實驗報告 ：

一 、分離與培養 ：

1 、無菌條件下 ，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織 ，然後用PBS將此組織塊清洗2次 ，將組織剪成1mm3左右大小 ；

2 、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶） ，混懸10s ，置37℃條件下消化10min ，之後用滴管吹打製成單細胞懸液 ，自然沉澱並收集上清 ，用含10% FBS培養基終止消化後4℃放置 ；

3 、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液 ，混懸10s ，置37℃消化10 min後 ，按上述方法收集上清並終止消化後4℃放置 ，重複此步驟2-3次 ，直至組織被消化 ；

4 、用200目不鏽鋼篩網過濾細胞消化液 ，1200r/min 離心10min ，棄去上清 ，沉澱細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸 ，接種於25cm2培養瓶 ，放置於37℃  ，5％CO2 培養箱中培養 ；

5 、差速貼壁1h後 ，吸出培養基 ，按實驗需要接種於6孔板中繼續培養 ；二 、免疫熒光鑒定 ：

1 、待心房肌細胞生長至80%融合時 ，棄去培養基 ，用溫育的PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在4℃條件下 ，用0.1％Triton X-100透膜15min ；

3 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在室溫條件下 ，用4% BSA封閉細胞30min ；

4 、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗 ，然後將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜 ；

5 、PBS衝洗細胞3次 ，每次10min ，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗 ， 37℃條件下放置1h ；

6 、用PBS衝洗3次 ，每次10min ，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像並拍照 。

細胞簡介 ：

人輸尿管平滑肌分離自輸尿管組織；輸尿管上接腎盂 ，下連膀胱 ，是一對細長的管道 ，呈扁圓柱狀 ，位於腹膜後 ，為一肌肉粘膜所組成管狀結構 ，沿腰大肌內側的前方垂直下降進入骨盆 。輸尿管有三個狹窄部 ：一個在腎盂與輸尿管移行處(輸尿管起始處) ；一個在越過小骨盆入口處 ；後一個在進入膀胱壁的內部 。這些狹窄是結石 、及壞死組織容易停留的部位 。輸尿管——膀胱連接處有一種特殊結構 ，即瓦耳代爾鞘 ，它能有效地防止膀胱內尿液返流到輸尿管 。臨床上將輸尿管分為上 、中 、下三段 ，也可稱為腹段 、盆段 、膀胱段 。其中 ，腹段自腎盂輸尿管交界處 ，到跨越髂動脈處 ；盆段 ，自髂動脈到膀胱壁 ；膀胱段 ，自膀胱壁內斜行至膀胱粘膜 、輸尿管開口 。輸尿管管壁分為4層 ，黏膜層 、固有層 、肌層 、外膜 。黏膜層表麵為移行上皮 ，約有4-5層細胞 ；固有層由細密的結締組織構成 ，內含膠原纖維和少量彈性纖維 ；輸尿管肌層主要由內縱和外環兩層平滑肌組成 ；外膜為疏鬆結締組織 ，營養血管由外膜進入輸尿管 。輸尿管有較厚的平滑肌層 ，可作節律性的蠕動 ，使尿液不斷的流入膀胱 。因此對輸尿管平滑肌運動的研究 ，是尿動力學的重要研究方向 。

