細胞簡介 ：

人胰腺癌組織源星狀分離自患有胰腺癌病人的胰腺癌組織 ；胰腺癌是一種惡性程 度很高 ，診斷和治療都很困難的消化道惡性腫瘤 ，約90%為起源於腺管上皮的導管腺癌 。其發病率和死亡率近年來明顯上升。5年生存率<1% ，是預後差的惡性腫瘤之一 。胰腺癌早期的確診率不高 ，手術死亡率較高 ，而很低 。胰腺癌 的病因尚不十分清楚 。其發生與吸煙 、飲酒 、高脂肪和高蛋白飲食 、過量飲用咖啡 、環境汙染及遺傳因素有關 ；近年來的調查報告發現糖尿病人群中胰腺癌的發 病率明顯高於普通人群 ；也有人注意到慢性胰腺炎病人與胰腺癌的發病存在一定關係 ，發現慢性胰腺炎病人發生胰腺癌的比例明顯增高 ；另外還有許多因素與此 病的發生有一定關係 ，如職業 、環境 、地理等 。隨著醫學技術的進步 ，大部分癌症的生存率都在提高 ，例如乳腺癌 ，結直腸癌等腫瘤 ，近幾十年來 ，生存率得到 了大幅度的提升 。但胰腺癌的生存率一直停滯不前 ，缺乏有效的治療方法 ，的死亡率使其 ，近年來胰腺癌微環境的研究引起了諸多學者的重視 。胰腺癌微環境構成複雜 ，其中 ，胰腺星狀細胞是胰腺癌微環境中重要的間質細胞之一 ，在胰腺癌細胞生長 、遷移 、侵襲 、血管生成 、免疫逃逸 、轉移及化療耐藥中發揮重要的作用 。因此針對胰腺星狀細胞和胰腺癌細胞相互作用的研究有望提高胰腺癌患者的預後 。胰腺星狀細胞(pancreaticstellate cells , PSC)是一種胰腺特異性間質細胞 ，多在胰腺組織內血管和導管周圍聚集 ，環繞在腺泡的基底部位 ，正常靜比狀態下隻占胰腺細胞的4%左右 ，細胞質中含有豐富的脂滴 ，以表達膠質纖絲酸性蛋白質(glial filament acidic protein , GFAP ) 、結合蛋白(Desmin)為特征 。在胰腺組織損傷 、應激等條件下PSC被激活 ，成為一種肌成纖維細胞 ，胞質中富含的脂滴消失 ，以表達α-平滑肌肌動蛋白(α-smooth muscle actin , α-SMA)為標誌 ，能大量合成細胞外基質(extracellular matrix , ECM)和分泌多種細胞因子 。胰腺癌微環境中存在大量激活的PSC ，在胰腺癌的發生發展中起著重要作用 。PSC通過誘導胰腺癌細胞(pancreatic cancercells , PCC)上皮一間質轉變(epithelial-mesenchymaltransition , EMT)促進胰腺癌侵襲和轉移侵襲和轉移是腫瘤細胞脫離原發腫瘤灶到達靶器官的一個多步驟過程 ，眾多研究表明EMT與胰腺癌的侵襲轉移密切相關 。EMT主要的特征是上皮細胞特征丟失同時伴間質細胞特征獲得，如E一鈣茹蛋白(E-cadherin)表達下降 ，波形蛋白(Vimentin)表達上調 。karnevi等研究發現 ，PSC與PCC共培養後能夠誘導PCC上皮性細胞標誌(E-cadherin , β-catenin)丟失 ，促進間質性細胞標誌(Vimentin,Snai-1）獲得 ，表明PSC在PCC的EMT形成過程中發揮了重要的作用 。PSC參與胰腺癌進展的各個環節，而PSC活化是PSC發揮功能的重要部分 。因此 ，如能抑製PSC活化或控製PSC細胞功能將為胰腺癌綜合治療提供潛在的治療策略 。因此 ，隨著針對抑製PSC活化或其功能的研究的深入 ，有望從胰腺癌微環境角度切實提高胰腺癌的綜合治療效果 。

方法簡介 ：

實驗室分離的人胰腺癌組織源星狀采用膠原酶消化法結合密度梯度離心法製備而來製備而來 ，細胞總量約為5×10⁵cells/瓶 。

質量檢測

實驗室分離的人胰腺癌組織源星狀經α-SMA免疫熒光鑒定 ，純度可達90%以上 ，且不含有HIV-1 、HBV 、HCV 、支原體、細菌 、酵母和真菌等 。

培養信息 ：

包被條件 ：

培養基 ：含FBS 、EGF 、Insulin 、Penicillin 、Streptomycin等

換液頻率 ：每2-3天換液一次

生長特性 ：貼壁

細胞形態 ：成纖維細胞樣

傳代特性 ：可傳2-3代

消化液 ：0.25%

培養條件 ：氣相 ：空氣 ，95% ；CO2 ，5%

人胰腺癌組織源星狀體外培養周期有限 ；建議使用配套的專用生長培養基及正確的操作方法來培養 ，以此保證該細胞的佳培養狀態 。

實驗報告 ：

一 、分離與培養 ：

1 、無菌條件下 ，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織 ，然後用PBS將此組織塊清洗2次 ，將組織剪成1mm3左右大小 ；

2 、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶） ，混懸10s ，置37℃條件下消化10min ，之後用滴管吹打製成單細胞懸液，自然沉澱並收集上清 ，用含10% FBS培養基終止消化後4℃放置 ；

3 、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液 ，混懸10s ，置37℃消化10 min後 ，按上述方法收集上清並終止消化後4℃放置 ，重複此步驟2-3次 ，直至組織被消化 ；

