細胞簡介 ：

人臍帶血造血幹分離自臍帶血 ；臍帶血是胎兒娩出 、臍帶結紮並離斷後殘留在胎盤和臍帶中的血液 。近十幾年的研究發現 ，臍帶血中含有可以重建造血和免疫係統的造血幹細胞 ，可用於造血幹細胞移植 ，因此 ，臍帶血已成為造血幹細胞的重要來源 。臍帶血中含有大量的幹細胞 ，幹細胞是生命的種子 ，它會分化成機體的各種細胞 ，結出各種不同的果實——血液細胞 、神經細胞 、骨骼細胞等 。幹細胞是具有自我更新 、高度增殖和多項分化潛能的細胞群體 ；這些細胞可以通過分裂維持自身細胞的特性和數量 ，又可進一步分化為各種組織細胞 ，從而在組織修複等方麵發揮積極作用 。造血幹細胞具有自我更新能力並能分化為各種血細胞的前提細胞 ，終生成各種血細胞成分 ，包括紅細胞 ，白細胞和血小板 。造血幹細胞需要根據機體的生理需求適時的補充血液係統各個成熟細胞組分 。同時在損傷 、炎症等應激狀態下 ，造血幹細胞也扮演著調節和維持體內血液係統各個細胞組分的生理平衡的角色 。臨床治療中 ，造血幹細胞移植廣泛應用於血液係統疾病以及自身免疫疾病 ，在其它實體瘤的治療中 ，比如淋巴瘤 ，生殖細胞瘤 ，乳腺癌 ，小細胞肺癌 ，主要應用於常規治療失敗或複發難治以及具有不良預後因素的患者 。造血幹細胞以不對稱有絲分裂方式進行增殖 ，一個幹細胞分裂產生兩個子細胞 ，一個分化為造血祖細胞 ，另一個則保持幹細胞特征 。造血幹細胞在不斷體外培養產生大量造血祖細胞同時 ，保持自己既不增殖也不分化 。體外培養微環境合適 ，造血幹細胞可持續維持培養 60 天左右 。 造血幹細胞體外增殖培養需要基質細胞滋養（滋養層細胞），缺少滋養層細胞不增殖 ，無法長期培養 ，本產品為收集培養好的造血幹懸浮細胞灌裝發貨 ，不包含滋養層 ，因此收貨後建議盡快實驗 。

方法簡介 ：

實驗室分離的人臍帶血造血幹采用采集臍帶血 、密度梯度離心 、差速貼壁法結合培養基篩選製備而來 ，細胞總量約為5×10⁵cells/瓶 。

質量檢測

實驗室分離的人臍帶血造血幹經CD34免疫熒光鑒定 ，純度可達90%以上 ，且不含有HIV-1 、HBV 、HCV 、支原體 、細菌 、酵母和真菌等。

培養信息 ：

培養基 ：含FBS 、SCF 、IL-3 、TPO 、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 ：每2-3天換液一次

生長特性 ：懸浮

細胞形態 ：圓形

傳代特性 ：不建議傳代

培養條件 ：氣相 ：空氣 ，95% ；CO2，5%

人臍帶血造血幹體外培養周期有限 ；建議使用配套的專用生長培養基及正確的操作方法來培養 ，以此保證該細胞的佳培養狀態 。

實驗報告 ：

一、分離與培養 ：

1 、無菌條件下 ，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織 ，然後用PBS將此組織塊清洗2次 ，將組織剪成1mm3左右大小 ；

2 、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶） ，混懸10s ，置37℃條件下消化10min，之後用滴管吹打製成單細胞懸液 ，自然沉澱並收集上清 ，用含10% FBS培養基終止消化後4℃放置 ；

3 、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液 ，混懸10s ，置37℃消化10 min後 ，按上述方法收集上清並終止消化後4℃放置 ，重複此步驟2-3次 ，直至組織被消化 ；

4 、用200目不鏽鋼篩網過濾細胞消化液 ，1200r/min 離心10min ，棄去上清 ，沉澱細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸 ，接種於25cm2培養瓶 ，放置於37℃  ，5％CO2 培養箱中培養 ；

5、差速貼壁1h後 ，吸出培養基 ，按實驗需要接種於6孔板中繼續培養 ；二 、免疫熒光鑒定 ：

1 、待心房肌細胞生長至80%融合時 ，棄去培養基 ，用溫育的PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min ；

2 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在4℃條件下 ，用0.1％Triton X-100透膜15min ；

3 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在室溫條件下 ，用4% BSA封閉細胞30min ；

4 、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗 ，然後將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜 ；

