細胞簡介 ：

人NK分離自人外周血單個核細胞 ；NK細胞即自然殺傷細胞（natural killer cell ，NK）是機體重要的免疫細胞，不僅與抗腫瘤 、 抗病毒感染和免疫調節有關 ，而且在某些情況下參與超敏反應和自身免疫性疾病的發生 ，能夠識別靶細胞 、殺傷介質 。NK細胞來源於骨髓淋巴樣幹細胞 ，其分化 、發育依賴於骨髓及微環境 ，主要分布於骨髓 、外周血 、肝 、脾 、肺和淋巴結 。NK細胞不同於T 、B細胞 ，是一類無需預先致敏就能非特異性殺傷腫瘤細胞和病毒感染細胞的淋巴細胞 。由於NK細胞的殺傷活性無MHC限製 ，不依賴抗體 ，因此稱為自然殺傷活性 。NK細胞胞漿豐富 ，含有較大的嗜天青顆粒 ，顆粒的含量與NK細胞的殺傷活性呈正相關 。NK細胞作用於靶細胞後殺傷作用出現早 ，在體外1小時 、體內4小時即可見到殺傷效應 。NK細胞的靶細胞主要有某些腫瘤細胞（包括部分細胞係） 、病毒感染細胞 、某些自身組織細胞（如血細胞） 、寄生蟲等 ，因此NK細胞是機體抗腫瘤 、抗感染的重要免疫因素 ，也參與第Ⅱ型超敏反應和移植物抗宿主反應。

方法簡介 ：

公司實驗室分離的人外周血NK采用取外周血 、通過密度梯度離心 、差速貼壁 、細胞因子誘導法製備而來 ，細胞總量約為5×10?cells/瓶 。

質量檢測

公司實驗室分離的人源NK經CD56免疫熒光鑒定 ，純度可達90%以上 ，且不含有HIV-1 、HBV 、HCV 、支原體 、細菌 、酵母和真菌等 。

培養信息 ：

培養基 含IL-2 、IL-15 、Penicillin 、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 懸浮

細胞形態 短梭形

傳代特性 可傳5代左右 ；3代以內狀態佳

消化液 0.25%

培養條件 氣相 ：空氣 ，95% ；CO2 ，5%

實驗報告 ：

一 、分離與培養 ：

1 、無菌條件下 ，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織 ，然後用PBS將此組織塊清洗2次 ，將組織剪成1mm3左右大小 ；

2 、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶） ，混懸10s ，置37℃條件下消化10min ，之後用滴管吹打製成單細胞懸液 ，自然沉澱並收集上清 ，用含10% FBS培養基終止消化後4℃放置 ；

3 、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液 ，混懸10s ，置37℃消化10 min後 ，按上述方法收集上清並終止消化後4℃放置 ，重複此步驟2-3次 ，直至組織被消化 ；

4 、用200目不鏽鋼篩網過濾細胞消化液 ，1200r/min 離心10min ，棄去上清 ，沉澱細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸 ，接種於25cm2培養瓶 ，放置於37℃  ，5％CO2 培養箱中培養 ；

5 、差速貼壁1h後 ，吸出培養基 ，按實驗需要接種於6孔板中繼續培養 ；二 、免疫熒光鑒定 ：

1 、待心房肌細胞生長至80%融合時 ，棄去培養基 ，用溫育的PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min ；

2 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在4℃條件下 ，用0.1％Triton X-100透膜15min ；

3 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在室溫條件下 ，用4% BSA封閉細胞30min ；

4 、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗 ，然後將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜 ；

5 、PBS衝洗細胞3次 ，每次10min ，按1 ：150的比例稀釋抗α-actin的二抗 ， 37℃條件下放置1h ；

6 、用PBS衝洗3次 ，每次10min ，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像並拍照 。

