實驗報告 ：

一 、分離與培養 ：

1 、無菌條件下 ，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然後用PBS將此組織塊清洗2次 ，將組織剪成1mm3左右大小 ；

2 、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶） ，混懸10s ，置37℃條件下消化10min，之後用滴管吹打製成單細胞懸液 ，自然沉澱並收集上清 ，用含10% FBS培養基終止消化後4℃放置 ；

3 、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液 ，混懸10s ，置37℃消化10 min後 ，按上述方法收集上清並終止消化後4℃放置 ，重複此步驟2-3次 ，直至組織被消化 ；

4 、用200目不鏽鋼篩網過濾細胞消化液 ，1200r/min 離心10min ，棄去上清 ，沉澱細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸 ，接種於25cm2培養瓶 ，放置於37℃  ，5％CO2 培養箱中培養 ；

5 、差速貼壁1h後 ，吸出培養基 ，按實驗需要接種於6孔板中繼續培養 ；二 、免疫熒光鑒定 ：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時 ，棄去培養基 ，用溫育的PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min ；

2 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在4℃條件下 ，用0.1％Triton X-100透膜15min ；

3 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在室溫條件下 ，用4% BSA封閉細胞30min ；

4 、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗 ，然後將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜 ；

5 、PBS衝洗細胞3次 ，每次10min ，按1 ：150的比例稀釋抗α-actin的二抗 ， 37℃條件下放置1h ；

6 、用PBS衝洗3次 ，每次10min ，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像並拍照 。

細胞簡介 ：

兔脊髓神經少突膠質分離自脊髓組織 ；脊髓是細細的管束狀的神經結構 ，位於脊柱的椎管內且被脊椎保護 ；是源自腦的中樞神經係統延伸部分 。中樞神經係統的細胞依靠複雜的聯係來處理傳遞信息 。脊髓的主要功能是傳送腦與外周之間的神經信息 。人和脊椎動物中樞神經係統的一部分 ，在椎管裏麵 ，上端連接延髓，兩旁發出成對的神經 ，分布到四肢 、體壁和內髒 。脊髓的內部有一個H形（蝴蝶型）灰質區 ，主要由神經細胞構成 ；在灰質區周圍為白質區 ，主要由有髓神經纖維組成 ；脊髓是許多簡單反射的中樞 。脊髓兩旁發出許多成對的神經（稱為脊神經）分布到全身皮膚 、肌肉和內髒器官 。脊髓是周圍神經與腦之間的通路 ，也是許多簡單反射活動的低級中樞 。按脊神經的出入可把脊髓也分為相應的31節 ，31對脊神經就是由不同的脊椎發出的 。神經膠質細胞 ，簡稱膠質細胞 ，是神經組織中除神經元以外的另一大類細胞 ，也有突起 ，但無樹突和軸突之分 ，廣泛分布於中樞和周圍神經係統 。在哺乳類動物中 ，神經膠質細胞與神經元的細胞數量比例約為10 ：1 。在中樞神經係統（CNS）中的神經膠質細胞主要有星形膠質細胞 、少突膠質細胞（與前者合稱為大膠質細胞）和小膠質細胞等 。傳統認為膠質細胞屬於結締組織 ，其作用僅是連接和支持各種神經成分 ，其實神經膠質還起著分配營養物質 、參與修複和吞噬的作用，在形態 、化學特征和胚胎起源上都不同於普通結締組織 。

方法簡介 ：

實驗室分離的兔脊髓神經少突膠質采用膠原酶-聯合消化法 、神經元專用培養基培養篩選結合化學試劑抑製法製備而來 ，細胞總量約為5×10⁵cells/瓶 。

質量檢測

實驗室分離的兔脊髓神經少突膠質經GC(Galactocerebroside)免疫熒光鑒定 ，純度可達90%以上 ，且不含有HIV-1 、HBV 、HCV 、支原體 、細菌 、酵母和真菌等 。

培養信息 ：

包被條件 ：PLL（0.1mg/ml）

培養基 ：含B-27 Supplement 、PDGF-AA 、bFGF 、Penicillin 、Streptomycin等

換液頻率 ：每2-3天換液一次

生長特性 ：貼壁

細胞形態 ：梭形 、多角形

傳代特性 ：不增殖 ；不傳代

消化液 ：0.25%

培養條件 ：氣相 ：空氣 ，95% ；CO2，5%

兔脊髓神經少突膠質體外培養周期有限 ；建議使用配套的專用生長培養基及正確的操作方法來培養 ，以此保證該細胞的佳培養狀態 。

注意事項 ：

1. 收到細胞後首先觀察細胞瓶是否完好 ，培養液是否有漏液 、渾濁等現象 ，若有上述現象發生請及時和老哥俱樂部聯係 。

2. 仔細閱讀細胞說明書 ，了解細胞相關信息 ，如細胞形態 、所用培養基 、血清比例 、所需細胞因子等 ，確保細胞培養條件一致 ，若由於培養條件不一致而導致細胞出現問題 ，責任由客戶自行承擔 。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表麵 ，顯微鏡下觀察細胞狀態。因運輸問題 ，部分細胞由於溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片 ，是正常現象 。觀察好細胞狀態後 ，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置於37℃培養箱放置4-6h 。

