老哥俱乐部

实验报告
：

一
、分离与培养：

1
、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织
，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2
、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶）
，混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液
，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液
，混悬10s，置37℃消化10 min后

，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次

，直至组织被消化；

4

、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液
，1200r/min 离心10min，弃去上清
，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬
，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃
，5％CO2 培养箱中培养
；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基

，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二
、免疫荧光鉴定
：

1
、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min
；

3
、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下
，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5
、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6
、用PBS冲洗3次
，每次10min
，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照
。

细胞简介：

人肾小球内皮分离自肾组织
；肾脏是机体的重要器官

，它的基本功能是生成尿液

，借以清除体内代谢产物及某些废物
、毒物，同时经重吸收功能保留水份及其他有用物质
，如葡萄糖、蛋白质、氨基酸
、钠离子、钾离子、等
，以调节水
、电解质平衡及维护酸碱平衡
。肾脏同时还有内分泌功能，生成肾素
、促红细胞生成素、活性3、前列腺素、激肽等
，又为机体部分内分泌激素的降解场所和肾外激素的靶器官。肾脏的这些功能
，保证了机体内环境的稳定，使新陈代谢得以正常进行
。肾小球是肾元中的用于将血液过滤生成原尿的一团毛细血丛
，被鲍氏囊所包裹
，是尿液形成的重要构造。血液经由入球小动脉进入肾小球。肾小球内的微血管不像其他微血管，汇流入静脉，而是流入出球小动脉
。在肾小球内，微血管受到高压
，而加速了超滤作用（hyperfiltration）的进行。微血管中的血液经由超滤作用之后，形成滤液，渗入鲍氏囊内。肾小球与鲍氏囊合称为肾小体，肾小球的过滤速率便称为肾小球过滤率。肾小球内皮细胞是一类特殊微血管类型的细胞。细胞为圆形、多角形，单层贴壁生长；细胞质丰富，细胞核为圆形或卵圆形。肾小球内皮细胞被覆于肾小球毛细血管壁腔侧，与血流直接接触

，是肾小球滤过膜的道屏障
，可粘附细菌和白细胞
，修复基底膜，并有抗凝、抗血栓的作用
；所以，体外培养的肾小球内皮细胞在免疫学和病理生理学领域中具有重要的研究价值。

方法简介：

公司实验室分离的人肾小球内皮采用先机械研磨过不锈钢网筛分离得到肾小球
、后用胶原酶消化，结合内皮细胞专用培养基培养筛选制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶

。

质量检测

公司实验室分离的人肾小球内皮经CD31免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV
、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等
。

培养信息：

包被条件 PLL（0.1mg/ml），明胶（0.1%）

培养基 含FBS
、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 内皮细胞样

传代特性 可传2-3代

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气，95%；CO2，5%

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象
，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系
。

2. 仔细阅读细胞说明书
，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例
、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题
，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片
，是正常现象
。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h
。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清
。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，
，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流
。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况
，请及时和老哥俱乐部联系

，告知细胞的具体情况
，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞
，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞
。收到细胞后次传代建议1
：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿

。

公司正在出售的产品：

豚鼠免疫球蛋白A试剂盒   豚鼠免疫球蛋白A试剂盒   规格型号：96T/48T   豚鼠免疫球蛋白A试剂盒，规格型号

：96T/48T
，来源
：试剂盒（进口分装），产品别名：豚鼠免疫球蛋白A试剂盒
、豚鼠免疫球蛋白Aeisa试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期
：6个月。

豚鼠卵清蛋白特异性IgG试剂盒   豚鼠卵清蛋白特异性IgG试剂盒   规格型号

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：6个月。

豚鼠卵清蛋白特异性IgE试剂盒   豚鼠卵清蛋白特异性IgE试剂盒   规格型号：96T/48T   豚鼠卵清蛋白特异性IgE试剂盒，规格型号
：96T/48T，来源：试剂盒（进口分装），产品别名：豚鼠卵清蛋白特异性IgE试剂盒
、豚鼠卵清蛋白特异性IgEeisa试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月
。

豚鼠降钙素基因相关肽试剂盒   豚鼠降钙素基因相关肽试剂盒   规格型号：96T/48T   豚鼠降钙素基因相关肽试剂盒
，规格型号
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小鼠促生长激素释放激素(GHRH)ELISA 试剂盒 96T/48T

Human carbonic anhydrase 2 (CA-2) ELISA Kit 人酶2(CA-2)试剂盒

HumanoponinⅠ,Tn-ⅠELISAKit 人肌钙蛋白Ⅰ(Tn-Ⅰ)试剂盒 96T/48T 进口分装

HumanB-cellleukemia/lymphoma2,Bcl-2试剂盒人B细胞淋巴瘤因子2(Bcl-2)试剂盒规格：96T/48T

植物中性蔗糖转化酶(neualinvease)活性比色法定量试剂盒(胞质)20次

Humaenascin-R,TN-RELISAKit人肌腱蛋白R(TN-R)试剂盒规格
：96T/48T

GPA33重组小鼠 GPA33 / Glycoprotein A33 蛋白 Protein

Annexin Ⅲ peptide 膜粘连蛋白A3抗体 0.5mgAnnexin Ⅲ peptide 膜粘连蛋白A3抗体

KDR重组人 VEGFR2 / Flk-1 / CD309 / KDR 蛋白 (His & GST 标签) Protein

FLRT2 Protein Human 重组人 FLRT2 蛋白

C Protein Rat 重组大鼠 C / SLAMF2 / BCM1 蛋白

白细胞激活黏附因子(ALCAM)重组蛋白 Recombinant Activated Leukocyte Cell Adhesion Molecule (ALCAM)

FLRT2 Protein Human 重组人 FLRT2 蛋白

IFNA2重组小鼠 IFNA2 / Interferon alpha 2 蛋白 (Fc 标签) Protein

IFNA2 Protein Cynomolgus 重组食蟹猴 IFNA2 / Interferon alpha 2 蛋白

PDGFRB重组人 PDGFRB / PDGFR-1 / CD140b 蛋白 Protein

人肾小球内皮细胞大鼠速激肽受体1(TACR1)试剂盒 ，英文名： TACR1 ELISA Kit

Mouse dehydroepiandrosterone sulfate (DHEA-S) ELISA Kit 小鼠脱氢表雄酮酯(DHEA-S)试剂盒

ratProstaglandinE1,PG-E1Elisakit 大鼠前列腺素E1(PGE1)试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforHIS(HumanHistamine)ELISAKIT人组胺

细胞ROS激酶活性定量试剂盒(A/B/C)20次

ELISAKitColⅢ大鼠Ⅲ型胶原