公司正在出售的產品 ：

大鼠基轉移酶(ALT)檢測試劑盒  ，英文名： ALT ELISA Kit

Mouse alpha glathione S ansferase (-GST) ELISA Kit 小鼠αS轉移酶(α-GST)檢測試劑盒

ELISA 小鼠促卵泡素(mouse FSH)  進口分裝

CLIAKitfom-1(MouseKidneyinjurymolecule1)ELISAKIT小鼠腎損傷分子1

通用型蛋白電泳考馬斯亮藍染色試劑盒10次

ELISAKitTGF-α大鼠轉化生長因子α

PRDX5重組小鼠 Peroxiredoxin 5 / PRDX5 蛋白 Protein

V-Rel網狀內皮增生病毒癌基因同源物A(RELA)重組蛋白 Recombinant V-Rel Reticuloendotheliosesis Viral Oncogene Homolog A (RELA)

RAMP3重組人 RAMP3 蛋白 (Fc 標簽) Protein

HSPD1 Protein Human 重組人 HSPD1 / HSP60 蛋白 (His & GST 標簽)

BTLA Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 BTLA 蛋白 (Fc 標簽)

幹擾素α4(IFNα4)重組蛋白 Recombinant Interferon Alpha 4 (IFNa4)

HSPD1 Protein Human 重組人 HSPD1 / HSP60 蛋白 (His & GST 標簽)

SMAD5重組小鼠 Smad5 蛋白 (His & GST 標簽) Protein

FCGR3 Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 CD16 / FCGR3 蛋白 (His & AVI 標簽), Biotinylated

GPD1重組人 GPD1 / Glycerolphosphate Dehydrogenase 1 蛋白 Protein

小鼠CD8分子(CD8)檢測試劑盒 96T/48T

Rat pepsin (Pepsin) ELISA Kit 大鼠(Pepsin)檢測試劑盒

Humancatecholamine,CAELISAKit 人兒茶酚胺(CA)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

HumanCompleme1q,C1q檢測試劑盒人補體1q(C1q)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

組織a-(a-AMYLASE)活性CNPG3比色法定量檢測試劑盒20次

Humanpunjecellaoaibody,PCA-1/YoELISAKit人抗浦肯野細胞抗體/抗Yo抗體(PCA-1/Yo)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

人源NK細胞兔骨橋素(OPN)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

兔鉤端IgG(Lebtospira)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

兔兒茶酚胺(CA)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

兔超敏C反應蛋白(hs-CRP)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

注意事項 ：

1. 收到細胞後首先觀察細胞瓶是否完好 ，培養液是否有漏液 、渾濁等現象 ，若有上述現象發生請及時和老哥俱樂部聯係 。

2. 仔細閱讀細胞說明書 ，了解細胞相關信息 ，如細胞形態 、所用培養基 、血清比例 、所需細胞因子等 ，確保細胞培養條件一致 ，若由於培養條件不一致而導致細胞出現問題 ，責任由客戶自行承擔 。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表麵，顯微鏡下觀察細胞狀態 。因運輸問題 ，部分細胞由於溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片 ，是正常現象 。觀察好細胞狀態後 ，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置於37℃培養箱放置4-6h 。

4. 貼壁細胞可以消化 ，懸浮細胞直接混勻收集細胞 ，900 rpm-1000 rpm離心3 min ，棄上清 。加5 mL PBS重懸細胞 ，再900 rpm-1000 rpm離心3 min ， ，用新鮮的*培養基重懸細胞 ，並接種到新的培養瓶或培養皿中 ，置於培養箱中進行培養 。

5. 請客戶用相同條件的培養基用於細胞培養 。

6. 建議客戶收到細胞後前3天各拍幾張細胞照片 ，記錄細胞狀態 ，便於和我司技術部溝通交流 。由於運輸的原因 ，個別敏感細胞會出現不穩定的情況 ，請及時和老哥俱樂部聯係 ，告知細胞的具體情況 ，以便老哥俱樂部的技術人員跟蹤回訪直至問題解決 。

7. 該細胞僅供科研使用 。

8. 備注 ：運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞 ，請換用按照說明書細胞培養條件新配製的*培養基來培養細胞 。收到細胞後次傳代建議1 ：2傳代  。

9.注意 ： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿 。不是1個T25瓶傳2個10cm皿 。