細胞簡介 ：

人乳腺癌血管周分離自乳腺癌組織 ；女性乳腺是由皮膚 、纖維組織 、乳腺腺體和脂肪組成的 ，乳腺癌是發生在乳腺腺上皮組織的惡性腫瘤 。乳腺癌中99%發生在女性，男性僅占1% 。乳腺並不是維持機體生命活動的重要器官 ，原位乳腺癌並不致命 ；但由於乳腺癌細胞喪失了正常細胞的特性 ，細胞之間連接鬆散，容易脫落 。癌細胞一旦脫落 ，遊離的癌細胞可以隨血液或淋巴液播散全身 ，形成轉移 ，危及生命 。目前 ，乳腺癌已成為威脅女性身心健康的常見腫瘤。周細胞（pericyte）又稱Rouget細胞和壁細胞 ，是一種包圍全身毛細血管和靜脈中內皮細胞的細胞 ，可以收縮 。周細胞嵌入毛細血管內皮細胞的基膜中 ，通過物理接觸和旁分泌信號與內皮細胞進行細胞通訊 ，監視和穩定內皮細胞的成熟過程 。此外 ，周細胞還具有調控毛細血管血流量 、細胞碎屑清除和吞噬以及血腦屏障滲透性的作用 ，其多功能性是目前研究的熱點之一 ，所以對血管周細胞的生物學特征 、標記物 、細胞功能等的研究都為相關研究提供基礎資料 。周細胞產生手指狀的外延以調控毛細血管的血流量 。周細胞和內皮細胞之間共同擁有一個基膜 ，基膜上有多種細胞連接 ，包括多種整合素 、神經鈣黏素 、纖連蛋白以及接合素 。它還參與毛細血管直徑的雙向調控 ；毛細血管受損時 ，周細胞還可增殖 ，分化為內皮細胞和成纖維細胞 。

方法簡介 ：

公司實驗室分離的人乳腺癌血管周采用膠原酶-聯合消化法及不鏽鋼網篩過濾法結合密度梯度離心法製備而來 ，細胞總量約為5×10?cells/瓶 。

質量檢測

公司實驗室分離的人乳腺癌血管周經alpha-SMA免疫熒光鑒定 ，純度可達90%以上 ，且不含有HIV-1 、HBV 、HCV 、支原體 、細菌 、酵母和真菌等 。

培養信息 ：

培養基 含FBS 、生長添加劑 、Penicillin 、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態 成纖維細胞樣

傳代特性 可傳5代左右 ；3代以內狀態佳

消化液 0.25%

培養條件 氣相：空氣 ，95% ；CO2 ，5%

實驗報告 ：

一 、分離與培養 ：

1 、無菌條件下 ，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織 ，然後用PBS將此組織塊清洗2次 ，將組織剪成1mm3左右大小 ；

2 、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶） ，混懸10s ，置37℃條件下消化10min ，之後用滴管吹打製成單細胞懸液 ，自然沉澱並收集上清 ，用含10% FBS培養基終止消化後4℃放置 ；

3 、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液 ，混懸10s ，置37℃消化10 min後 ，按上述方法收集上清並終止消化後4℃放置 ，重複此步驟2-3次 ，直至組織被消化 ；

4 、用200目不鏽鋼篩網過濾細胞消化液 ，1200r/min 離心10min ，棄去上清 ，沉澱細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸 ，接種於25cm2培養瓶 ，放置於37℃ ，5％CO2 培養箱中培養 ；

5 、差速貼壁1h後 ，吸出培養基 ，按實驗需要接種於6孔板中繼續培養 ；二 、免疫熒光鑒定 ：

1 、待心房肌細胞生長至80%融合時 ，棄去培養基 ，用溫育的PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min ；

2 、PBS衝洗細胞2次，每次10min ，然後在4℃條件下 ，用0.1％Triton X-100透膜15min ；

3 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在室溫條件下 ，用4% BSA封閉細胞30min ；

4 、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗 ，然後將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜 ；

5 、PBS衝洗細胞3次 ，每次10min ，按1 ：150的比例稀釋抗α-actin的二抗 ， 37℃條件下放置1h ；

6 、用PBS衝洗3次 ，每次10min ，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像並拍照 。