方法簡介 ：

實驗室分離的人輸尿管平滑肌采用膠原酶消化法製備而來 ，細胞總量約為5×10⁵cells/瓶 。

質量檢測

實驗室分離的人輸尿管平滑肌經α-SMA免疫熒光鑒定 ，純度可達90%以上 ，且不含有HIV-1 、HBV 、HCV 、支原體 、細菌 、酵母和真菌等 。

培養信息 ：

培養基：基礎培養基 ，含FBS 、生長添加劑 、Penicillin 、Streptomycin等

換液頻率 ：每2-3天換液一次

生長特性 ：貼壁

細胞形態 ：長梭形

傳代特性 ：可傳3-5代左右 ，3代以內狀態佳

消化液 ：0.25%

培養條件 ：氣相 ：空氣 ，95% ；CO2 ，5%

人輸尿管平滑肌體外培養周期有限 ；建議使用配套的專用生長培養基及正確的操作方法來培養 ，以此保證該細胞的佳培養狀態 。

注意事項 ：

1. 收到細胞後首先觀察細胞瓶是否完好 ，培養液是否有漏液 、渾濁等現象 ，若有上述現象發生請及時和老哥俱樂部聯係 。

2. 仔細閱讀細胞說明書 ，了解細胞相關信息 ，如細胞形態 、所用培養基 、血清比例 、所需細胞因子等 ，確保細胞培養條件一致 ，若由於培養條件不一致而導致細胞出現問題 ，責任由客戶自行承擔 。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表麵 ，顯微鏡下觀察細胞狀態 。因運輸問題 ，部分細胞由於溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片 ，是正常現象 。觀察好細胞狀態後 ，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置於37℃培養箱放置4-6h 。

4. 貼壁細胞可以消化 ，懸浮細胞直接混勻收集細胞 ，900 rpm-1000 rpm離心3 min ，棄上清 。加5 mL PBS重懸細胞 ，再900 rpm-1000 rpm離心3 min ， ，用新鮮的*培養基重懸細胞 ，並接種到新的培養瓶或培養皿中 ，置於培養箱中進行培養 。

5. 請客戶用相同條件的培養基用於細胞培養 。

6. 建議客戶收到細胞後前3天各拍幾張細胞照片 ，記錄細胞狀態 ，便於和我司技術部溝通交流 。由於運輸的原因 ，個別敏感細胞會出現不穩定的情況 ，請及時和老哥俱樂部聯係 ，告知細胞的具體情況 ，以便老哥俱樂部的技術人員跟蹤回訪直至問題解決 。

7. 該細胞僅供科研使用 。

8. 備注 ：運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞 ，請換用按照說明書細胞培養條件新配製的*培養基來培養細胞 。收到細胞後次傳代建議1 ：2傳代  。

9.注意 ： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿 。不是1個T25瓶傳2個10cm皿 。

公司正在出售的產品 ：

小鼠廋素   英文名稱 ：   Leptin   規格 ：      英文縮寫：   Leptin

小鼠廋素受體   英文名稱 ：   Leptin receptor   規格 ：      英文縮寫 ：   Leptin R

小鼠促黃體生成激素   英文名稱 ：   leinizing hormone   規格：      英文縮寫：   LH

小鼠   英文名稱 ：   Lysozyme   規格 ：      英文縮寫 ：   Lysozyme

小鼠羧甲基賴酸(CML)試劑盒 96T/48T

Human ovalbumin specific IgE (OVA sIgE) ELISA Kit 人卵清蛋白特異性IgE(OVA sIgE)試劑盒

HumanIerleukin1βconveingenzyme,ICEELISAKit 人白介素1β轉換酶(ICE)試劑盒 96T/48T 進口分裝

DeerInsulin-likegrowthfactorbindingprotein3,IGFBP-3試劑盒胰島素樣生長因子結合蛋白3(IGFBP-3)試劑盒規格 ：96T/48T

載玻片細胞線粒體複合物III蛋白表達熒光顯微鏡試劑盒10/20次

MouseEndothelialniicoxidesyhase3,eNOS-3ELISAKit小鼠內皮型合成酶3(eNOS-3)試劑盒規格 ：96T/48T

IL11RA重組小鼠 IL11RA / IL11Rα 蛋白 Protein

CD117/c-kit/SCFR 幹細胞生長因子受體/細胞表麵分化抗原(抗原 0.5mgCD117/c-kit/SCFR 幹細胞生長因子受體/細胞表麵分化抗原(抗原)

FTL重組人 FTL / ferritin, light polypeptide 蛋白 Protein

CIB2 Protein Human 重組人 CIB2 / KIP-2 蛋白

LAYN Protein Rat 重組大鼠 Layilin / LAYN 蛋白

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人輸尿管平滑肌細胞大鼠生長停滯特異性蛋白6(GAS6)試劑盒  ，英文名 ： GAS6 ELISA Kit

Mouse vitamin D3 (VD3) ELISA Kit 小鼠3(VD3)試劑盒

RatN-acetyl-β-D-glucosaminidase,NAGELISAKit 大鼠N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforHD(MouseHistoneDeacetylase)ELISAKit小鼠組織蛋白去乙酰化酶

細胞TUNEL顯色法(DAB)測定試劑盒10/20次

ELISAKitLCA扁豆凝集素