實驗報告 ：

一 、分離與培養 ：

1 、無菌條件下 ，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織 ，然後用PBS將此組織塊清洗2次 ，將組織剪成1mm3左右大小 ；

2 、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶） ，混懸10s ，置37℃條件下消化10min ，之後用滴管吹打製成單細胞懸液 ，自然沉澱並收集上清 ，用含10% FBS培養基終止消化後4℃放置 ；

3 、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液 ，混懸10s ，置37℃消化10 min後 ，按上述方法收集上清並終止消化後4℃放置 ，重複此步驟2-3次 ，直至組織被消化 ；

4 、用200目不鏽鋼篩網過濾細胞消化液 ，1200r/min 離心10min ，棄去上清 ，沉澱細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸 ，接種於25cm2培養瓶 ，放置於37℃  ，5％CO2 培養箱中培養 ；

5 、差速貼壁1h後，吸出培養基 ，按實驗需要接種於6孔板中繼續培養 ；二 、免疫熒光鑒定 ：

1 、待心房肌細胞生長至80%融合時 ，棄去培養基 ，用溫育的PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min ；

2 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min，然後在4℃條件下 ，用0.1％Triton X-100透膜15min ；

3 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在室溫條件下 ，用4% BSA封閉細胞30min ；

4 、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗 ，然後將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜 ；

5 、PBS衝洗細胞3次 ，每次10min ，按1 ：150的比例稀釋抗α-actin的二抗 ， 37℃條件下放置1h ；

6 、用PBS衝洗3次 ，每次10min ，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像並拍照 。

細胞簡介 ：

兔肝實質分離自肝髒組織 ；肝髒是身體內以代謝功能為主的一個器官 ，並在身體裏麵起著去氧化 、儲存肝糖 、分泌性蛋白質的合成等作用 ；肝髒也製造消化係統中之膽汁。肝髒是機體內髒裏大的器官 ，位於機體中的腹部位置 ，在右側橫隔膜之下 ，位於膽囊之前端且於右邊腎髒的前方 ，胃的上方 。肝髒是機體消化係統中大的消化腺 ，為一紅棕色的V字形器官 。肝髒是尿素合成的主要器官 ，又是新陳代謝的重要器官 。肝髒在機體位置和形態結構 ：肝髒位於右上腹 ，隱藏在右側膈下和肋骨深麵 ，大部分肝為肋弓所複蓋 ，僅在腹上區 、右肋弓間露出並直接接觸腹前壁 ，肝上麵則與膈及腹前壁相接 。肝實質細胞是指具有肝功能的單位 ，是肝髒的基本組成單位之一 。肝實質細胞與主要病生理變化 ：急性肝炎 、肝硬化 、肝膿腫 。肝實質細胞屬於中高度分化細胞 ，生長營養需求高 ，在體外存活時間短 ；細胞呈圓形或多角形 ，核大而圓 ，居中 ，常染色質豐富 ，部分有雙核或多倍體核 。肝髒作為體內重要的器官，在整個物質代謝過程中具有廣泛而多樣的作用 。

方法簡介 ：

實驗室分離的兔肝實質采用混合酶灌流消化 、反複低速離心製備而來 ，細胞總量約為5×10⁵cells/瓶 。

質量檢測

實驗室分離的兔肝實質經Cytokeratin-18免疫熒光鑒定 ，純度可達90%以上 ，且不含有HIV-1 、HBV 、HCV 、支原體 、細菌 、酵母和真菌等 。

培養信息 ：

包被條件 ：鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培養基 ：含FBS 、生長添加劑 、Penicillin 、Streptomycin等

換液頻率 ：每2-3天換液一次

生長特性 ：貼壁

細胞形態 ：上皮細胞樣

傳代特性 ：可傳1代 ，不建議傳代

消化液 ：0.25%

培養條件 ：氣相 ：空氣 ，95% ；CO2，5%

兔肝實質體外培養周期有限 ；建議使用配套的專用生長培養基及正確的操作方法來培養 ，以此保證該細胞的佳培養狀態 。

注意事項 ：

1. 收到細胞後首先觀察細胞瓶是否完好 ，培養液是否有漏液 、渾濁等現象 ，若有上述現象發生請及時和老哥俱樂部聯係 。

2. 仔細閱讀細胞說明書 ，了解細胞相關信息 ，如細胞形態 、所用培養基 、血清比例 、所需細胞因子等 ，確保細胞培養條件一致 ，若由於培養條件不一致而導致細胞出現問題 ，責任由客戶自行承擔 。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表麵 ，顯微鏡下觀察細胞狀態 。因運輸問題，部分細胞由於溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片 ，是正常現象 。觀察好細胞狀態後，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置於37℃培養箱放置4-6h 。

4. 貼壁細胞可以消化 ，懸浮細胞直接混勻收集細胞 ，900 rpm-1000 rpm離心3 min ，棄上清 。加5 mL PBS重懸細胞 ，再900 rpm-1000 rpm離心3 min， ，用新鮮的*培養基重懸細胞 ，並接種到新的培養瓶或培養皿中 ，置於培養箱中進行培養 。

