實驗報告 ：

一 、分離與培養 ：

1 、無菌條件下 ，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織 ，然後用PBS將此組織塊清洗2次 ，將組織剪成1mm3左右大小 ；

2 、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶） ，混懸10s ，置37℃條件下消化10min ，之後用滴管吹打製成單細胞懸液 ，自然沉澱並收集上清 ，用含10% FBS培養基終止消化後4℃放置 ；

3 、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液 ，混懸10s ，置37℃消化10 min後 ，按上述方法收集上清並終止消化後4℃放置 ，重複此步驟2-3次 ，直至組織被消化 ；

4 、用200目不鏽鋼篩網過濾細胞消化液 ，1200r/min 離心10min ，棄去上清 ，沉澱細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸 ，接種於25cm2培養瓶 ，放置於37℃  ，5％CO2 培養箱中培養 ；

5 、差速貼壁1h後 ，吸出培養基 ，按實驗需要接種於6孔板中繼續培養 ；二 、免疫熒光鑒定 ：

1 、待心房肌細胞生長至80%融合時 ，棄去培養基 ，用溫育的PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min ；

2 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在4℃條件下 ，用0.1％Triton X-100透膜15min ；

3 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在室溫條件下 ，用4% BSA封閉細胞30min ；

4 、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗 ，然後將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜 ；

5 、PBS衝洗細胞3次 ，每次10min ，按1 ：150的比例稀釋抗α-actin的二抗 ， 37℃條件下放置1h ；

6 、用PBS衝洗3次 ，每次10min ，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像並拍照 。

細胞簡介 ：

人臍帶血單核分離自臍帶血 ；臍帶血是胎兒娩出 、臍帶結紮並離斷後殘留在胎盤和臍帶中的血液 。近十幾年的研究發現 ，臍帶血中含有可以重建造血和免疫係統的造血幹細胞 ，可用於造血幹細胞移植 ，因此 ，臍帶血已成為造血幹細胞的重要來源 。臍帶血中含有大量的幹細胞 ，幹細胞是生命的種子 ，它會分化成機體的各種細胞 ，結出各種不同的果實——血液細胞 、神經細胞 、骨骼細胞等 。幹細胞是具有自我更新 、高度增殖和多項分化潛能的細胞群體 ；這些細胞可以通過分裂維持自身細胞的特性和數量 ，又可進一步分化為各種組織細胞 ，從而在組織修複等方麵發揮積極作用 。血液中的單核細胞來源於骨髓幹細胞分化出的髓樣幹細胞 ，是機體防禦係統的一個重要組成部分 。單核細胞能吞噬異物產生抗體 ，在機體損傷治愈 、抗禦病原的入侵和對疾病的免疫方麵起著重要的作用 。機體發生炎症或其他疾病都可引起單核細胞總數百分比發生變化 ，因此 ，檢查單核細胞計數成為輔助診斷的一種重要方法 。

方法簡介 ：

公司實驗室分離的人臍帶血單核采用密度梯度離心法結合差速貼壁法製備而來 ，細胞總量約為5×10?cells/瓶 。

質量檢測

公司實驗室分離的人臍帶血單核經CD14免疫熒光鑒定 ，純度可達90%以上，且不含有HIV-1 、HBV 、HCV 、支原體 、細菌 、酵母和真菌等 。

培養信息 ：

培養基 含FBS 、生長添加劑 、Penicillin 、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 半貼壁半懸浮

細胞形態 圓形 、巨噬細胞樣

傳代特性 不增殖；不傳代

消化液 0.25%

培養條件 氣相 ：空氣 ，95% ；CO2 ，5%

注意事項 ：

1. 收到細胞後首先觀察細胞瓶是否完好 ，培養液是否有漏液 、渾濁等現象 ，若有上述現象發生請及時和老哥俱樂部聯係 。

2. 仔細閱讀細胞說明書 ，了解細胞相關信息 ，如細胞形態 、所用培養基 、血清比例 、所需細胞因子等 ，確保細胞培養條件一致，若由於培養條件不一致而導致細胞出現問題 ，責任由客戶自行承擔 。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表麵 ，顯微鏡下觀察細胞狀態 。因運輸問題 ，部分細胞由於溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片 ，是正常現象 。觀察好細胞狀態後 ，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置於37℃培養箱放置4-6h 。

