細胞簡介 ：

兔頸動脈平滑肌分離自頸動脈組織 ；頸動脈存在於脊椎動物頸部的動脈 。有頸外動脈和頸內動脈 。前者分布至頭頂部和顏麵部 。後者進入顱內分布至腦和眼眶內 。在發生時 ，鰓弓中不形成鰓的下頜弓 ，所以 ，從大動脈也不分入鰓動脈和出鰓動脈 。從腹大動脈的前方發出頸外動脈 ，頸內動脈是通向第三鰓弓的血管延伸而形成的 ，但在某些魚類 、有尾兩棲類和爬行類中 ，這一血管也將一些血液送至大動脈根 。其它的高等脊椎動物的大動脈根 ，在第三 、第四大動脈弓之間消失 ，所以 ，其第三大動脈弓形成純粹的頸動脈 。在相當於第三 、第四大動脈弓之間的腹行大動脈的部分稱為頸總動脈幹（common co-rotid trunk） ；高等脊椎動物 ，是由頸總動脈幹分為左 、右頸總動脈 ，然後再各分支為頸外動脈和頸內動脈 。頸動脈是將血液由心髒輸送至頭 、麵 、頸部的大血管 ，是腦的主要供血血管之一 ，由內膜 、平滑肌層及外膜層構成 。與其相關常見疾病為頸動脈狹窄 ，頸動脈狹窄導致的缺血症狀主要包括，頭暈 、記憶力 、定向力減退、意識障礙 、黑朦 、偏側麵部和/或肢體麻木和/或無力 、伸舌偏向 、言語不利 、不能聽懂別人說的話等 。研究頸動脈平滑肌細胞的體外培養 ，為研究治療頸動脈狹窄提供一個細胞模型具有重要意義 。

方法簡介 ：

實驗室分離的大鼠頸動脈血管平滑肌采用-膠原酶聯合消化法製備而來 ，細胞總量約為5×10⁵cells/瓶 。

質量檢測

實驗室分離的兔頸動脈血管平滑肌經α-SMA免疫熒光鑒定 ，純度可達90%以上 ，且不含有HIV-1 、HBV、HCV 、支原體 、細菌 、酵母和真菌等 。

培養信息 ：

培養基 ：含FBS 、生長添加劑 、Penicillin 、Streptomycin等

換液頻率 ：每2-3天換液一次

生長特性 ：貼壁

細胞形態 ：成纖維細胞樣

傳代特性 ：可傳3代左右

消化液 ：0.25%

培養條件 ：氣相 ：空氣 ，95% ；CO2 ，5%

兔頸動脈血管平滑肌體外培養周期有限 ；建議使用配套的專用生長培養基及正確的操作方法來培養 ，以此保證該細胞的佳培養狀態 。

實驗報告 ：

一 、分離與培養 ：

1 、無菌條件下 ，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織 ，然後用PBS將此組織塊清洗2次 ，將組織剪成1mm3左右大小 ；

2 、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶） ，混懸10s ，置37℃條件下消化10min ，之後用滴管吹打製成單細胞懸液 ，自然沉澱並收集上清 ，用含10% FBS培養基終止消化後4℃放置 ；

3 、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液 ，混懸10s ，置37℃消化10 min後 ，按上述方法收集上清並終止消化後4℃放置 ，重複此步驟2-3次 ，直至組織被消化 ；

4 、用200目不鏽鋼篩網過濾細胞消化液 ，1200r/min 離心10min ，棄去上清 ，沉澱細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸 ，接種於25cm2培養瓶 ，放置於37℃  ，5％CO2 培養箱中培養 ；

5 、差速貼壁1h後 ，吸出培養基 ，按實驗需要接種於6孔板中繼續培養 ；二 、免疫熒光鑒定 ：

1 、待心房肌細胞生長至80%融合時 ，棄去培養基 ，用溫育的PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min ；

2 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在4℃條件下 ，用0.1％Triton X-100透膜15min ；

3 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在室溫條件下 ，用4% BSA封閉細胞30min ；

4 、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗 ，然後將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜 ；

5 、PBS衝洗細胞3次 ，每次10min ，按1 ：150的比例稀釋抗α-actin的二抗 ， 37℃條件下放置1h ；

6、用PBS衝洗3次 ，每次10min ，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像並拍照 。

公司正在出售的產品 ：

小鼠β2微球蛋白(BMG/β2-MG)ELISA 試劑盒

Human vitamin D3 (VD3) ELISA Kit 人3(VD3)檢測試劑盒

HumanAi-OvaryAibody,AOAbELISAKit 人抗卵巢抗體(AOAb)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

