實驗報告 ：

一 、分離與培養 ：

1 、無菌條件下 ，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織 ，然後用PBS將此組織塊清洗2次 ，將組織剪成1mm3左右大小 ；

2 、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶） ，混懸10s ，置37℃條件下消化10min ，之後用滴管吹打製成單細胞懸液 ，自然沉澱並收集上清 ，用含10% FBS培養基終止消化後4℃放置 ；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液 ，混懸10s ，置37℃消化10 min後 ，按上述方法收集上清並終止消化後4℃放置 ，重複此步驟2-3次 ，直至組織被消化 ；

4 、用200目不鏽鋼篩網過濾細胞消化液 ，1200r/min 離心10min ，棄去上清 ，沉澱細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸 ，接種於25cm2培養瓶 ，放置於37℃  ，5％CO2 培養箱中培養 ；

5 、差速貼壁1h後 ，吸出培養基 ，按實驗需要接種於6孔板中繼續培養 ；二 、免疫熒光鑒定 ：

1 、待心房肌細胞生長至80%融合時 ，棄去培養基 ，用溫育的PBS衝洗細胞2次 ，每次10min，然後用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min ；

2 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在4℃條件下 ，用0.1％Triton X-100透膜15min ；

3 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在室溫條件下 ，用4% BSA封閉細胞30min ；

4 、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗 ，然後將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜 ；

5 、PBS衝洗細胞3次 ，每次10min ，按1 ：150的比例稀釋抗α-actin的二抗 ， 37℃條件下放置1h ；

6 、用PBS衝洗3次 ，每次10min ，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像並拍照 。

細胞簡介 ：

人臍動脈內皮分離自臍帶組織 ；它是臍動脈的重要結構組成細胞之一 ，在機體的正常生理過程中發揮著重要作用 。臍帶是哺乳類的連接胎兒和胎盤的管狀結構 ，臍帶中通過尿膜的血管即臍動脈和臍靜脈 ，卵黃囊的血管即臍腸係膜動脈及臍腸係膜靜脈 。在子宮中 ，子宮動脈在胎盤的母體部分出的毛細血管，與胎盤的子體部胎兒毛細血管靠近 ，在此處母體和胎兒的血液間進行CO2和O2 ，代謝產物即代謝廢物和營養物質的交換 。臍動脈將胎兒產生的廢物運送至胎盤 ，臍靜脈將O2和營養物質從胎盤運送給胎兒 。

方法簡介 ：

公司實驗室分離的人臍動脈內皮采用-膠原酶聯合消化法結合差速貼壁法 、並通過內皮細胞專用培養基培養篩選製備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶 。

質量檢測

公司實驗室分離的人臍動脈內皮經CD31免疫熒光鑒定 ，純度可達90%以上 ，且不含有HIV-1 、HBV 、HCV、支原體 、細菌 、酵母和真菌等 。

培養信息 ：

包被條件 PLL（0.1mg/ml） ，明膠（0.1%）

培養基 含FBS 、生長添加劑 、Penicillin 、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態 內皮細胞樣

傳代特性 可傳2-3代

消化液 0.25%

培養條件 氣相 ：空氣 ，95% ；CO2 ，5%

注意事項 ：

1. 收到細胞後首先觀察細胞瓶是否完好 ，培養液是否有漏液 、渾濁等現象 ，若有上述現象發生請及時和老哥俱樂部聯係 。

2. 仔細閱讀細胞說明書 ，了解細胞相關信息 ，如細胞形態 、所用培養基 、血清比例 、所需細胞因子等 ，確保細胞培養條件一致 ，若由於培養條件不一致而導致細胞出現問題 ，責任由客戶自行承擔 。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表麵 ，顯微鏡下觀察細胞狀態 。因運輸問題 ，部分細胞由於溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片 ，是正常現象 。觀察好細胞狀態後 ，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置於37℃培養箱放置4-6h。

4. 貼壁細胞可以消化 ，懸浮細胞直接混勻收集細胞 ，900 rpm-1000 rpm離心3 min ，棄上清 。加5 mL PBS重懸細胞 ，再900 rpm-1000 rpm離心3 min ， ，用新鮮的*培養基重懸細胞 ，並接種到新的培養瓶或培養皿中 ，置於培養箱中進行培養 。

5. 請客戶用相同條件的培養基用於細胞培養 。

6. 建議客戶收到細胞後前3天各拍幾張細胞照片 ，記錄細胞狀態 ，便於和我司技術部溝通交流 。由於運輸的原因 ，個別敏感細胞會出現不穩定的情況 ，請及時和老哥俱樂部聯係 ，告知細胞的具體情況 ，以便老哥俱樂部的技術人員跟蹤回訪直至問題解決 。

7. 該細胞僅供科研使用 。

8. 備注 ：運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞 ，請換用按照說明書細胞培養條件新配製的*培養基來培養細胞 。收到細胞後次傳代建議1 ：2傳代  。

9.注意 ： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿 。不是1個T25瓶傳2個10cm皿 。

公司正在出售的產品 ：

戊二 (25%)   100ml

Glaraldehydesolion   500ml

戊二 (50%)   100ml

Glaraldehydesolion   500ml

小鼠凋亡相關因子配體(FASL)ELISA 試劑盒

Human iggering receptor expressed on myeloid cells -1 (EM-1) ELISA Kit 人髓係細胞觸發受體-1(EM-1)試劑盒

HumanChlamydiaachomatis,CTELISAKit 人沙眼衣原體抗體(CT)試劑盒 進口分裝

Humanargininevasopressin,AVP試劑盒人精加壓素(AVP)試劑盒

植物源性食品花生(pean)試劑盒20次

Humahymus-leukemiaaigen,TLaELISAKit人白血病抗原(TLa)試劑盒

EPO重組小鼠 Erythropoietin / EPO 蛋白 (His 標簽) Protein

抵抗素(RETN)重組蛋白 Recombinant Resistin (RETN)

PMM2重組人 Phosphomannomutase 2 / PMM2 / CDG1 蛋白 (His 標簽) Protein

FES Protein Human 重組人 FES Kinase / Feline sarcoma oncogene 蛋白 (His & GST 標簽)

EPHA4 Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 EphA4 蛋白 (His 標簽)

5-HTR3(5-hydroxytryptamine (serotonin 0.5mg5-HTR3(5-hydroxytryptamine (serotonin) receptor 3a) 5-羥色胺受體3抗原

FES Protein Human 重組人 FES Kinase / Feline sarcoma oncogene 蛋白 (His & GST 標簽)

CFD重組小鼠 Adipsin / Complement Factor D / CFD 蛋白 (His 標簽) Protein

EFNB2 Protein Rat 重組大鼠 Ephrin-B2 / EFNB2 蛋白 (His 標簽)

EPHB4重組人 EphB4 / HTK 蛋白 (aa 563-987, His & GST 標簽) Protein

人臍動脈內皮細胞大鼠戊糖素(PTD)試劑盒  ，英文名 ： PTD ELISA Kit

Mouse ezrin / dear cyclophilin A (CyPA) ELISA Kit 小鼠嗜環蛋白/親環素A(CyPA)試劑盒

MouseIerleukin27,IL-27ELISAKit 小鼠白介素27(IL-27)試劑盒 進口分裝

CLIAKitforHSP-20(HumanHeatShockProtein20)ELISAKit人熱休克蛋白20

細胞MKK6激酶活性定量試劑盒(A/B/C)20次

ELISAKitIL-12/P70大鼠白介素12