公司正在出售的產品 ：

大鼠SHC轉化蛋白1(SHC1)檢測試劑盒  ，英文名 ： SHC1 ELISA Kit

Mouse apoptosis inducing factor (AIF) ELISA Kit 小鼠凋亡誘導因子(AIF)檢測試劑盒

ELISA 小鼠催乳素(mouse PRL)  進口分裝

CLIAKitforIFN-Gamma(HumanIerferonGamma)ELISAKit人γ幹擾素

通用型禽鼻氣管鳥杆菌(Ornithobacteriumrhinoacheale;O)試劑盒20次

ELISAKitVD3大鼠3

CD53重組食蟹猴 CD53 蛋白 (aa 107-181, His 標簽) Protein

LPLUNC1 人鼻咽癌癌基因多肽抗原 0.5mgLPLUNC1 人鼻咽癌癌基因多肽抗原

FCGR2A重組人 CD32a / FCGR2A 蛋白 (167 Arg, His & AVI 標簽), Biotinylated Protein

GSTK1 Protein Human 重組人 GSTK1 蛋白

IL2 Protein Mouse 重組小鼠 Interleukin-2 / IL-2 蛋白

LPLUNC1 人鼻咽癌癌基因多肽抗原 0.5mgLPLUNC1 人鼻咽癌癌基因多肽抗原

GSTK1 Protein Human 重組人 GSTK1 蛋白

CD53重組食蟹猴 CD53 蛋白 (aa 107-181, His 標簽) Protein

IL2 Protein Mouse 重組小鼠 Interleukin-2 / IL-2 蛋白

FCGR2A重組人 CD32a / FCGR2A 蛋白 (167 Arg, His & AVI 標簽), Biotinylated Protein

小鼠β2微球蛋白(BMG/β2-MG)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human vitamin D3 (VD3) ELISA Kit 人3(VD3)檢測試劑盒

HumanAi-OvaryAibody,AOAbELISAKit 人抗卵巢抗體(AOAb)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

Humancholecystokinin,CCK檢測試劑盒人膽囊收縮素/腸促肽(CCK)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

紫外可見光分析20樣本

HumanSecretinELISAKit人促胰液素/胰泌素(Secretin)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

人乳腺癌血管周細胞兔抑瘤素M(OSM)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

兔血管生成素2(ANG-2)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

兔血管緊張素Ⅱ(ANG-Ⅱ)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

中文名稱   方法   規格

注意事項 ：

1. 收到細胞後首先觀察細胞瓶是否完好 ，培養液是否有漏液 、渾濁等現象 ，若有上述現象發生請及時和老哥俱樂部聯係。

2. 仔細閱讀細胞說明書 ，了解細胞相關信息 ，如細胞形態 、所用培養基 、血清比例 、所需細胞因子等 ，確保細胞培養條件一致 ，若由於培養條件不一致而導致細胞出現問題 ，責任由客戶自行承擔 。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表麵 ，顯微鏡下觀察細胞狀態。因運輸問題 ，部分細胞由於溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片 ，是正常現象 。觀察好細胞狀態後 ，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置於37℃培養箱放置4-6h 。

4. 貼壁細胞可以消化 ，懸浮細胞直接混勻收集細胞 ，900 rpm-1000 rpm離心3 min ，棄上清 。加5 mL PBS重懸細胞 ，再900 rpm-1000 rpm離心3 min ， ，用新鮮的*培養基重懸細胞 ，並接種到新的培養瓶或培養皿中 ，置於培養箱中進行培養 。

5. 請客戶用相同條件的培養基用於細胞培養 。

6. 建議客戶收到細胞後前3天各拍幾張細胞照片 ，記錄細胞狀態 ，便於和我司技術部溝通交流 。由於運輸的原因 ，個別敏感細胞會出現不穩定的情況 ，請及時和老哥俱樂部聯係 ，告知細胞的具體情況 ，以便老哥俱樂部的技術人員跟蹤回訪直至問題解決 。

7. 該細胞僅供科研使用 。

8. 備注 ：運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞 ，請換用按照說明書細胞培養條件新配製的*培養基來培養細胞 。收到細胞後次傳代建議1 ：2傳代  。

9.注意 ： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿 。不是1個T25瓶傳2個10cm皿 。