細胞簡介 ：

人腎小管上皮分離自腎組織 ；腎髒是機體的重要器官 ，它的基本功能是生成尿液 ，借以清除體內代謝產物及某些廢物 、毒物 ，同時經重吸收功能保留水份及其他有用物質 ，如葡萄糖 、蛋白質 、氨基酸 、鈉離子 、鉀離子 、等 ，以調節水 、電解質平衡及維護酸堿平衡 。腎髒同時還有內分泌功能 ，生成腎素、促紅細胞生成素 、活性3 、前列腺素 、激肽等 ，又為機體部分內分泌激素的降解場所和腎外激素的靶器官 。腎髒的這些功能 ，保證了機體內環境的穩定 ，使新陳代謝得以正常進行 。腎小管是機體腎髒器官上與腎小囊壁層相連的一條細長上皮性小管 ，具有重吸收（reabsorption）和排泌作用 。腎小管按不同的形態結構 、分布位置和功能分成近端小管 、髓袢和遠端小管三部分 ；近端小管可分為直部和曲部 ，曲部也稱為近曲小管 ，位於皮質迷路內 ，於腎小體附近高度蟠曲 ；遠端小管曲部也稱為遠曲小管 ，位於皮質迷路內 。腎小管上皮細胞是腎小管外麵的一層細胞 ，腎小管上皮細胞的分離 、培養是研究腎髒疾病的一項重要技術 ，目前該分離方法有酶分離法 、化學分離法篩網分離法 、顯微解剖分離法 、流式細胞儀分離法等 。腎小管上皮細胞主要功能 ：①腎小管上皮細胞重吸收原尿中幾乎全部的葡萄糖和氨基酸 ；②排泌非營養物質進入終尿 ；③細胞能分泌炎症介質如細胞因子和趨化因子 ，通過產生IL-8或直接趨化白細胞參與急性炎症反應 ；④移植腎炎症和新月體腎炎中PTEpiC表達IL-2R和MHC-Ⅱ類抗原 ，這說明腎小管上皮細胞參與腎免疫損傷的發生 。隨著對腎間質纖維化機製研究的日漸加深 ，腎小管上皮細胞（RTECs）在其中的作用日益被人們重視 。因此 ，提供良好的腎小管上皮細胞模型 ，在腎小管間質疾病的發病機製和治療藥物篩選的研究中是非常重要的 。

方法簡介 ：

公司實驗室分離的人腎小管上皮 采用膠原酶消化結合差速貼壁法製備而來製備而來 ，細胞總量約為5×10?cells/瓶 。

質量檢測

公司實驗室分離的人腎小管上皮 經PCK免疫熒光鑒定 ，純度可達90%以上 ，且不含有HIV-1 、HBV 、HCV 、支原體 、細菌 、酵母和真菌等 。

培養信息 ：

包被條件 鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培養基 含FBS 、生長添加劑 、Penicillin 、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態 上皮細胞樣

傳代特性 可傳1-2代左右

消化液 0.25%

培養條件 氣相 ：空氣 ，95% ；CO2 ，5%

實驗報告 ：

一 、分離與培養 ：

1 、無菌條件下 ，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織 ，然後用PBS將此組織塊清洗2次 ，將組織剪成1mm3左右大小 ；

2 、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶） ，混懸10s ，置37℃條件下消化10min ，之後用滴管吹打製成單細胞懸液 ，自然沉澱並收集上清 ，用含10% FBS培養基終止消化後4℃放置 ；

3 、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液 ，混懸10s ，置37℃消化10 min後 ，按上述方法收集上清並終止消化後4℃放置 ，重複此步驟2-3次 ，直至組織被消化 ；

4 、用200目不鏽鋼篩網過濾細胞消化液 ，1200r/min 離心10min ，棄去上清 ，沉澱細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸 ，接種於25cm2培養瓶 ，放置於37℃  ，5％CO2 培養箱中培養 ；

5 、差速貼壁1h後 ，吸出培養基 ，按實驗需要接種於6孔板中繼續培養；二 、免疫熒光鑒定：

1 、待心房肌細胞生長至80%融合時 ，棄去培養基 ，用溫育的PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min ；

2 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在4℃條件下 ，用0.1％Triton X-100透膜15min ；

3 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在室溫條件下 ，用4% BSA封閉細胞30min ；

4 、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗 ，然後將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜 ；

