨获取单细胞悬液后通过密度梯度离心法制备而来，细胞总量约为1×106cells/瓶
。

质量检测

实验室分离的兔淋巴结淋巴经过检测
，且不含有HIV-1、HBV、HCV
、支原体、细菌、酵母和真菌等
。

培养信息：

培养基
：含FBS、生长添加剂

、Penicillin
、Streptomycin等

换液频率：每2-3天换液一次

生长特性：悬浮

细胞形态

：圆形

传代特性
：不增殖；不传代

消化液

：0.25%

培养条件
：气相：空气，95%
；CO2，5%

兔淋巴结淋巴体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的佳培养状态。

实验报告
：

一、分离与培养：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织
，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清
，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液
，混悬10s
，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬
，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃
，5％CO2 培养箱中培养；

5
、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二
、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基
，用温育的PBS冲洗细胞2次
，每次10min
，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2
、PBS冲洗细胞2次

，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min
；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5
、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次

，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照
。

公司正在出售的产品：

大鼠L选择素(SELL)检测试剂盒
，英文名： SELL ELISA Kit

Mouse ai IgE receptor aibody ELISA Kit 小鼠抗IgE受体抗体检测试剂盒

Mouseα-GlucosidaseELISAKit 小鼠α葡萄糖苷酶(α-glucosidase)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforHumanmyelinbasicprotein,MBPELISAKit人髓0脂碱性蛋白

同戊二酸脱氢酶(αketoglaratedehydrogenase)20单位

ELISAKitsCD30L大鼠可溶性白细胞分化抗原30配体

ACVR2B重组食蟹猴 ACVR2B / ACTRIIB 蛋白 Protein

IL-16(Interleukin-16 0.5mgIL-16(Interleukin-16) 白介素16抗原

TFRC重组人 Transferrin Receptor / TFRC / CD71 蛋白 Protein

HBP1 Protein Human 重组人 HBP1 蛋白 (GST 标签)

ERBB2 Protein Mouse 重组小鼠 HER2 / ErbB2 蛋白 (Fc 标签)

IL-16(Interleukin-16 0.5mgIL-16(Interleukin-16) 白介素16抗原

HBP1 Protein Human 重组人 HBP1 蛋白 (GST 标签)

ACVR2B重组食蟹猴 ACVR2B / ACTRIIB 蛋白 Protein

ERBB2 Protein Mouse 重组小鼠 HER2 / ErbB2 蛋白 (Fc 标签)

TFRC重组人 Transferrin Receptor / TFRC / CD71 蛋白 Protein

小鼠Toll样受体9(TLR-9/CD289)ELISA 试剂盒 96T/48T

Rat placea growth factor (PLGF) ELISA Kit 大鼠胎盘生长因子(PLGF)检测试剂盒

HumanC-PeptideELISAKit 人C肽(C-Peptide)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

HumanclusterOfdiffereiation,CD4检测试剂盒人CD4分子(CD4)检测试剂盒规格：96T/48T

组蛋白脱乙酰化酶11(HDAC11)活性比色法定量检测试剂盒20次

Humaheumatoidfactor,RFELISAKit人类风湿因子(RF)检测试剂盒规格：96T/48T

兔淋巴结淋巴细胞兔素(Renin)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

兔神经生长因子（NGF）检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

兔色素上皮衍生因子(PEDF)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

兔热休克蛋白90(HSP-90)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

注意事项
：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好
，培养液是否有漏液、浑浊等现象
，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系
。

2. 仔细阅读细胞说明书
，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基
、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题
，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态
。因运输问题
，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片
，是正常现象
。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h
。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞
，再900 rpm-1000 rpm离心3 min
，
，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养
。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片
，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因
，个别敏感细胞会出现不稳定的情况
，请及时和老哥俱乐部联系
，告知细胞的具体情况
，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用
。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞

，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1
：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿
。不是1个T25瓶传2个10cm皿
。