老哥俱乐部

实验报告：

一
、分离与培养
：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小
；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min

，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3
、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液
，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置
，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4
、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min
，弃去上清
，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶
，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养
；

5
、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二
、免疫荧光鉴定
：

1

、待心房肌细胞生长至80%融合时
，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次

，每次10min，然后在4℃条件下
，用0.1％Triton X-100透膜15min

；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5
、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1
：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min
，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

细胞简介
：

人脐动脉内皮分离自脐带组织；它是脐动脉的重要结构组成细胞之一，在机体的正常生理过程中发挥着重要作用
。脐带是哺乳类的连接胎儿和胎盘的管状结构，脐带中通过尿膜的血管即脐动脉和脐静脉，卵黄囊的血管即脐肠系膜动脉及脐肠系膜静脉

。在子宫中，子宫动脉在胎盘的母体部分出的毛细血管，与胎盘的子体部胎儿毛细血管靠近，在此处母体和胎儿的血液间进行CO2和O2，代谢产物即代谢废物和营养物质的交换。脐动脉将胎儿产生的废物运送至胎盘，脐静脉将O2和营养物质从胎盘运送给胎儿。

方法简介：

公司实验室分离的人脐动脉内皮采用-胶原酶联合消化法结合差速贴壁法、并通过内皮细胞专用培养基培养筛选制备而来
，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测

公司实验室分离的人脐动脉内皮经CD31免疫荧光鉴定

，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1
、HBV
、HCV
、支原体、细菌
、酵母和真菌等。

培养信息：

包被条件 PLL（0.1mg/ml）
，明胶（0.1%）

培养基 含FBS、生长添加剂

、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 内皮细胞样

传代特性 可传2-3代

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气，95%

；CO2
，5%

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书
，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基
、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致
，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担
。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题
，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后
，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞
，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，
，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中
，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流
。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况
，请及时和老哥俱乐部联系

，告知细胞的具体情况
，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注
：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞
。收到细胞后次传代建议1
：2传代 
。

9.注意
： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿
。不是1个T25瓶传2个10cm皿。

公司正在出售的产品：

戊二 (25%)   100ml

Glaraldehydesolion   500ml

戊二 (50%)   100ml

Glaraldehydesolion   500ml

小鼠凋亡相关因子配体(FASL)ELISA 试剂盒

Human iggering receptor expressed on myeloid cells -1 (EM-1) ELISA Kit 人髓系细胞触发受体-1(EM-1)试剂盒

HumanChlamydiaachomatis,CTELISAKit 人沙眼衣原体抗体(CT)试剂盒 进口分装

Humanargininevasopressin,AVP试剂盒人精加压素(AVP)试剂盒

植物源性食品花生(pean)试剂盒20次

Humahymus-leukemiaaigen,TLaELISAKit人白血病抗原(TLa)试剂盒

EPO重组小鼠 Erythropoietin / EPO 蛋白 (His 标签) Protein

抵抗素(RETN)重组蛋白 Recombinant Resistin (RETN)

PMM2重组人 Phosphomannomutase 2 / PMM2 / CDG1 蛋白 (His 标签) Protein

FES Protein Human 重组人 FES Kinase / Feline sarcoma oncogene 蛋白 (His & GST 标签)

EPHA4 Protein Cynomolgus 重组食蟹猴 EphA4 蛋白 (His 标签)

5-HTR3(5-hydroxytryptamine (serotonin 0.5mg5-HTR3(5-hydroxytryptamine (serotonin) receptor 3a) 5-羟色胺受体3抗原

FES Protein Human 重组人 FES Kinase / Feline sarcoma oncogene 蛋白 (His & GST 标签)

CFD重组小鼠 Adipsin / Complement Factor D / CFD 蛋白 (His 标签) Protein

EFNB2 Protein Rat 重组大鼠 Ephrin-B2 / EFNB2 蛋白 (His 标签)

EPHB4重组人 EphB4 / HTK 蛋白 (aa 563-987, His & GST 标签) Protein

人脐动脉内皮细胞大鼠戊糖素(PTD)试剂盒 ，英文名： PTD ELISA Kit

Mouse ezrin / dear cyclophilin A (CyPA) ELISA Kit 小鼠嗜环蛋白/亲环素A(CyPA)试剂盒

MouseIerleukin27,IL-27ELISAKit 小鼠白介素27(IL-27)试剂盒 进口分装

CLIAKitforHSP-20(HumanHeatShockProtein20)ELISAKit人热休克蛋白20

细胞MKK6激酶活性定量试剂盒(A/B/C)20次

ELISAKitIL-12/P70大鼠白介素12