Humancholecystokinin,CCK檢測試劑盒人膽囊收縮素/腸促肽(CCK)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

紫外可見光分析20樣本

HumanSecretinELISAKit人促胰液素/胰泌素(Secretin)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

MDGA2重組小鼠 MDGA2 / MAMDC1 蛋白 Protein

BCRP/ABCG2(breast cancer resistance protein 0.5mgBCRP/ABCG2(breast cancer resistance protein) 癌耐藥相關蛋白(抗原)

LRP10重組人 LRP10 蛋白 Protein

IL1RL1 Protein Human 重組人 IL1RL1 / ST2 蛋白 (isoform a, His 標簽)

CD40LG Protein Rat 重組大鼠 CD40L / CD154 / TNFSF5 蛋白 (Fc 標簽)

BCRP/ABCG2(breast cancer resistance protein 0.5mgBCRP/ABCG2(breast cancer resistance protein) 癌耐藥相關蛋白(抗原)

IL1RL1 Protein Human 重組人 IL1RL1 / ST2 蛋白 (isoform a, His 標簽)

MDGA2重組小鼠 MDGA2 / MAMDC1 蛋白 Protein

CD40LG Protein Rat 重組大鼠 CD40L / CD154 / TNFSF5 蛋白 (Fc 標簽)

LRP10重組人 LRP10 蛋白 Protein

豚鼠基質金屬蛋白酶9(MMP-9)檢測試劑盒  ，英文名 ： MMP-9 ELISA Kit

Human apoptosis signal regulating kinase I (ASK-1) ELISA Kit 人凋亡信號調節激酶I(ASK-1)檢測試劑盒

MonkeyIerferonγ,IFN-γELISAKit 猴γ幹擾素(IFN-γ)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforbFGF-6(Humanbasicfibroblastgrowthfactor6)ELISAKit人堿性成纖維細胞生長因子6

細菌乳酸脫氫酶(LDH)總活性酶動力比色法定量檢測試劑盒20次

RabbitIerleukin3,IL-3ELISAKit兔子白介素3(IL-3)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

兔頸動脈血管平滑肌細胞人組織多肽抗原(TPA)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

人組織蛋白去乙酰化酶(HD)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

人組織蛋白酶抗體(CathAb)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

人組織蛋白酶S(cath-S)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

注意事項 ：

1. 收到細胞後首先觀察細胞瓶是否完好 ，培養液是否有漏液 、渾濁等現象 ，若有上述現象發生請及時和老哥俱樂部聯係 。

2. 仔細閱讀細胞說明書 ，了解細胞相關信息 ，如細胞形態 、所用培養基 、血清比例 、所需細胞因子等 ，確保細胞培養條件一致 ，若由於培養條件不一致而導致細胞出現問題 ，責任由客戶自行承擔 。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表麵 ，顯微鏡下觀察細胞狀態 。因運輸問題 ，部分細胞由於溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片 ，是正常現象 。觀察好細胞狀態後 ，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置於37℃培養箱放置4-6h 。

4. 貼壁細胞可以消化 ，懸浮細胞直接混勻收集細胞 ，900 rpm-1000 rpm離心3 min ，棄上清 。加5 mL PBS重懸細胞 ，再900 rpm-1000 rpm離心3 min ， ，用新鮮的*培養基重懸細胞 ，並接種到新的培養瓶或培養皿中 ，置於培養箱中進行培養 。

5. 請客戶用相同條件的培養基用於細胞培養 。

6. 建議客戶收到細胞後前3天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態 ，便於和我司技術部溝通交流 。由於運輸的原因 ，個別敏感細胞會出現不穩定的情況 ，請及時和老哥俱樂部聯係 ，告知細胞的具體情況 ，以便老哥俱樂部的技術人員跟蹤回訪直至問題解決 。

7. 該細胞僅供科研使用 。

8. 備注 ：運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞 ，請換用按照說明書細胞培養條件新配製的*培養基來培養細胞 。收到細胞後次傳代建議1 ：2傳代  。

9.注意 ： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿 。不是1個T25瓶傳2個10cm皿 。