細胞簡介 ：

兔腸神經脊幹分離自腸組織 ；神經脊幹細胞（neural crest stem cells ，NCSC） ，即外周神經係統幹細胞 ，起源於胚胎期的神經管背側 ，與中樞神經係統幹細胞在形態學上有著顯著不同 ，NCSC可表達低親和力神經營養因子受體p75NTR而不能分化出少突膠質細胞 ，而中樞神經係統幹細胞與之恰好相反 。NCSC可在不同部位分化出多種組織 ，如神經元 、神經膠質 、黑色素細胞 、內分泌細胞 、平滑肌 、骨骼肌及骨等 ，其中可特異性分化出腸神經係統中神經元和神經膠質的NCSC ，被稱為腸神經脊幹細胞（gut neural crest stem cells ，GNCSC） 。

方法簡介 ：

實驗室分離的兔腸神經脊幹采用-膠原酶聯合消化法製備而來 ，細胞總量約為5×10⁵cells/瓶。

質量檢測

實驗室分離的兔腸神經脊幹經Nestin免疫熒光鑒定 ，純度可達90%以上 ，且不含有HIV-1 、HBV 、HCV 、支原體 、細菌 、酵母和真菌等 。

培養信息 ：

培養基 ：含B-27 Supplement 、EGF 、bFGF 、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 ：每2-3天換液一次

生長特性 ：懸浮

細胞形態 ：球形

傳代特性 ：可傳1-3代左右 ；3代以內狀態佳

消化液 ：0.25%

培養條件 ：氣相：空氣 ，95% ；CO2 ，5%

兔腸神經脊幹體外培養周期有限 ；建議使用配套的專用生長培養基及正確的操作方法來培養 ，以此保證該細胞的佳培養狀態 。

實驗報告 ：

一 、分離與培養 ：

1 、無菌條件下 ，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然後用PBS將此組織塊清洗2次 ，將組織剪成1mm3左右大小 ；

2 、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶） ，混懸10s ，置37℃條件下消化10min ，之後用滴管吹打製成單細胞懸液 ，自然沉澱並收集上清 ，用含10% FBS培養基終止消化後4℃放置 ；

3 、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液 ，混懸10s ，置37℃消化10 min後 ，按上述方法收集上清並終止消化後4℃放置 ，重複此步驟2-3次 ，直至組織被消化 ；

4 、用200目不鏽鋼篩網過濾細胞消化液 ，1200r/min 離心10min ，棄去上清 ，沉澱細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸 ，接種於25cm2培養瓶 ，放置於37℃  ，5％CO2 培養箱中培養 ；

5 、差速貼壁1h後 ，吸出培養基 ，按實驗需要接種於6孔板中繼續培養 ；二 、免疫熒光鑒定 ：

1 、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養基 ，用溫育的PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min ；

2 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在4℃條件下 ，用0.1％Triton X-100透膜15min ；

3 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在室溫條件下 ，用4% BSA封閉細胞30min；

4 、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗 ，然後將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜 ；

5 、PBS衝洗細胞3次 ，每次10min ，按1 ：150的比例稀釋抗α-actin的二抗 ， 37℃條件下放置1h ；

6 、用PBS衝洗3次 ，每次10min ，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像並拍照 。

公司正在出售的產品 ：

大鼠轉化生長因子β受體Ⅰ(TGFβR1)檢測試劑盒  ，英文名 ： TGFβR1 ELISA Kit

Mouse ai cardiolipin aibody IgA (ACA-IgA) ELISA Kit 小鼠抗心0脂抗體IgA(ACA-IgA)檢測試劑盒

MouseangiotensionⅡ,ANG-ⅡELISAKit 小鼠血管緊張素Ⅱ(ANG-Ⅱ)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforHumanlatemembraneprotein-1,LMP-1ELISAKit人潛伏膜蛋白1

微管蛋白(tubulin)結合分子(bindingmolecules)檢測試劑盒20次

αFodrinIgG/IgA大鼠抗α-胞襯蛋白抗體IgG/IgA

SERPINA1A重組小鼠 Alpha 1 Antitrypsin / SerpinA1a 蛋白 Protein

堿性成纖維細胞生長因子(FGF2)重組蛋白 Recombinant Fibroblast Growth Factor 2, Basic (FGF2)