5 、PBS衝洗細胞3次 ，每次10min ，按1 ：150的比例稀釋抗α-actin的二抗 ， 37℃條件下放置1h ；

6 、用PBS衝洗3次 ，每次10min ，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像並拍照 。

公司正在出售的產品 ：

人載脂蛋白A1(apo-A1)ELISA 試劑盒

Human tumor associated aigen (TAA) ELISA Kit 人腫瘤相關抗原(TAA)檢測試劑盒

HumanCaspase3,Casp-3ELISAKit 人胱天蛋白酶3(Casp-3)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

Humaninsulin-likegrowthfactors1,IGF-1檢測試劑盒人胰島素樣生長因子1(IGF-1)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

組織基質金屬蛋白酶(MMP-9)明膠法比色定量檢測試劑盒20次

HumanLebtospiraIgMELISAKit人鉤端IgM(Lebtospira)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

HA重組甲型流感 H3N2 (A/Perth/16/2009) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白 Protein

PR (Progestogerone receptor 0.5mgPR (Progestogerone receptor) 孕激素受體(抗原)

ABL1重組人 ABL1 / JTK7 / p150 蛋白 (GST 標簽) Protein

INS Protein Human 重組人 Insulin / INS 蛋白

DLL4 Protein Human 重組人 DLL4 蛋白 (Fc 標簽)

PR (Progestogerone receptor 0.5mgPR (Progestogerone receptor) 孕激素受體(抗原)

INS Protein Human 重組人 Insulin / INS 蛋白

HA重組甲型流感 H3N2 (A/Perth/16/2009) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白 Protein

DLL4 Protein Human 重組人 DLL4 蛋白 (Fc 標簽)

ABL1重組人 ABL1 / JTK7 / p150 蛋白 (GST 標簽) Protein

豚鼠白介素6(IL-6)ELISA 試劑盒 96T/48T

Rat angiotensinogen (aGT) ELISA Kit 大鼠血管緊張素原(aGT)檢測試劑盒

HumanAi-proteinase3aibodyIgG,PR3Ab-IgGELISAKit 人抗蛋白酶3抗體IgG(PR3Ab-IgG)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

HumancyclophilinA,CyPA檢測試劑盒人嗜環蛋白/親環素A(CyPA)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

組織GSK3激酶總活性定量檢測試劑盒(A/B/C)20次

HumanPolyADPribosepolymerase,PARPELISAKit人多聚ADP核糖聚合酶(PARP)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

人臍帶血造血幹細胞人整合素連接激酶1(ILK-1)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

人細胞色素P450c21B/21-羥化酶(CYP21B)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

人細胞色素P450c21A/21-羥化酶(CYP21A)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

人末端脫氧核苷酸轉移酶(TdT)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

注意事項 ：

1. 收到細胞後首先觀察細胞瓶是否完好 ，培養液是否有漏液 、渾濁等現象 ，若有上述現象發生請及時和老哥俱樂部聯係。

2. 仔細閱讀細胞說明書 ，了解細胞相關信息 ，如細胞形態 、所用培養基 、血清比例 、所需細胞因子等 ，確保細胞培養條件一致 ，若由於培養條件不一致而導致細胞出現問題 ，責任由客戶自行承擔 。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表麵 ，顯微鏡下觀察細胞狀態 。因運輸問題 ，部分細胞由於溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片 ，是正常現象 。觀察好細胞狀態後 ，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置於37℃培養箱放置4-6h 。

4. 貼壁細胞可以消化 ，懸浮細胞直接混勻收集細胞 ，900 rpm-1000 rpm離心3 min ，棄上清 。加5 mL PBS重懸細胞 ，再900 rpm-1000 rpm離心3 min ， ，用新鮮的*培養基重懸細胞 ，並接種到新的培養瓶或培養皿中 ，置於培養箱中進行培養 。

5. 請客戶用相同條件的培養基用於細胞培養 。

6. 建議客戶收到細胞後前3天各拍幾張細胞照片 ，記錄細胞狀態 ，便於和我司技術部溝通交流 。由於運輸的原因 ，個別敏感細胞會出現不穩定的情況 ，請及時和老哥俱樂部聯係 ，告知細胞的具體情況 ，以便老哥俱樂部的技術人員跟蹤回訪直至問題解決 。

7. 該細胞僅供科研使用 。

8. 備注 ：運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞 ，請換用按照說明書細胞培養條件新配製的*培養基來培養細胞 。收到細胞後次傳代建議1 ：2傳代  。

9.注意 ： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿 。不是1個T25瓶傳2個10cm皿 。