實驗報告 ：

一 、分離與培養：

1 、無菌條件下 ，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織 ，然後用PBS將此組織塊清洗2次 ，將組織剪成1mm3左右大小；

2 、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶） ，混懸10s ，置37℃條件下消化10min ，之後用滴管吹打製成單細胞懸液 ，自然沉澱並收集上清 ，用含10% FBS培養基終止消化後4℃放置 ；

3 、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液 ，混懸10s ，置37℃消化10 min後 ，按上述方法收集上清並終止消化後4℃放置 ，重複此步驟2-3次 ，直至組織被消化 ；

4 、用200目不鏽鋼篩網過濾細胞消化液 ，1200r/min 離心10min ，棄去上清 ，沉澱細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸 ，接種於25cm2培養瓶 ，放置於37℃  ，5％CO2 培養箱中培養 ；

5 、差速貼壁1h後 ，吸出培養基，按實驗需要接種於6孔板中繼續培養 ；二 、免疫熒光鑒定 ：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時 ，棄去培養基 ，用溫育的PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min ；

2 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在4℃條件下 ，用0.1％Triton X-100透膜15min ；

3 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在室溫條件下 ，用4% BSA封閉細胞30min ；

4 、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗 ，然後將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜 ；

5 、PBS衝洗細胞3次 ，每次10min ，按1 ：150的比例稀釋抗α-actin的二抗 ， 37℃條件下放置1h ；

6 、用PBS衝洗3次 ，每次10min ，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像並拍照 。

細胞簡介 ：

人胰腺上皮分離自胰腺組織 ；胰腺分為外分泌腺和內分泌腺兩部分 。外分泌腺由腺泡和腺管組成 ，腺泡分泌胰液 ，腺管是胰液排出的通道 。胰液中含有 、原 、脂肪酶 。胰液通過胰腺管排入十二指腸 ，有消化蛋白質 、脂肪和糖的作用 。內分泌腺由大小不同的細胞團──胰島所組成 ，胰島主要由4種細胞組成 ：α細胞 、β細胞 、γ細胞及PP細胞 。α細胞分泌胰高血糖素 ，升高血糖；β細胞分泌胰島素 ，降低血糖 ；γ細胞分泌 ，以旁分泌的方式抑製α 、β細胞的分泌 ；PP細胞分泌胰多肽 ，抑製胃腸運動 、胰液分泌和膽囊收縮 。胰腺幹細胞在發育上被認為分離自內胚層胰腺上皮 ，在隨後的胰腺發育過程中 ，胰腺幹細胞分化為胰島細胞（α 、β 、δ 、PP細胞） 、導管上皮細胞以及腺泡細胞 。胰腺組織中還存在大量的間充質來源的細胞 ，包括成纖維細胞 、血管內皮細胞 、血管平滑肌細胞以及星形細胞 ，其中以成纖維細胞占主要部分 。要離體分離培養獲得胰腺上皮細胞就要排除間充質來源的細胞 ，尤其是成纖維細胞 。目前常用的去除成纖維細胞方法有機械刮除法 、消化以及膠原酶消化法等 ，胰腺上皮細胞的病變與急慢性胰腺炎的發生具有重大意義 。

方法簡介：

公司實驗室分離的人胰腺上皮采用膠原酶分次消化法並通過上皮細胞專用培養基培養篩選製備而來 ，細胞總量約為5×10?cells/瓶 。

質量檢測

公司實驗室分離的人胰腺上皮經Cytokeratin-19免疫熒光鑒定 ，純度可達90%以上 ，且不含有HIV-1 、HBV 、HCV 、支原體 、細菌 、酵母和真菌等 。

培養信息 ：

包被條件 鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培養基 含FBS 、生長添加劑 、Penicillin 、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態 上皮細胞樣

傳代特性 可傳2-3代

消化液 0.25%

培養條件 氣相 ：空氣 ，95% ；CO2 ，5%

注意事項 ：

1. 收到細胞後首先觀察細胞瓶是否完好 ，培養液是否有漏液 、渾濁等現象 ，若有上述現象發生請及時和老哥俱樂部聯係 。

2. 仔細閱讀細胞說明書 ，了解細胞相關信息 ，如細胞形態 、所用培養基 、血清比例 、所需細胞因子等 ，確保細胞培養條件一致 ，若由於培養條件不一致而導致細胞出現問題 ，責任由客戶自行承擔 。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表麵 ，顯微鏡下觀察細胞狀態 。因運輸問題 ，部分細胞由於溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片 ，是正常現象 。觀察好細胞狀態後 ，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置於37℃培養箱放置4-6h 。

