老哥俱乐部

细胞简介：

兔结肠黏膜上皮分离自结肠组织；结肠在右髂窝内续于盲肠
，在第3骶椎平面连接直肠。结肠分升结肠
、横结肠
、降结肠和乙状结肠4部分，大部分固定于腹后壁，结肠的排列酷似英文字母“M"
，将小肠包围在内
。结肠横切面由内到外依次为：黏膜（上皮层、固有层
、黏膜肌层），黏膜下层（疏松结缔组织）
，肌层（内环形
、外纵行两层平滑肌）
，外膜（纤维膜或浆膜）。肠黏膜上皮细胞是机体内外环境的重要屏障
，持续暴露于大量抗原中，也是机体面对病原微生物的道防线
。因此，肠黏膜上皮细胞除有吸收
、分泌和转运等重要生理功能之外
，在黏膜先天性和获得性免疫防御机制中也起着重要作用。肠黏膜上皮细胞作为先接触抗原的细胞，在黏膜免疫反应的起始阶段发挥关键作用，它决定黏膜免疫反应的发生、性质和强度。探讨正常结肠黏膜上皮细胞的分离、体外培养方法
，为研究肠黏膜上皮细胞以及与肠黏膜相关疾病建立合适的细胞模型
。

方法简介：

实验室分离的兔结肠黏膜上皮采用先机械分离法、后胶原酶消化法并通过上皮细胞专用培养基培养筛选制备而来，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶

。

质量检测

实验室分离的兔结肠黏膜上皮经Cytokeratin-18免疫荧光鉴定
，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1
、HBV
、HCV
、支原体
、细菌、酵母和真菌等
。

培养信息：

包被条件
：鼠尾胶原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培养基：含FBS

、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率：每2-3天换液一次

生长特性：贴壁

细胞形态
：上皮细胞样

传代特性
：可传1-2代

消化液：0.25%

培养条件：气相
：空气，95%；CO2，5%

兔结肠黏膜上皮体外培养周期有限

；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的佳培养状态。

实验报告：

一、分离与培养
：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织
，然后用PBS将此组织块清洗2次
，将组织剪成1mm3左右大小；

2
、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶）

，混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置
；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液
，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置
，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min
，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬
，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ 
，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定：

1
、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min
；

2
、PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次
，每次10min
，然后在室温条件下
，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜
；

5
、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1
：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h
；

6、用PBS冲洗3次
，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

公司正在出售的产品：

大鼠酚(PYD)检测试剂盒 ，英文名： PYD ELISA Kit

Mouse beta galactosidase (beta GAL) ELISA Kit 小鼠β半乳糖苷酶(βGAL)检测试剂盒

ELISA 小鼠Fibronectin(mouse Fibronectin)  进口分装

CLIAKitforJo1/HRS(HumanJo-1Aibody)ELISAKit人Jo1抗体/抗组氨酰NA合成酶抗体

通用型氮含量克尔道(Kjeldahl)法定量检测试剂盒20次

ELISAKitTSGF大鼠肿瘤特异生长因子/肿瘤相关因子

HA重组甲型流感 H5N1 (A/barnswallow/HongKong/D10-1161/2010) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白 Protein

PGC-1 Alpha(peroxisome proliferator-activated receptor- Gamma coactivator 1 Alpha 0.2mgPGC-1 Alpha(peroxisome proliferator-activated receptor- Gamma coactivator 1 Alpha) 过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活子1α抗原

KNG1重组人 KNG1 / BDK / Kininogen-1 蛋白 Protein

GOPC Protein Human 重组人 GOPC / PIST 蛋白

CD55 Protein Human 重组人 CD55 / DAF 蛋白 (Fc 标签)

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GOPC Protein Human 重组人 GOPC / PIST 蛋白

HA重组甲型流感 H5N1 (A/barnswallow/HongKong/D10-1161/2010) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白 Protein

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KNG1重组人 KNG1 / BDK / Kininogen-1 蛋白 Protein

小鼠癌胚抗原(CEA)检测试剂盒 96T/48T

Rat adrenergic receptor a1A (ADRA1A) ELISA Kit 大鼠能a1A受体(ADRA1A)检测试剂盒

HumancrosslinkedN-telopeptideoftypeⅠcollagen,XELISAKit 人Ⅰ型胶原N末端肽(X)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

HumancathepsinD,cath-D检测试剂盒人组织蛋白酶D(cath-D)检测试剂盒规格：96T/48T

转基因油菜(canola)OXY235品系试剂盒20次

humansimilaocDNAsequenceBC027382ELISAKit人类似cDNA顺序BC027382检测试剂盒规格
：96T/48T

兔结肠黏膜上皮细胞兔子白三烯B4(LTB4)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

兔子白介素8(IL-8/CXCL8)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

兔子白介素6(IL-6)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

兔子白介素4(IL-4)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

注意事项
：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好
，培养液是否有漏液
、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基
、血清比例、所需细胞因子等

，确保细胞培养条件一致
，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担
。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片
，是正常现象
。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞
，900 rpm-1000 rpm离心3 min
，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞
，再900 rpm-1000 rpm离心3 min
，
，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况

，请及时和老哥俱乐部联系
，告知细胞的具体情况
，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用
。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞
。收到细胞后次传代建议1：2传代 

。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿
。不是1个T25瓶传2个10cm皿。