細胞簡介 ：

人胃癌成纖維分離自患有胃癌病人的胃癌組織 ；胃癌(gastric carcinoma)是起源於胃黏膜上皮的惡性腫瘤 ，在我國各種惡性腫瘤中發病率居位 ，胃癌可發生於胃的任何部位 ，其中半數以上發生於胃竇部 ，胃大彎 、胃小彎及前後壁均可受累 ，絕大多數胃癌屬於腺癌 。在胃癌侵襲和轉移的過程中 ，涉及諸多複雜的過程 ，如細胞外基質的硬化和降解 、新生血管的形成等 ，而這些過程會直接或間接的引起腫瘤微環境(Tumor mircoenvironment)的改變 。腫瘤微環境即腫瘤細胞生存的外部環境 ，由不同種類的非腫瘤性的細胞與細胞外基質(Extracellular matrix ，ECM)構成 ，包括纖維細胞 ，免疫細胞 ，內皮細胞 ，間充質幹細胞等 ，腫瘤細胞通過調控這些間質細胞 ，創造出有利於自身侵襲轉移的條件 ，從而使得腫瘤得到進展 。越來越多的證據表明 ，腫瘤微環境的改變在腫瘤進展中扮演著重要的角色 。在腫瘤微環境中 ，研究多也是主要的間質細胞是腫瘤相關成纖維細胞(cancer-associated fibroblasts, CAFs) 。CAFs 主要由腫瘤周邊的正常成纖維細胞和成纖維細胞樣細胞演化而來。胃癌成纖維細胞多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結構 ，其細胞核呈規則的卵圓形 ，核仁大而明顯 。剛分離的胃癌成纖維細胞呈圓形 、折光性良好 ，懸浮於培養基中 。30min細胞貼壁 ，其中部分開始伸出偽足 ，表現為小的突起 ；6h後細胞基本貼壁 ，伸展成梭形，胞核清晰 ，分布較均勻 ，散在生長 ，不聚集成團 ；細胞生長迅速 ，5-7天即呈融合狀態 ，細胞排列緊密 ，有的交叉重疊生長 ，平坦 、胞體較大 ，細胞質透明 ，細胞核較大 ，呈橢圓形 ，顏色淡 。細胞融合 ，並彼此連接成網狀 ；細胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布 。

方法簡介 ：

實驗室分離的人胃癌成纖維采用混合膠原酶消化法結合差速貼壁法製備而來 ，細胞總量約為5×10⁵cells/瓶 。

質量檢測

實驗室分離的人胃癌成纖維經Vimentin免疫熒光鑒定 ，純度可達90%以上 ，且不含有HIV-1 、HBV 、HCV 、支原體 、細菌 、酵母和真菌等 。

培養信息 ：

培養基 ：含FBS、生長添加劑 、Penicillin 、Streptomycin等

換液頻率 ：每2-3天換液一次

生長特性 ：貼壁

細胞形態 ：成纖維細胞樣

傳代特性 ：可傳5代左右 ；3代以內狀態佳

消化液 ：0.25%

培養條件 ：氣相 ：空氣 ，95% ；CO2 ，5%

人胃癌成纖維體外培養周期有限 ；建議使用配套的專用生長培養基及正確的操作方法來培養 ，以此保證該細胞的佳培養狀態 。

實驗報告 ：

一 、分離與培養 ：

1 、無菌條件下 ，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織 ，然後用PBS將此組織塊清洗2次 ，將組織剪成1mm3左右大小 ；

2 、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶） ，混懸10s ，置37℃條件下消化10min ，之後用滴管吹打製成單細胞懸液 ，自然沉澱並收集上清 ，用含10% FBS培養基終止消化後4℃放置 ；

3 、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液 ，混懸10s ，置37℃消化10 min後 ，按上述方法收集上清並終止消化後4℃放置 ，重複此步驟2-3次 ，直至組織被消化 ；

4 、用200目不鏽鋼篩網過濾細胞消化液 ，1200r/min 離心10min ，棄去上清 ，沉澱細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸 ，接種於25cm2培養瓶 ，放置於37℃  ，5％CO2 培養箱中培養 ；

5 、差速貼壁1h後 ，吸出培養基 ，按實驗需要接種於6孔板中繼續培養 ；二 、免疫熒光鑒定 ：

1 、待心房肌細胞生長至80%融合時 ，棄去培養基 ，用溫育的PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min ；

2 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在4℃條件下 ，用0.1％Triton X-100透膜15min ；

3 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在室溫條件下 ，用4% BSA封閉細胞30min ；

4 、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗 ，然後將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜 ；

5 、PBS衝洗細胞3次 ，每次10min ，按1 ：150的比例稀釋抗α-actin的二抗 ， 37℃條件下放置1h ；

6 、用PBS衝洗3次 ，每次10min ，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像並拍照 。

公司正在出售的產品 ：

神經營養素 4(-4)   作用 ：   ELISA   規格 ：   96T  

骨橋蛋白 ( Osteopoin)   作用 ：   ELISA   規格 ：   96T   德國 IBL

OX-40 ELISA Kit   作用 ：   ELISA   規格 ：   96T   奧地利 Bender

Human sP53 Kit   作用 ：   ELISA   規格 ：   96T   法國 Diaclone

豚鼠特異性免疫球蛋白E(sIgE)試劑盒 96T/48T

Human systemic lupus erythematosus (SLE) ELISA Kit 人係統性紅斑狼瘡(SLE)試劑盒

Humanansthyretin,TELISAKit 人轉甲狀腺素蛋白(T)試劑盒 96T/48T 進口分裝

Humanc-sis試劑盒人c-sis試劑盒規格 ：96T/48T

組織EGFR激酶活性定量試劑盒(A/B/C)20次

Humanprostacycline,PGIELISAKit人前列環素(PGI)試劑盒規格 ：96T/48T

IFNA5重組小鼠 IFNA5 / IFNaG 蛋白 (Fc 標簽) Protein

角蛋白1(KRT1)重組蛋白 Recombinant Keratin 1 (KRT1)

BIN2重組人 BIN2 / BRAP-1 蛋白 Protein

IL12RB1 Protein Human 重組人 IL12RB1 / IL12RB / CD212 蛋白

HAVCR1 Protein Canine 重組狗 KIM-1 / TIM1 / HAVCR1 蛋白

角蛋白1(KRT1)重組蛋白 Recombinant Keratin 1 (KRT1)

IL12RB1 Protein Human 重組人 IL12RB1 / IL12RB / CD212 蛋白

IFNA5重組小鼠 IFNA5 / IFNaG 蛋白 (Fc 標簽) Protein

HAVCR1 Protein Canine 重組狗 KIM-1 / TIM1 / HAVCR1 蛋白

BIN2重組人 BIN2 / BRAP-1 蛋白 Protein

人胃癌成纖維細胞大鼠γ-基受體亞基α1(GABRA1)試劑盒  ，英文名 ： GABRA1 ELISA Kit

Mice, superoxide dismase (SOD) ELISA Kit 小鼠超氧化物歧化酶(SOD)試劑盒

ELISA 小鼠基質金屬蛋白酶-2(mouse MMP-2)  進口分裝

CLIAKitforIL-17ELISAKIT大鼠白介素17

通用型亮(leucine)含量比色法定量試劑盒20次

ELISAKitADAMTS13/vWF-cp大鼠血管性血友病因子裂解蛋白酶

注意事項 ：

1. 收到細胞後首先觀察細胞瓶是否完好 ，培養液是否有漏液、渾濁等現象 ，若有上述現象發生請及時和老哥俱樂部聯係 。

2. 仔細閱讀細胞說明書 ，了解細胞相關信息 ，如細胞形態 、所用培養基 、血清比例 、所需細胞因子等 ，確保細胞培養條件一致 ，若由於培養條件不一致而導致細胞出現問題 ，責任由客戶自行承擔 。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表麵 ，顯微鏡下觀察細胞狀態 。因運輸問題 ，部分細胞由於溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片 ，是正常現象。觀察好細胞狀態後 ，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置於37℃培養箱放置4-6h 。

4. 貼壁細胞可以消化 ，懸浮細胞直接混勻收集細胞 ，900 rpm-1000 rpm離心3 min ，棄上清 。加5 mL PBS重懸細胞 ，再900 rpm-1000 rpm離心3 min ， ，用新鮮的*培養基重懸細胞 ，並接種到新的培養瓶或培養皿中 ，置於培養箱中進行培養 。

5. 請客戶用相同條件的培養基用於細胞培養 。

6. 建議客戶收到細胞後前3天各拍幾張細胞照片 ，記錄細胞狀態 ，便於和我司技術部溝通交流 。由於運輸的原因 ，個別敏感細胞會出現不穩定的情況 ，請及時和老哥俱樂部聯係 ，告知細胞的具體情況 ，以便老哥俱樂部的技術人員跟蹤回訪直至問題解決 。

7. 該細胞僅供科研使用 。

8. 備注 ：運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞 ，請換用按照說明書細胞培養條件新配製的*培養基來培養細胞 。收到細胞後次傳代建議1 ：2傳代  。

9.注意 ： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿 。不是1個T25瓶傳2個10cm皿 。