老哥俱乐部

细胞简介
：

兔颈动脉平滑肌分离自颈动脉组织；颈动脉存在于脊椎动物颈部的动脉
。有颈外动脉和颈内动脉。前者分布至头顶部和颜面部。后者进入颅内分布至脑和眼眶内。在发生时，鳃弓中不形成鳃的下颌弓，所以，从大动脉也不分入鳃动脉和出鳃动脉。从腹大动脉的前方发出颈外动脉，颈内动脉是通向第三鳃弓的血管延伸而形成的，但在某些鱼类、有尾两栖类和爬行类中，这一血管也将一些血液送至大动脉根。其它的高等脊椎动物的大动脉根，在第三
、第四大动脉弓之间消失
，所以，其第三大动脉弓形成纯粹的颈动脉。在相当于第三
、第四大动脉弓之间的腹行大动脉的部分称为颈总动脉干（common co-rotid trunk）
；高等脊椎动物，是由颈总动脉干分为左
、右颈总动脉，然后再各分支为颈外动脉和颈内动脉。颈动脉是将血液由心脏输送至头
、面、颈部的大血管，是脑的主要供血血管之一，由内膜
、平滑肌层及外膜层构成。与其相关常见疾病为颈动脉狭窄，颈动脉狭窄导致的缺血症状主要包括
，头晕
、记忆力、定向力减退
、意识障碍、黑朦、偏侧面部和/或肢体麻木和/或无力、伸舌偏向、言语不利、不能听懂别人说的话等
。研究颈动脉平滑肌细胞的体外培养，为研究治疗颈动脉狭窄提供一个细胞模型具有重要意义
。

方法简介：

实验室分离的大鼠颈动脉血管平滑肌采用-胶原酶联合消化法制备而来
，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶。

质量检测

实验室分离的兔颈动脉血管平滑肌经α-SMA免疫荧光鉴定
，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1
、HBV、HCV
、支原体、细菌、酵母和真菌等
。

培养信息
：

培养基：含FBS
、生长添加剂
、Penicillin、Streptomycin等

换液频率：每2-3天换液一次

生长特性：贴壁

细胞形态
：成纤维细胞样

传代特性：可传3代左右

消化液：0.25%

培养条件：气相：空气，95%
；CO2，5%

兔颈动脉血管平滑肌体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的佳培养状态。

实验报告：

一、分离与培养
：

1、无菌条件下
，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织
，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶）

，混悬10s
，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液
，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置

；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液
，混悬10s
，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次
，直至组织被消化
；

4

、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液

，1200r/min 离心10min，弃去上清
，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃
，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基
，按实验需要接种于6孔板中继续培养
；二
、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次
，每次10min

，然后在4℃条件下
，用0.1％Triton X-100透膜15min
；

3
、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下
，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5
、PBS冲洗细胞3次

，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗
， 37℃条件下放置1h
；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

公司正在出售的产品：

小鼠β2微球蛋白(BMG/β2-MG)ELISA 试剂盒

Human vitamin D3 (VD3) ELISA Kit 人3(VD3)检测试剂盒

HumanAi-OvaryAibody,AOAbELISAKit 人抗卵巢抗体(AOAb)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

Humancholecystokinin,CCK检测试剂盒人胆囊收缩素/肠促肽(CCK)检测试剂盒规格：96T/48T

紫外可见光分析20样本

HumanSecretinELISAKit人促胰液素/胰泌素(Secretin)检测试剂盒规格
：96T/48T

MDGA2重组小鼠 MDGA2 / MAMDC1 蛋白 Protein

BCRP/ABCG2(breast cancer resistance protein 0.5mgBCRP/ABCG2(breast cancer resistance protein) 癌耐药相关蛋白(抗原)

LRP10重组人 LRP10 蛋白 Protein

IL1RL1 Protein Human 重组人 IL1RL1 / ST2 蛋白 (isoform a, His 标签)

CD40LG Protein Rat 重组大鼠 CD40L / CD154 / TNFSF5 蛋白 (Fc 标签)

BCRP/ABCG2(breast cancer resistance protein 0.5mgBCRP/ABCG2(breast cancer resistance protein) 癌耐药相关蛋白(抗原)

IL1RL1 Protein Human 重组人 IL1RL1 / ST2 蛋白 (isoform a, His 标签)

MDGA2重组小鼠 MDGA2 / MAMDC1 蛋白 Protein

CD40LG Protein Rat 重组大鼠 CD40L / CD154 / TNFSF5 蛋白 (Fc 标签)

LRP10重组人 LRP10 蛋白 Protein

豚鼠基质金属蛋白酶9(MMP-9)检测试剂盒 ，英文名： MMP-9 ELISA Kit

Human apoptosis signal regulating kinase I (ASK-1) ELISA Kit 人凋亡信号调节激酶I(ASK-1)检测试剂盒

MonkeyIerferonγ,IFN-γELISAKit 猴γ干扰素(IFN-γ)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforbFGF-6(Humanbasicfibroblastgrowthfactor6)ELISAKit人碱性成纤维细胞生长因子6

细菌乳酸脱氢酶(LDH)总活性酶动力比色法定量检测试剂盒20次

RabbitIerleukin3,IL-3ELISAKit兔子白介素3(IL-3)检测试剂盒规格：96T/48T

兔颈动脉血管平滑肌细胞人组织多肽抗原(TPA)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

人组织蛋白去乙酰化酶(HD)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

人组织蛋白酶抗体(CathAb)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

人组织蛋白酶S(cath-S)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

注意事项
：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好
，培养液是否有漏液
、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系
。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等
，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题
，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面
，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片

，是正常现象
。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞
，再900 rpm-1000 rpm离心3 min
，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中
，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态
，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因
，个别敏感细胞会出现不稳定的情况
，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况
，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞

。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿
。