實驗報告 ：

一 、分離與培養 ：

1 、無菌條件下 ，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織 ，然後用PBS將此組織塊清洗2次 ，將組織剪成1mm3左右大小 ；

2 、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶） ，混懸10s ，置37℃條件下消化10min ，之後用滴管吹打製成單細胞懸液 ，自然沉澱並收集上清 ，用含10% FBS培養基終止消化後4℃放置 ；

3 、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液 ，混懸10s ，置37℃消化10 min後 ，按上述方法收集上清並終止消化後4℃放置 ，重複此步驟2-3次 ，直至組織被消化 ；

4 、用200目不鏽鋼篩網過濾細胞消化液 ，1200r/min 離心10min ，棄去上清 ，沉澱細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸 ，接種於25cm2培養瓶 ，放置於37℃  ，5％CO2 培養箱中培養 ；

5 、差速貼壁1h後 ，吸出培養基 ，按實驗需要接種於6孔板中繼續培養 ；二 、免疫熒光鑒定 ：

1 、待心房肌細胞生長至80%融合時 ，棄去培養基 ，用溫育的PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min ；

2 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在4℃條件下 ，用0.1％Triton X-100透膜15min ；

3 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在室溫條件下 ，用4% BSA封閉細胞30min ；

4 、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗 ，然後將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜 ；

5 、PBS衝洗細胞3次 ，每次10min ，按1 ：150的比例稀釋抗α-actin的二抗 ， 37℃條件下放置1h ；

6 、用PBS衝洗3次 ，每次10min ，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像並拍照 。

細胞簡介 ：

兔腸微血管內皮分離自腸道組織 ；腸道指的是從胃幽門至門的消化管 。腸是消化管中長的一段 ，也是功能重要的一段 。哺乳動物的腸包括小腸 、大腸和直腸3大段 。大量的消化作用和幾乎全部消化產物的吸收都是在小腸內進行的 ，大腸主要濃縮食物殘渣 ，形成糞便 ，再通過直腸經門排出體外 。腸道堪稱身體勞累的器官——每天不停地消化 、吸收食物 ，以提供足夠的養分 ，其實它的功能還遠不止此——它還是機體內大的微生態係統 。微血管是極細微的血管 ，管徑平均為6-9μm ，連於動 、靜脈之間 ，互相連接成網狀 。微血管壁薄 ，管徑較小 ，血流很慢 ，通透性大 。其功能是利於血液與組織之間進行物質交換 。其管壁主要由一層內皮細胞構成，在內皮外麵有一薄層結締組織 。另外還常可見到一種扁而有突起的細胞貼在微血管的管壁外麵 ，稱為周細胞 。

方法簡介 ：

實驗室分離的兔腸微血管內皮采用-膠原酶聯合消化法結合差速貼壁法 、並通過內皮細胞專用培養基培養篩選製備而來 ，細胞總量約為5×10⁵cells/瓶 。

質量檢測

實驗室分離的兔腸微血管內皮經CD31免疫熒光鑒定 ，純度可達90%以上 ，且不含有HIV-1 、HBV 、HCV 、支原體 、細菌 、酵母和真菌等 。

培養信息 ：

包被條件 ：PLL（0.1mg/ml） ，明膠（0.1%）

培養基 ：含FBS 、生長添加劑 、Penicillin 、Streptomycin等

換液頻率 ：每2-3天換液一次

生長特性：貼壁

細胞形態 ：內皮細胞樣

傳代特性 ：可傳2-3代

消化液 ：0.25%

培養條件 ：氣相 ：空氣 ，95% ；CO2 ，5%

兔腸微血管內皮體外培養周期有限 ；建議使用配套的專用生長培養基及正確的操作方法來培養 ，以此保證該細胞的佳培養狀態 。

注意事項 ：

1. 收到細胞後首先觀察細胞瓶是否完好 ，培養液是否有漏液 、渾濁等現象 ，若有上述現象發生請及時和老哥俱樂部聯係 。

2. 仔細閱讀細胞說明書 ，了解細胞相關信息 ，如細胞形態 、所用培養基 、血清比例 、所需細胞因子等 ，確保細胞培養條件一致 ，若由於培養條件不一致而導致細胞出現問題 ，責任由客戶自行承擔 。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表麵 ，顯微鏡下觀察細胞狀態 。因運輸問題 ，部分細胞由於溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片 ，是正常現象 。觀察好細胞狀態後 ，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置於37℃培養箱放置4-6h 。