4. 貼壁細胞可以消化 ，懸浮細胞直接混勻收集細胞 ，900 rpm-1000 rpm離心3 min ，棄上清 。加5 mL PBS重懸細胞 ，再900 rpm-1000 rpm離心3 min ， ，用新鮮的*培養基重懸細胞 ，並接種到新的培養瓶或培養皿中 ，置於培養箱中進行培養 。

5. 請客戶用相同條件的培養基用於細胞培養 。

6. 建議客戶收到細胞後前3天各拍幾張細胞照片 ，記錄細胞狀態 ，便於和我司技術部溝通交流 。由於運輸的原因 ，個別敏感細胞會出現不穩定的情況 ，請及時和老哥俱樂部聯係 ，告知細胞的具體情況 ，以便老哥俱樂部的技術人員跟蹤回訪直至問題解決 。

7. 該細胞僅供科研使用 。

8. 備注 ：運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞 ，請換用按照說明書細胞培養條件新配製的*培養基來培養細胞 。收到細胞後次傳代建議1 ：2傳代  。

9.注意 ： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿 。不是1個T25瓶傳2個10cm皿 。

公司正在出售的產品 ：

小鼠凋亡相關因子配體(FASL)ELISA 試劑盒

Human iggering receptor expressed on myeloid cells -1 (EM-1) ELISA Kit 人髓係細胞觸發受體-1(EM-1)檢測試劑盒

HumanChlamydiaachomatis,CTELISAKit 人沙眼衣原體抗體(CT)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

Humanargininevasopressin,AVP檢測試劑盒人精加壓素(AVP)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

植物源性食品花生(pean)試劑盒20次

Humahymus-leukemiaaigen,TLaELISAKit人白血病抗原(TLa)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

CD33重組小鼠 CD33 / Siglec-3 蛋白 Protein

CD4分子(CD4)重組蛋白 Recombinant Cluster Of Differentiation 4 (CD4)

MSLN重組人 MSLN / Mesothelin 蛋白 (aa 296-580, Fc 標簽) Protein

IRAK4 Protein Human 重組人 IRAK4 / IRAK-4 蛋白

FAS Protein Rat 重組大鼠 FAS / CD95 / APO-1 / TNFRSF6 蛋白

CD4分子(CD4)重組蛋白 Recombinant Cluster Of Differentiation 4 (CD4)

IRAK4 Protein Human 重組人 IRAK4 / IRAK-4 蛋白

CD33重組小鼠 CD33 / Siglec-3 蛋白 Protein

FAS Protein Rat 重組大鼠 FAS / CD95 / APO-1 / TNFRSF6 蛋白

MSLN重組人 MSLN / Mesothelin 蛋白 (aa 296-580, Fc 標簽) Protein

豚鼠白介素22(IL-22)檢測試劑盒  ，英文名 ： IL-22 ELISA Kit

Human ubiquitin protein (Ub) ELISA Kit 人泛素蛋白(Ub)檢測試劑盒

RabbitIerleukin1β,IL-1βELISAKit 兔子白介素1β(IL-1β)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforBeta-EP(RabbitBeta-Endorphin)ELISAKit兔子β內啡肽

細菌樣品二維電泳裂解液用於細菌蛋白二維電泳

RabbitGlycatedhemoglobinA1c,A1cELISAKit兔糖化血紅蛋白A1c(A1c)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

人胰腺上皮細胞人粘蛋白5AC(MUC5AC)酶聯免疫吸附測定試劑盒   Human MUC5AC (Mucin 5 Subtype AC) ELISA Kit

人粘蛋白5B(MUC5B)酶聯免疫吸附測定試劑盒   Human MUC5B (Mucin 5 Subtype B) ELISA Kit

人粘蛋白7(MUC7)酶聯免疫吸附測定試劑盒   Human MUC7 (Mucin 7) ELISA Kit

人粘膜相關上皮趨化因子(MEC/CCL28)酶聯免疫吸附測定試劑盒   Human MEC/CCL28 (Mucosae Associated Epithelia Chemokine) ELISA Kit