4 、用200目不鏽鋼篩網過濾細胞消化液 ，1200r/min 離心10min ，棄去上清 ，沉澱細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸 ，接種於25cm2培養瓶 ，放置於37℃  ，5％CO2 培養箱中培養 ；

5 、差速貼壁1h後 ，吸出培養基 ，按實驗需要接種於6孔板中繼續培養 ；二 、免疫熒光鑒定 ：

1 、待心房肌細胞生長至80%融合時 ，棄去培養基 ，用溫育的PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min ；

2 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在4℃條件下 ，用0.1％Triton X-100透膜15min ；

3 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min ；

4 、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗 ，然後將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜 ；

5 、PBS衝洗細胞3次 ，每次10min ，按1 ：150的比例稀釋抗α-actin的二抗 ， 37℃條件下放置1h ；

6 、用PBS衝洗3次 ，每次10min ，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像並拍照 。

公司正在出售的產品 ：

大鼠熱休克蛋白β2(HSPβ2)檢測試劑盒  ，英文名 ： HSPβ2 ELISA Kit

Mouse vascular endothelial cell growth factor receptor 2 (VEGFR-2) ELISA Kit 小鼠血管內皮細胞生長因子受體2(VEGFR-2)檢測試劑盒

RatTissuefactorpathwayinhibitor,TFPIELISAKit 大鼠組織因子途徑抑製物(TFPI)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforGSTs(HumanglathioneS-ansferases)ELISAKit人S轉移酶

細胞超氧化物陰離子比色法定量檢測試劑盒20次

Rattumornecrosisfactor-relatedapoptosis-inducingligand3,AILR3ELISAKit大鼠腫瘤壞死因子相關凋亡誘導配體3(AIL-R3)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

PTN重組人 Pleiotrophin / PTN / HB-GAM 蛋白 Protein

Tanis/SELS (Selenoprotein S 0.5mgTanis/SELS (Selenoprotein S)又稱SELS 症負調控因子蛋白(抗原)

SERPINI1重組人 SerpinI1 / Neuroserpin 蛋白 Protein

CLEC2B Protein Human 重組人 CLEC2B / CLECSF2 蛋白 (Fc 標簽)

TNFRSF10B Protein Human 重組人 TRAIL R2 / CD262 / TNFRSF10B 蛋白 (His & Fc 標簽)

Tanis/SELS (Selenoprotein S 0.5mgTanis/SELS (Selenoprotein S)又稱SELS 症負調控因子蛋白(抗原)

CLEC2B Protein Human 重組人 CLEC2B / CLECSF2 蛋白 (Fc 標簽)

PTN重組人 Pleiotrophin / PTN / HB-GAM 蛋白 Protein

TNFRSF10B Protein Human 重組人 TRAIL R2 / CD262 / TNFRSF10B 蛋白 (His & Fc 標簽)

SERPINI1重組人 SerpinI1 / Neuroserpin 蛋白 Protein

小鼠水通道蛋白3(AQP-3)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human helical peptide (Helical Peptide) ELISA Kit 人螺旋肽(Helical Peptide)檢測試劑盒

Humanhydroxylysine,HylELISAKit 人羥賴(Hyl)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

DuckImmunoglobulinE,IgE檢測試劑盒鴨免疫球蛋白E(IgE)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

載玻片細胞組蛋白H3-K9甲基化熒光顯微鏡檢測試劑盒10/20次

MousedipeptidylpeptldaseⅣ,DPPⅣELISAKit小鼠二肽基肽酶Ⅳ(DPPⅣ)檢測試劑盒規格：96T/48T

人胰腺癌組織源星狀細胞小鼠生長激素釋放多肽(GHRP)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠生長激素（GH）檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠生長調節致癌基因β/黑素瘤生激因子(GROβ/CXCL2/MGSA)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠損傷分子1(Kim-1)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

注意事項 ：

1. 收到細胞後首先觀察細胞瓶是否完好 ，培養液是否有漏液 、渾濁等現象 ，若有上述現象發生請及時和老哥俱樂部聯係。

2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關信息 ，如細胞形態 、所用培養基 、血清比例 、所需細胞因子等 ，確保細胞培養條件一致 ，若由於培養條件不一致而導致細胞出現問題 ，責任由客戶自行承擔 。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表麵 ，顯微鏡下觀察細胞狀態 。因運輸問題 ，部分細胞由於溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片 ，是正常現象 。觀察好細胞狀態後 ，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置於37℃培養箱放置4-6h 。

4. 貼壁細胞可以消化 ，懸浮細胞直接混勻收集細胞 ，900 rpm-1000 rpm離心3 min ，棄上清 。加5 mL PBS重懸細胞 ，再900 rpm-1000 rpm離心3 min ， ，用新鮮的*培養基重懸細胞 ，並接種到新的培養瓶或培養皿中 ，置於培養箱中進行培養 。

5. 請客戶用相同條件的培養基用於細胞培養 。

6. 建議客戶收到細胞後前3天各拍幾張細胞照片 ，記錄細胞狀態 ，便於和我司技術部溝通交流 。由於運輸的原因 ，個別敏感細胞會出現不穩定的情況 ，請及時和老哥俱樂部聯係 ，告知細胞的具體情況 ，以便老哥俱樂部的技術人員跟蹤回訪直至問題解決 。

7. 該細胞僅供科研使用 。

8. 備注 ：運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞 ，請換用按照說明書細胞培養條件新配製的*培養基來培養細胞 。收到細胞後次傳代建議1 ：2傳代  。

9.注意 ： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿 。不是1個T25瓶傳2個10cm皿 。