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① 组织块培养法

组织块培养是常用、简便易行和成功率较高的原代培养方法。其基本方法是将剪成的小组织团块接种于培养瓶(或皿)中，瓶壁可预先涂以胶原薄层，以利于组织块粘着于瓶壁，使周边细胞能沿瓶壁向外生长。

② 消化培养法

③ 悬浮细胞培养法

对于悬浮生长的细胞

，如白血病细胞、淋巴细胞
、骨髓细胞
、胸水和腹水中的癌细胞和免疫细胞无需消化，可采用低速离心分离
，直接培养
，或经淋巴细胞分层液分离后接种培养
。

④器官培养

器官培养是指从供体取得器官或组织块后，不进行组织分离而直接在体外的特定环境条件下培养，器官培养可保持器官组织的相对完整性
，可用于重点观察细胞间的联系、排列情况和相互影响

，以及局部环境的生物调节作用。

产品名称
：人食管癌组织源成纤维细胞

英文名称：详见说明书

组织来源
：食管癌组织

产品规格

：5×105cells/T25细胞培养瓶

人食管癌组织源成纤维分离自食管癌组织；食管癌是常见的消化道肿瘤，每年约有30万人死于食管癌。其发病率和死亡率各国差异很大
。我国是世界上食管癌高发地区之一，每年平均病死约15万人
。男多于女，发病年龄多在40岁以上。食管癌典型的症状为进行性咽下困难
，先是难咽干的食物，继而是半流质食物

，后水和唾液也不能咽下
。成纤维细胞（Fibroblast）是疏松结缔组织的主要细胞成分
，由胚胎时期的间充质细胞分化而来。成纤维细胞较大，轮廓清楚，多为突起的纺锤形或星形的扁平状结构，其细胞核呈规则的卵圆形，核仁大而明显。成纤维细胞功能活动旺盛，细胞质嗜弱碱性，具明显的蛋白质合成和分泌活动，在一定条件下
，它可以实现跟纤维细胞的互相转化；成纤维细胞对不同程度的细胞变性
、坏死和组织缺损的修复有着十分重要的作用。刚分离的表皮成纤维细胞呈圆形
、折光性良好，悬浮于培养基中。30min细胞贴壁，其中部分开始伸出伪足，表现为小的突起
；6h后细胞基本贴壁
，伸展成梭形
，胞核清晰
，分布较均匀，散在生长
，不聚集成团；细胞生长迅速，5-7天即呈融合状态，细胞排列紧密，有的交叉重叠生长
，平坦
、胞体较大，细胞质透明，细胞核较大，呈椭圆形，颜色淡。细胞融合
，并彼此连接成网状；细胞呈突起的纺锤形或星形的扁平分布
。

公司实验室分离的人食管癌组织源成纤维采用-胶原酶混合酶消化后差速贴壁制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测

公司实验室分离的人食管癌组织源成纤维经Vimentin免疫荧光鉴定
，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 成纤维细胞样

传代特性 可传5代左右；3代以内状态佳

消化液 0.25%

培养条件 气相
：空气
，95%；CO2，5%

取材→分离→培养和维持

1

、取材

人和动物细胞的取材是原代细胞培养成功的首要条件，直接影响细胞的体外培养
。

(1) 取材的基本要求

① 取材要注意新鲜和保鲜

② 应严格无菌

③ 防止机械损伤

④ 去除无用组织和避免干燥

⑤ 应注意组织类型、分化程度
、年龄等

⑥ 作好记录

2、分离

人或动物体内(或胚胎组织)由于多种细胞结合紧密，不利于各个细胞在体外培养中生长繁殖
，必须将现有的组织块充分散开

，使细胞解离出来
。

(1)悬浮细胞的分离方法

组织材料若来自血液、羊水、胸水或腹水的悬液材料
，的方法是采用1000r/min的低速离心10分钟。经离心后由于各种细胞的比重不同可在分层液中形成不同层，这样可根据需要收获目的细胞。