4. 貼壁細胞可以消化 ，懸浮細胞直接混勻收集細胞 ，900 rpm-1000 rpm離心3 min ，棄上清 。加5 mL PBS重懸細胞 ，再900 rpm-1000 rpm離心3 min ， ，用新鮮的*培養基重懸細胞 ，並接種到新的培養瓶或培養皿中 ，置於培養箱中進行培養 。

5. 請客戶用相同條件的培養基用於細胞培養 。

6. 建議客戶收到細胞後前3天各拍幾張細胞照片 ，記錄細胞狀態 ，便於和我司技術部溝通交流 。由於運輸的原因 ，個別敏感細胞會出現不穩定的情況 ，請及時和老哥俱樂部聯係 ，告知細胞的具體情況 ，以便老哥俱樂部的技術人員跟蹤回訪直至問題解決 。

7. 該細胞僅供科研使用 。

8. 備注 ：運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞 ，請換用按照說明書細胞培養條件新配製的*培養基來培養細胞 。收到細胞後次傳代建議1 ：2傳代  。

9.注意 ： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿 。不是1個T25瓶傳2個10cm皿 。

公司正在出售的產品 ：

大鼠蛋白激酶Cγ(PKCγ)檢測試劑盒  ，英文名 ： PKCγ ELISA Kit

N- acetyl - seryl - aspayl -- lysyl - proline (AcSDKP 人N-乙酰基-絲氨酰-天門冬酰-賴氨酰-脯(AcSDKP

RatIerleukin15,IL-15ELISAKIT 大鼠白介素15(IL-15)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforCXCR1(HumanCXC-chemokinereceptor1)ELISAKit人CXC趨化因子受體1

細胞色素P450亞酶CYP3A1(BROD)活性熒光定量檢測試劑盒20次

RatFactor-relatedApoptosisligand,FASLELISAKit大鼠凋亡相關因子配體(FASL)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

BACE1重組人 BACE1 / ASP2 蛋白 (Fc 標簽) Protein

角蛋白2(KRT2)重組蛋白 Recombinant Keratin 2 (KRT2)

GAL重組人 Galanin / GAL 蛋白 (Fc 標簽) Protein

CHL1 Protein Human 重組人 CHL-1 蛋白

HA Protein H5N8 重組甲型流感 H5N8 (A/turkey/Ireland/1378/1983) 血凝素 (Hemagglutinin) 蛋白 His 標簽)

角蛋白2(KRT2)重組蛋白 Recombinant Keratin 2 (KRT2)

CHL1 Protein Human 重組人 CHL-1 蛋白

BACE1重組人 BACE1 / ASP2 蛋白 (Fc 標簽) Protein

HA Protein H5N8 重組甲型流感 H5N8 (A/turkey/Ireland/1378/1983) 血凝素 (Hemagglutinin) 蛋白 His 標簽)

GAL重組人 Galanin / GAL 蛋白 (Fc 標簽) Protein

小鼠糖化白蛋白(GA)ELISA 試劑盒 96T/48T

Rat cyclic adenosine monophosphate (cAMP) ELISA Kit 大鼠環0酸腺苷(cAMP)檢測試劑盒

Humahymus-leukemiaaigen,TLaELISAKit 人白血病抗原(TLa)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

ChikenPullorumDiseaes,PD檢測試劑盒雞白痢抗體檢測(PD)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

載玻片細胞蛋白表達熒光顯微鏡檢測試劑盒-LEPTIN10/20次

Mouseeosinophilchemotacticfactor,ECFELISAKit小鼠嗜酸粒細胞趨化因子(ECF)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

人臍帶血單核細胞小鼠髓過氧化物酶(MPO)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠酸性成纖維細胞生長因子1(aFGF-1)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠絲酸/蘇酸蛋酸酶（STK）檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠水通道蛋白5(AQP-5)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