5. 請客戶用相同條件的培養基用於細胞培養 。

6. 建議客戶收到細胞後前3天各拍幾張細胞照片 ，記錄細胞狀態 ，便於和我司技術部溝通交流 。由於運輸的原因 ，個別敏感細胞會出現不穩定的情況 ，請及時和老哥俱樂部聯係 ，告知細胞的具體情況 ，以便老哥俱樂部的技術人員跟蹤回訪直至問題解決 。

7. 該細胞僅供科研使用 。

8. 備注 ：運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞 ，請換用按照說明書細胞培養條件新配製的*培養基來培養細胞 。收到細胞後次傳代建議1：2傳代  。

9.注意 ： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿 。不是1個T25瓶傳2個10cm皿 。

公司正在出售的產品 ：

小鼠熱休克蛋白試劑盒   小鼠熱休克蛋白試劑盒   規格型號 ：96T/48T   小鼠熱休克蛋白試劑盒 ，規格型號 ：96T/48T ，來源 ：試劑盒（進口分裝） ，產品別名 ：小鼠熱休克蛋白試劑盒 、小鼠熱休克蛋白試劑盒   保存條件 ：2-8℃   保質期 ：6個月 。

小鼠熱休克蛋白9試劑盒   小鼠熱休克蛋白9試劑盒   規格型號 ：96T/48T   小鼠熱休克蛋白9試劑盒 ，規格型號 ：96T/48T ，來源 ：試劑盒（進口分裝） ，產品別名 ：小鼠熱休克蛋白9試劑盒 、小鼠熱休克蛋白9試劑盒   保存條件 ：2-8℃   保質期 ：6個月 。

小鼠缺血修飾白蛋白試劑盒   小鼠缺血修飾白蛋白試劑盒   規格型號 ：96T/48T   小鼠缺血修飾白蛋白試劑盒 ，規格型號 ：96T/48T ，來源 ：試劑盒（進口分裝） ，產品別名 ：小鼠缺血修飾白蛋白試劑盒 、小鼠缺血修飾白蛋白試劑盒   保存條件 ：2-8℃   保質期 ：6個月 。

小鼠全段甲狀旁腺素試劑盒   小鼠全段甲狀旁腺素試劑盒   規格型號 ：96T/48T   小鼠全段甲狀旁腺素試劑盒 ，規格型號 ：96T/48T ，來源 ：試劑盒（進口分裝） ，產品別名 ：小鼠全段甲狀旁腺素試劑盒 、小鼠全段甲狀旁腺素試劑盒   保存條件 ：2-8℃   保質期 ：6個月 。

小鼠腎損傷分子1(Kim-1)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human immunoglobulin G (IgG) ELISA Kit G(IgG)試劑盒

HumanCeruloplasmin,CP/CERELISAKit 人銅藍蛋白(CP/CER)試劑盒 96T/48T 進口分裝

Equinemajorhistocompatibilitycomplex,MHC/ELA試劑盒馬主要組織相容性複合體(MHC/ELA)試劑盒規格 ：96T/48T

真菌/酵母β-(β-AMYLASE)活性PNPG5酶偶聯比色法定量檢測試劑20次

Mousecoicoopieleasinghormone,CRHELISAKit小鼠促腎上皮質激素釋放激素(CRH)試劑盒規格 ：96T/48T

IL12A & IL12B重組小鼠 IL-12 (IL12A & IL12B Heterodimer) 蛋白 Protein

Kruppel樣因子4(KLF4)重組蛋白 Recombinant Kruppel Like Factor 4, Gut (KLF4)

RNASE1重組人 RNase A / Ribonuclease A / RNASE1 蛋白 Protein

CNTF Protein Human 重組人 CNTF 蛋白

GPT2 Protein Rat 重組大鼠 GPT2 蛋白

阿黑皮素原(POMC)重組蛋白 Recombinant Proopiomelanocortin (POMC)

CNTF Protein Human 重組人 CNTF 蛋白

DDR1重組小鼠 DDR1 Kinase / MCK10 / CD167 蛋白 (Fc 標簽) Protein

IFNAR1 Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 IFNAR1 / IFNAR 蛋白

AIF1重組人 IBA1 / AIF1 蛋白 Protein

兔肝實質細胞大鼠膜聯蛋白A5(ANXA5)試劑盒  ，英文名 ： ANXA5 ELISA Kit

Mouse ypsinogen activation peptide (TAP) ELISA Kit 小鼠原激活肽(TAP)試劑盒

Ratmelanocyteaibody,MCAbELISAKit 大鼠黑色素細胞抗體(MCAb)試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforGGT(Humangammaglamylanspeptidase)ELISAKit人γ穀氨酰轉移酶

細胞甘油-3-0酸脫氫酶-2(Glycerol-3-PhosphateDehydrogenase-2)活性比色法定量試劑盒20次

RatsolubleendothelialproteinCreceptor,sEPCRELISAKit大鼠可溶性血管內皮細胞蛋白C受體(sEPCR)試劑盒規格：96T/48T