實驗報告 ：

一 、分離與培養：

1 、無菌條件下 ，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織 ，然後用PBS將此組織塊清洗2次 ，將組織剪成1mm3左右大小 ；

2 、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶） ，混懸10s ，置37℃條件下消化10min ，之後用滴管吹打製成單細胞懸液 ，自然沉澱並收集上清 ，用含10% FBS培養基終止消化後4℃放置 ；

3 、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液 ，混懸10s ，置37℃消化10 min後 ，按上述方法收集上清並終止消化後4℃放置 ，重複此步驟2-3次 ，直至組織被消化 ；

4 、用200目不鏽鋼篩網過濾細胞消化液 ，1200r/min 離心10min ，棄去上清 ，沉澱細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸 ，接種於25cm2培養瓶 ，放置於37℃  ，5％CO2 培養箱中培養 ；

5 、差速貼壁1h後 ，吸出培養基 ，按實驗需要接種於6孔板中繼續培養；二 、免疫熒光鑒定 ：

1 、待心房肌細胞生長至80%融合時 ，棄去培養基 ，用溫育的PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min ；

2 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min ；

3 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min ；

4 、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗 ，然後將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜 ；

5 、PBS衝洗細胞3次 ，每次10min ，按1 ：150的比例稀釋抗α-actin的二抗 ， 37℃條件下放置1h；

6 、用PBS衝洗3次 ，每次10min ，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像並拍照 。

細胞簡介 ：

人胃黏膜上皮分離自胃黏膜組織 ；胃黏膜柔軟 ，活體呈橘紅色 。胃空虛時形成許多皺襞 ，充盈時變平坦 。幽門處的黏膜形成環形皺襞 ，突向腔內稱幽門瓣 。胃黏膜可分為三層 ，即上皮層（單層柱狀上皮） 、固有層（由結締組織構成 、含有大量的胃腺）和黏膜肌層（為薄層平滑肌 、排列成內環外縱）。胃黏膜上皮細胞源自胃黏膜的上皮層 ，細胞為單層柱狀上皮 ，排列整齊 ，能分泌黏液覆蓋於胃黏膜的表麵 ，防止胃酸和對胃黏膜的損害 。體外培養胃黏膜上皮細胞為研究細胞功能及致病因子 、藥物 、激素對細胞的損傷 、保護和功能調控提供了簡單而的模型 。

方法簡介：

公司實驗室分離的人胃黏膜上皮采用-膠原酶混合消化法結合差速貼壁法 ，並通過上皮細胞專用培養基培養篩選製備而來 ，細胞總量約為5×10?cells/瓶 。

質量檢測

公司實驗室分離的人胃黏膜上皮經Cytokeratin-18免疫熒光鑒定 ，純度可達90%以上 ，且不含有HIV-1 、HBV 、HCV 、支原體 、細菌 、酵母和真菌等 。

培養信息 ：

包被條件 鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培養基 含FBS、生長添加劑 、Penicillin 、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態 上皮細胞樣

傳代特性 可傳2-3代

消化液 0.25%

培養條件 氣相 ：空氣 ，95% ；CO2 ，5%

注意事項 ：

1. 收到細胞後首先觀察細胞瓶是否完好 ，培養液是否有漏液 、渾濁等現象 ，若有上述現象發生請及時和老哥俱樂部聯係 。

2. 仔細閱讀細胞說明書 ，了解細胞相關信息 ，如細胞形態 、所用培養基 、血清比例 、所需細胞因子等 ，確保細胞培養條件一致 ，若由於培養條件不一致而導致細胞出現問題 ，責任由客戶自行承擔 。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表麵 ，顯微鏡下觀察細胞狀態 。因運輸問題 ，部分細胞由於溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片 ，是正常現象 。觀察好細胞狀態後 ，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置於37℃培養箱放置4-6h 。

4. 貼壁細胞可以消化 ，懸浮細胞直接混勻收集細胞 ，900 rpm-1000 rpm離心3 min ，棄上清 。加5 mL PBS重懸細胞 ，再900 rpm-1000 rpm離心3 min ， ，用新鮮的*培養基重懸細胞 ，並接種到新的培養瓶或培養皿中 ，置於培養箱中進行培養 。