5 、PBS衝洗細胞3次 ，每次10min ，按1 ：150的比例稀釋抗α-actin的二抗 ， 37℃條件下放置1h ；

6 、用PBS衝洗3次 ，每次10min ，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像並拍照 。

公司正在出售的產品 ：

上腺髓質素(ADM)試劑盒   96T/48T

神經膠質纖維酸性蛋白(GFAP)試劑盒   96T/48T

熱休克蛋白糖蛋白96(HSPgp96)試劑盒   96T/48T

腦素/腦尿肽(BNP)試劑盒   96T/48T

豚鼠生長激素(GH)試劑盒  ，英文名 ： GH ELISA Kit

Human nerve growth factor (NGF) ELISA Kit 人的神經生長因子(NGF)試劑盒

MonkeyLaminin,LNELISAKit層連蛋白/板層素(LN)試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforBLAPELISAKit(Rabbit)兔骨堿性0酸酶試劑盒

細菌耐酸(ACID-FAST)染色試劑盒50次

rabbitmacrophageinflammatoryprotein5,MIP-5ELISAKit兔子巨噬細胞性蛋白5(MIP-5)試劑盒規格 ：96T/48T

HAVCR2重組人 TIM-3 / HAVCR2 蛋白 (His & Fc 標簽) Protein

心肌肌鈣蛋白I(TNNI3)重組蛋白 Recombinant Troponin I Type 3, Cardiac (TNNI3)

NTM重組人 NTM / Neurotrimin 蛋白 Protein

IL13RA1 Protein Human 重組人 IL13RA1 蛋白

HA Protein H1N1 重組甲型流感 H1N1 (A/California/04/2009) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白

心肌肌鈣蛋白I(TNNI3)重組蛋白 Recombinant Troponin I Type 3, Cardiac (TNNI3)

IL13RA1 Protein Human 重組人 IL13RA1 蛋白

HAVCR2重組人 TIM-3 / HAVCR2 蛋白 (His & Fc 標簽) Protein

HA Protein H1N1 重組甲型流感 H1N1 (A/California/04/2009) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白

NTM重組人 NTM / Neurotrimin 蛋白 Protein

人腎小管上皮細胞大鼠速激肽受體2(TACR2)試劑盒  ，英文名 ： TACR2 ELISA Kit

Mice of homocysteine (Hcy) ELISA Kit 小鼠同型半胱(Hcy)試劑盒

ratCoicosterone,COELISAKit 大鼠皮質酮/腎上腺酮(CO)試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforHIS(MouseHistamine)ELISAKit小鼠組胺

細胞ROCK激酶總活性定量試劑盒(A/B/C)20次

ELISAKitPⅢ大鼠Ⅲ型前膠原氨基端肽

注意事項 ：

1. 收到細胞後首先觀察細胞瓶是否完好 ，培養液是否有漏液 、渾濁等現象 ，若有上述現象發生請及時和老哥俱樂部聯係 。

2. 仔細閱讀細胞說明書 ，了解細胞相關信息 ，如細胞形態 、所用培養基 、血清比例 、所需細胞因子等 ，確保細胞培養條件一致 ，若由於培養條件不一致而導致細胞出現問題 ，責任由客戶自行承擔 。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表麵 ，顯微鏡下觀察細胞狀態 。因運輸問題 ，部分細胞由於溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片 ，是正常現象 。觀察好細胞狀態後 ，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置於37℃培養箱放置4-6h 。

4. 貼壁細胞可以消化 ，懸浮細胞直接混勻收集細胞 ，900 rpm-1000 rpm離心3 min ，棄上清 。加5 mL PBS重懸細胞 ，再900 rpm-1000 rpm離心3 min ， ，用新鮮的*培養基重懸細胞 ，並接種到新的培養瓶或培養皿中 ，置於培養箱中進行培養 。

5. 請客戶用相同條件的培養基用於細胞培養 。

6. 建議客戶收到細胞後前3天各拍幾張細胞照片 ，記錄細胞狀態 ，便於和我司技術部溝通交流 。由於運輸的原因 ，個別敏感細胞會出現不穩定的情況 ，請及時和老哥俱樂部聯係 ，告知細胞的具體情況 ，以便老哥俱樂部的技術人員跟蹤回訪直至問題解決 。

7. 該細胞僅供科研使用 。

8. 備注 ：運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞 ，請換用按照說明書細胞培養條件新配製的*培養基來培養細胞 。收到細胞後次傳代建議1：2傳代  。

9.注意： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿 。不是1個T25瓶傳2個10cm皿 。