4. 貼壁細胞可以消化 ，懸浮細胞直接混勻收集細胞 ，900 rpm-1000 rpm離心3 min ，棄上清 。加5 mL PBS重懸細胞 ，再900 rpm-1000 rpm離心3 min ， ，用新鮮的*培養基重懸細胞 ，並接種到新的培養瓶或培養皿中 ，置於培養箱中進行培養 。

5. 請客戶用相同條件的培養基用於細胞培養 。

6. 建議客戶收到細胞後前3天各拍幾張細胞照片 ，記錄細胞狀態 ，便於和我司技術部溝通交流 。由於運輸的原因 ，個別敏感細胞會出現不穩定的情況 ，請及時和老哥俱樂部聯係 ，告知細胞的具體情況 ，以便老哥俱樂部的技術人員跟蹤回訪直至問題解決 。

7. 該細胞僅供科研使用 。

8. 備注 ：運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞 ，請換用按照說明書細胞培養條件新配製的*培養基來培養細胞。收到細胞後次傳代建議1 ：2傳代  。

9.注意 ： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿 。不是1個T25瓶傳2個10cm皿 。

公司正在出售的產品 ：

人孕酮受體(PGR)ELISA 試劑盒

Human tumor vascular endothelial growth factor (TAF) ELISA Kit 人腫瘤血管生長因子(TAF)檢測試劑盒

HumanBH3ieractingdomaindeathagonist,BidELISAKit 人BH3結構域凋亡誘導蛋白(Bid)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

Humaninsulin-likegrowthfactors2,IGF-2檢測試劑盒人胰島素樣生長因子2(IGF-2)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

組織己糖激酶(HEXOKINASE)酶偶聯反應比色法定量檢測試劑盒20次

HumanLDL-ICELISAKit人低密度脂蛋白免疫複合物(LDL-IC)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

ICOS重組小鼠 ICOS / AILIM / CD278 蛋白 (Fc 標簽) Protein

α2-巨球蛋白(α2M)重組蛋白 Recombinant Alpha-2-Macroglobulin (a2M)

HNRNPR重組人 HNRNPR / HNRNP-R / HNRNP R 蛋白 (His & GST 標簽) Protein

IL9 Protein Human 重組人 IL-9 / Interleukin-9 蛋白

CDH18 Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 CDH18 / Cadherin-18 蛋白

甘露糖受體C1樣蛋白1(MRC1)重組蛋白 Recombinant Mannose Receptor C Type 1 Like Protein 1(MRC1)

IL9 Protein Human 重組人 IL-9 / Interleukin-9 蛋白

AKT3重組小鼠 AKT3 蛋白 (aa 106-479, His & GST 標簽) Protein

FCGR2B Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 CD32b / FCGR2B 蛋白

CDH1重組人 E-Cadherin / CDH1 / E-cad / CD324 蛋白 (Fc 標簽) Protein

豚鼠表皮生長因子(EGF)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human cytovillin / Ezrin protein (cytovillin/ezrin) ELISA Kit 人細胞絨毛蛋白/埃茲蛋白(cytovillin/ezrin)檢測試劑盒

HumanSS-A/RoaibodyELISAKit 人抗SS-A/Ro抗體檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

HumanCyclin-dependekinase4,CDK-4檢測試劑盒人周期素依賴性激酶4(CDK-4)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

組織GRK5激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)20次

Humanpolymyositis-sclerosisaibody,PM-Scl/PM-1ELISAKit人抗多發性肌硬皮病抗體(PM-Scl/PM-1)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

兔腸微血管內皮細胞人脂多糖結合蛋白(LBP)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

人過氧化酶(GSH-Px)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

人(GSH)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

人17-類固醇(17-KS)ELISAKit   ELISA.   96T/48T