CETN2重組人 CETN2 / Centrin 2 蛋白 Protein

HIF1A Protein Human 重組人 HIF-1 alpha / HIF1A 蛋白

CD4 Protein Ferret 重組雪貂 CD4 / Leu-3 蛋白

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小鼠p53(p53)ELISA 試劑盒 96T/48T

Rat glycogen phosphorylase isoenzyme BB (GP-BB) ELISA Kit 大鼠糖原0酸化酶同工酶BB(GP-BB)檢測試劑盒

HumanAndrostenedione,ASDELISAKit 人雄(ASD)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

HumancoagulationfactorⅩ,FⅩ檢測試劑盒人Ⅹ(FⅩ)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

組蛋白轉甲基酶活性檢測試劑盒(H3-K4)20次

HumaeplicationproteinA,RPA-70ELISAKit人複製蛋白A(RPA-70)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

兔腸神經脊幹細胞兔型纖溶酶原激活物受體檢測試劑盒   兔型纖溶酶原激活物受體試劑盒   規格型號 ：96T/48T   兔型纖溶酶原激活物受體試劑盒 ，規格型號 ：96T/48T ，來源 ：檢測試劑盒（進口分裝） ，產品別名 ：兔型纖溶酶原激活物受體試劑盒 、兔型纖溶酶原激活物受體檢測試劑盒   保存條件 ：2-8℃   保質期 ：6個月 。

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兔淋巴細胞功能相關抗原3檢測試劑盒   兔淋巴細胞功能相關抗原3試劑盒   規格型號 ：96T/48T   兔淋巴細胞功能相關抗原3試劑盒 ，規格型號 ：96T/48T ，來源 ：檢測試劑盒（進口分裝） ，產品別名 ：兔淋巴細胞功能相關抗原3試劑盒 、兔淋巴細胞功能相關抗原3 檢測試劑盒   保存條件 ：2-8℃   保質期 ：6個月 。

兔粒細胞集落刺激因子檢測試劑盒   兔粒細胞集落刺激因子試劑盒   規格型號 ：96T/48T   兔粒細胞集落刺激因子試劑盒 ，規格型號 ：96T/48T ，來源 ：檢測試劑盒（進口分裝） ，產品別名 ：兔粒細胞集落刺激因子試劑盒 、兔粒細胞集落刺激因子檢測試劑盒   保存條件 ：2-8℃   保質期 ：6個月 。

注意事項 ：

1. 收到細胞後首先觀察細胞瓶是否完好 ，培養液是否有漏液 、渾濁等現象 ，若有上述現象發生請及時和老哥俱樂部聯係 。

2. 仔細閱讀細胞說明書 ，了解細胞相關信息，如細胞形態 、所用培養基 、血清比例 、所需細胞因子等 ，確保細胞培養條件一致 ，若由於培養條件不一致而導致細胞出現問題 ，責任由客戶自行承擔 。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表麵 ，顯微鏡下觀察細胞狀態 。因運輸問題 ，部分細胞由於溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片 ，是正常現象 。觀察好細胞狀態後 ，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置於37℃培養箱放置4-6h 。

4. 貼壁細胞可以消化，懸浮細胞直接混勻收集細胞 ，900 rpm-1000 rpm離心3 min ，棄上清 。加5 mL PBS重懸細胞 ，再900 rpm-1000 rpm離心3 min ， ，用新鮮的*培養基重懸細胞 ，並接種到新的培養瓶或培養皿中 ，置於培養箱中進行培養 。

5. 請客戶用相同條件的培養基用於細胞培養 。

6. 建議客戶收到細胞後前3天各拍幾張細胞照片 ，記錄細胞狀態 ，便於和我司技術部溝通交流 。由於運輸的原因 ，個別敏感細胞會出現不穩定的情況 ，請及時和老哥俱樂部聯係 ，告知細胞的具體情況 ，以便老哥俱樂部的技術人員跟蹤回訪直至問題解決 。

7. 該細胞僅供科研使用 。

8. 備注 ：運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞 ，請換用按照說明書細胞培養條件新配製的*培養基來培養細胞 。收到細胞後次傳代建議1 ：2傳代  。

9.注意 ： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿 。不是1個T25瓶傳2個10cm皿 。