5. 請客戶用相同條件的培養基用於細胞培養 。

6. 建議客戶收到細胞後前3天各拍幾張細胞照片 ，記錄細胞狀態 ，便於和我司技術部溝通交流 。由於運輸的原因 ，個別敏感細胞會出現不穩定的情況 ，請及時和老哥俱樂部聯係 ，告知細胞的具體情況 ，以便老哥俱樂部的技術人員跟蹤回訪直至問題解決 。

7. 該細胞僅供科研使用 。

8. 備注 ：運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞 ，請換用按照說明書細胞培養條件新配製的*培養基來培養細胞 。收到細胞後次傳代建議1 ：2傳代  。

9.注意 ： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿 。不是1個T25瓶傳2個10cm皿 。

公司正在出售的產品 ：

兔子內皮抑素試劑盒   兔子內皮抑素試劑盒   規格型號 ：96T/48T   兔子內皮抑素試劑盒 ，規格型號 ：96T/48T ，來源 ：試劑盒（進口分裝），產品別名 ：兔子內皮抑素試劑盒 、兔子內皮抑素試劑盒   保存條件 ：2-8℃   保質期 ：6個月。

兔子甲狀腺素試劑盒   兔子甲狀腺素試劑盒   規格型號 ：96T/48T   兔子甲狀腺素試劑盒 ，規格型號 ：96T/48T ，來源：試劑盒（進口分裝） ，產品別名 ：兔子甲狀腺素試劑盒 、兔子甲狀腺素試劑盒   保存條件 ：2-8℃   保質期 ：6個月 。

兔子Ⅱ試劑盒   兔子Ⅱ試劑盒   規格型號 ：96T/48T   兔子Ⅱ試劑盒 ，規格型號 ：96T/48T ，來源 ：試劑盒（進口分裝） ，產品別名 ：兔子Ⅱ試劑盒 、兔子Ⅱ 試劑盒   保存條件 ：2-8℃   保質期 ：6個月 。

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小鼠白介素7(IL-7)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human melatonin (MT) ELISA Kit 人褪黑素(MT)試劑盒

Humanurokinase,UKELISAKit 人(UK)試劑盒 96T/48T 進口分裝

HumanCalfiestinalalkalinephosphatase,CIAP試劑盒人牛小腸堿性0酸酶(CIAP)試劑盒規格 ：96T/48T

幹細胞熒光定性試劑盒20次

Humansolublemyosinheavychain1,sMHC-1ELISAKit人可溶性肌球蛋白重鏈1(sMHC-1)試劑盒規格 ：96T/48T

IGFBP3重組食蟹猴 IGFBP3 蛋白 Protein

Melamine/OVA(ovalbumin 5mgMelamine/OVA(ovalbumin) 三聚胺與雞卵白蛋白偶聯物

AK4重組人 AK4 / Adenylate Kinase 4 / AK3L1 蛋白 (His & GST 標簽) Protein

GCSH Protein Human 重組人 GCSH 蛋白

CD24 Protein Mouse 重組小鼠 CD24 / Ly-52 / CD24A 蛋白 (Fc 標簽)

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GCSH Protein Human 重組人 GCSH 蛋白

IGFBP3重組食蟹猴 IGFBP3 蛋白 Protein

CD24 Protein Mouse 重組小鼠 CD24 / Ly-52 / CD24A 蛋白 (Fc 標簽)

AK4重組人 AK4 / Adenylate Kinase 4 / AK3L1 蛋白 (His & GST 標簽) Protein

人胃黏膜上皮細胞大鼠神經蛋白聚糖(NCAN)試劑盒  ，英文名 ： NCAN ELISA Kit

Mouse cardiac oponin I (cTn- I) ELISA Kit 小鼠心肌肌鈣蛋白Ⅰ(cTn-Ⅰ)試劑盒

RatMyosinELISAKit 大鼠肌球蛋白(Myosin)試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforHB-Beta(HumanBeta-subunitsofhemoglobin)ELISAKit人血紅蛋白β亞基

細胞半胱蛋白酶-4(CASPASE-4)活性熒光定量試劑盒20次

RatVitaminC,VCELISAKit大鼠C(VC)試劑盒規格 ：96T/48T