4. 貼壁細胞可以消化 ，懸浮細胞直接混勻收集細胞 ，900 rpm-1000 rpm離心3 min ，棄上清 。加5 mL PBS重懸細胞 ，再900 rpm-1000 rpm離心3 min ， ，用新鮮的*培養基重懸細胞 ，並接種到新的培養瓶或培養皿中 ，置於培養箱中進行培養 。

5. 請客戶用相同條件的培養基用於細胞培養 。

6. 建議客戶收到細胞後前3天各拍幾張細胞照片 ，記錄細胞狀態 ，便於和我司技術部溝通交流 。由於運輸的原因 ，個別敏感細胞會出現不穩定的情況 ，請及時和老哥俱樂部聯係 ，告知細胞的具體情況 ，以便老哥俱樂部的技術人員跟蹤回訪直至問題解決 。

7. 該細胞僅供科研使用 。

8. 備注 ：運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞 ，請換用按照說明書細胞培養條件新配製的*培養基來培養細胞 。收到細胞後次傳代建議1 ：2傳代  。

9.注意 ： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿 。不是1個T25瓶傳2個10cm皿 。

公司正在出售的產品 ：

大鼠CD80分子(CD80/B7-1)檢測試劑盒  ，英文名： CD80/B7-1 ELISA Kit

Mouse ai IVIgG aibody ELISA Kit 小鼠抗IVIgG抗體檢測試劑盒

MousehepatitisBvirussurfaceaigen,HBsAgELISAKit 小鼠乙型肝表麵抗原(HBsAg)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforHumanmultidrugresistance-associatedprotein,MRPELISAKit人多藥耐藥相關蛋白

透射電鏡(TEM)鎳質載網組織樣品陽性染色試劑盒20次

ELISAKitsTLR6大鼠可溶性Toll樣受體6

FGFRL1重組小鼠 FGFRL1 / FGFR5 蛋白 Protein

CBFA1/RUNX2 (Runt-related Transcription Factor 2 0.5mgCBFA1/RUNX2 (Runt-related Transcription Factor 2) 成骨特異性轉錄因子(多肽)

KIR2DL1重組人 KIR2DL1 / CD158a 蛋白 Protein

HBEGF Protein Human 重組人 HBEGF / DTR 蛋白

CLEC4B2 Protein Rat 重組大鼠 CLEC4B2 / mDCAR1 蛋白

CBFA1/RUNX2 (Runt-related Transcription Factor 2 0.5mgCBFA1/RUNX2 (Runt-related Transcription Factor 2) 成骨特異性轉錄因子(多肽)

HBEGF Protein Human 重組人 HBEGF / DTR 蛋白

FGFRL1重組小鼠 FGFRL1 / FGFR5 蛋白 Protein

CLEC4B2 Protein Rat 重組大鼠 CLEC4B2 / mDCAR1 蛋白

KIR2DL1重組人 KIR2DL1 / CD158a 蛋白 Protein

小鼠T細胞活化連接蛋白(LAT)ELISA 試劑盒 96T/48T

Rat iggering receptor expressed on myeloid cells -1 (EM-1) ELISA Kit 大鼠髓係細胞觸發受體-1(EM-1)檢測試劑盒

HumanChorionicGonadoophin,HCGELISAKit 人絨毛膜(HCG)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

HumanClusterofdiffereiation30,CD30檢測試劑盒人CD30分子(CD30)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

組蛋白脫乙酰化酶10(HDAC10)活性比色法定量檢測試劑盒20次

humahofamilyGTPase1,RND1ELISAKit人Rho家族GTP酶1(RND1)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

兔脊髓神經少突膠質細胞兔細胞間粘附分子-1 (rabbit ICAM-1)   作用 ：   ELISA   規格 ：      進口分裝

兔幹擾素-a(rabbit IFN-a)   作用 ：   ELISA   規格 ：      進口分裝

兔幹擾素-β(rabbit IFN-β)   作用 ：   ELISA   規格 ：      進口分裝

兔幹擾素-r(rabbit IFN-r)   作用 ：   ELISA   規格 ：      進口分裝