(2)实体组织材料的分离方法

对于实体组织材料
，由于细胞间结合紧密，为了使组织中的细胞充分分散
，形成细胞悬液

，可采用机械分散法(物理裂解)和消化分离法。

① 机械分散法

特点:简便
、快速,但对组织机械损伤大，而且细胞分散效果差,适用于处理纤维成分少的软组织
。

② 消化分离法

组织消化法是把组织剪切成较小团块(或糊状)，应用酶的生化作用和非酶的化学作用进一步使细胞间的桥连结构松动，使团块膨松，由块状变成絮状
，此时再采用机械法，用吸管吹打分散或电磁搅拌或在摇珠瓶中振荡，使细胞团块得以较充分的分散
，制成少量细胞群团和大量单个细胞的细胞悬液
，接种培养后，细胞容易贴壁生长。

兔核因子κB受体活化因子配基(RANKL)检测试剂盒

Human ypsin (ypsin) ELISA Kit 人(ypsin)检测试剂盒

HumanLymeIgGELISAKit 人莱姆IgG(Lyme-IgG)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

Humanglamicaciddecarboxylase,GAD检测试剂盒人谷脱羧酶(GAD)检测试剂盒规格：96T/48T

组织单胺氧化酶A型(MAO-A)活性化学发光法定量检测试剂盒20次

HumanMousemyeloperoxidase-aineuophilcytoplasmicaibodyIgG,MPO-ANCAIgGELISAKit人髓过氧化物酶特异性抗中性粒细胞胞质抗体IgG(MPO-ANCAIgG)检测试剂盒规格：96T/48T

LIF重组小鼠 LIF 蛋白 (Fc 标签) Protein

T-细胞可诱导共刺激分子(ICOS)重组蛋白 Recombinant Inducible T-Cell Co Stimulator (ICOS)

GABARAPL1重组人 ATG8 / GABARAPL1 蛋白 Protein

IRAK4 Protein Human 重组人 IRAK4 / IRAK-4 蛋白

CD2 Protein Cynomolgus 重组食蟹猴 CD2 蛋白 (Fc 标签)

钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱγ(CAMK2γ)重组蛋白 Recombinant Calcium/Calmodulin Dependent Protein Kinase II Gamma (CAMK2g)

IRAK4 Protein Human 重组人 IRAK4 / IRAK-4 蛋白

CHEK1重组小鼠 CHK1 / CHEK1 蛋白 (His & GST 标签) Protein

CXCL12 Protein Cynomolgus 重组食蟹猴 CXCL12 / SDF-1 蛋白 (Fc 标签)

BCL2L12重组人 BCL2L12 / BCL2-like 12 蛋白 (GST 标签) Protein

豚鼠白介素4(IL-4)检测试剂盒
，英文名

： IL-4 ELISA Kit

Human ai three iodothyronine (3) ELISA Kit 人反三甲状腺原(3)检测试剂盒

RabbitoponinⅠ,Tn-ⅠELISAKit 兔肌钙蛋白Ⅰ(Tn-Ⅰ)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforBeta-EPELISAKit大鼠β内啡肽

细菌氧化酶定性检测试剂盒20次

RabbitGranulocyteColonyStimulatingFactor,G-CSFELISAKit兔粒细胞集落刺激因子(G-CSF)检测试剂盒规格：96T/48T

人食管癌组织源成纤维细胞人粘膜相关上皮趋化因子(MEC/CCL28)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

人B细胞活化因子受体(BAFF-R)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

人血管内皮细胞生长因子受体3(VEGFR-3/Flt-4)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

人血管内皮细胞生长因子受体1(VEGFR-1/Flt1)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

视天气状况和运输距离远近,公司与客户协商后选择下述方式中的一种进行
。

1)1mL冻存细胞悬液装于1.8ml的冻存管中,置于装满干冰的泡沫保温盒中进行运输;收到细胞后请尽快解冻复苏细胞进行培养,如无法立刻进行复苏操作,冻存细胞可在-80℃的条件下保存1个月。

T-25培养瓶充满培养基后进行常温运输;收到细胞后请镜下观察细胞生长状态,如铺瓶率超过85%请立即进行传代操作,如悬浮的细胞较多,请将培养瓶至于培养箱中静置过夜以帮助未死亡的悬浮细胞能够再次贴壁。本公司的所有产品仅用于科学研究或者工业科研等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用