細胞簡介 ：

人破骨分離自骨組織和骨髓 ；破骨細胞是骨組織中的多核巨細胞 ，位於骨組織表麵的淺凹處 。目前一般認為破骨細胞是分離自骨骼外的造血係統 ，其前體可能屬於造血幹細胞的前單核細胞 。破骨細胞的主要功能是維持骨吸收和骨形成的相對平衡 ，若失去這種平衡則發生病理性變化 。因此多數學者從破骨細胞著手研究破骨細胞的結構、功能探討骨吸收 ，形成相互平衡的機製 。但破骨細胞是一種終末分化細胞 ，屬於不增殖細胞群 ，不能增殖和傳代 ，隻能進行原代培養且存活時間較短 。

方法簡介 ：

公司實驗室分離的人破骨采用機械分離法/密度梯度離心法和骨髓單核細胞誘導法製備而來 ，細胞總量約為5×10?cells/瓶 。

質量檢測

公司實驗室分離的人破骨經TRAP染色檢測 ，純度可達30%以上 ，且不含有HIV-1 、HBV 、HCV 、支原體 、細菌 、酵母和真菌等 。

培養信息 ：

培養基 含FBS 、生長添加劑 、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態 多核巨細胞

傳代特性 屬於終末分化細胞 ；屬於不增殖細胞群

消化液 0.25%

培養條件 氣相 ：空氣 ，95% ；CO2 ，5%

實驗報告 ：

一 、分離與培養 ：

1 、無菌條件下 ，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織 ，然後用PBS將此組織塊清洗2次 ，將組織剪成1mm3左右大小 ；

2 、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶） ，混懸10s ，置37℃條件下消化10min ，之後用滴管吹打製成單細胞懸液 ，自然沉澱並收集上清 ，用含10% FBS培養基終止消化後4℃放置 ；

3 、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液 ，混懸10s ，置37℃消化10 min後 ，按上述方法收集上清並終止消化後4℃放置 ，重複此步驟2-3次 ，直至組織被消化 ；

4 、用200目不鏽鋼篩網過濾細胞消化液 ，1200r/min 離心10min ，棄去上清 ，沉澱細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸 ，接種於25cm2培養瓶 ，放置於37℃  ，5％CO2 培養箱中培養 ；

5 、差速貼壁1h後 ，吸出培養基 ，按實驗需要接種於6孔板中繼續培養 ；二 、免疫熒光鑒定 ：

1 、待心房肌細胞生長至80%融合時 ，棄去培養基 ，用溫育的PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min ；

2 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在4℃條件下 ，用0.1％Triton X-100透膜15min ；

3 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在室溫條件下 ，用4% BSA封閉細胞30min ；

4 、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗 ，然後將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜 ；

5 、PBS衝洗細胞3次 ，每次10min ，按1 ：150的比例稀釋抗α-actin的二抗 ， 37℃條件下放置1h ；

6 、用PBS衝洗3次 ，每次10min ，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像並拍照 。

公司正在出售的產品 ：

小鼠0酸肌醇3激酶試劑盒   小鼠0酸肌醇3激酶試劑盒   規格型號 ：96T/48T   小鼠0酸肌醇3激酶試劑盒 ，規格型號 ：96T/48T ，來源 ：試劑盒（進口分裝） ，產品別名 ：小鼠0酸肌醇3激酶試劑盒 、小鼠0酸肌醇3激酶eisa試劑盒   保存條件 ：2-8℃   保質期 ：6個月 。

小鼠0酸化細胞外信號調節激酶試劑盒   小鼠0酸化細胞外信號調節激酶試劑盒   規格型號 ：96T/48T   小鼠0酸化細胞外信號調節激酶試劑盒 ，規格型號 ：96T/48T ，來源 ：試劑盒（進口分裝） ，產品別名 ：小鼠0酸化細胞外信號調節激酶試劑盒 、小鼠0酸化細胞外信號調節激酶eisa試劑盒   保存條件 ：2-8℃   保質期 ：6個月 。

小鼠細胞蛋白試劑盒   小鼠細胞蛋白試劑盒   規格型號 ：96T/48T   小鼠細胞蛋白試劑盒 ，規格型號 ：96T/48T ，來源 ：試劑盒（進口分裝） ，產品別名 ：小鼠細胞蛋白試劑盒 、小鼠細胞蛋白eisa試劑盒   保存條件 ：2-8℃   保質期 ：6個月 。

小鼠可溶性試劑盒   小鼠可溶性試劑盒   規格型號 ：96T/48T   小鼠可溶性試劑盒 ，規格型號 ：96T/48T ，來源 ：試劑盒（進口分裝） ，產品別名 ：小鼠可溶性試劑盒 、小鼠可溶性eisa試劑盒   保存條件 ：2-8℃   保質期 ：6個月 。

小鼠前列腺素F(PGF)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human thrombin aithrombin complex (TAT) ELISA Kit 人抗複合物(TAT)試劑盒

HumanArginase,ArgELISAKit 人精酶(Arg)試劑盒 96T/48T 進口分裝

GuineapigTumornecrosisfactorα,TNF-α試劑盒豚鼠壞死因子α(TNF-α)試劑盒規格 ：96T/48T

真菌/酵母細胞染色質免疫沉澱分析(CHIP)試劑盒10次

MouseBonemorphogeneticprotein4,BMP-4ELISAKit小鼠骨成型蛋白4(BMP-4)試劑盒規格 ：96T/48T

IL4R重組大鼠 IL4R / Il4ra 蛋白 (Fc 標簽) Protein

DNA-PKcs peptide DNA依賴蛋白激酶催化亞基多肽抗原 0.5mgDNA-PKcs peptide DNA依賴蛋白激酶催化亞基多肽抗原

USP5重組人 USP5 / ISOT 蛋白 Protein

CSAG1 Protein Human 重組人 CSAGE / CSAG1 蛋白 (Fc 標簽)

TNFRSF10B Protein Mouse 重組小鼠 TRAIL R2 / CD262 / TNFRSF10B 蛋白

DNA-PKcs peptide DNA依賴蛋白激酶催化亞基多肽抗原 0.5mgDNA-PKcs peptide DNA依賴蛋白激酶催化亞基多肽抗原

CSAG1 Protein Human 重組人 CSAGE / CSAG1 蛋白 (Fc 標簽)

IL4R重組大鼠 IL4R / Il4ra 蛋白 (Fc 標簽) Protein

TNFRSF10B Protein Mouse 重組小鼠 TRAIL R2 / CD262 / TNFRSF10B 蛋白

USP5重組人 USP5 / ISOT 蛋白 Protein

人破骨細胞大鼠細胞間粘附分子2(ICAM2)試劑盒  ，英文名 ： ICAM2 ELISA Kit

Mouse somatostatin (SS) ELISA Kit 小鼠(SS)試劑盒

MouseCyclicguanosinemonophosphate,cGMPELISAKit 小鼠環0酸鳥苷(cGMP)試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforHSP-40(HumanHeatShockProtein40)ELISAKit人熱休克蛋白40

細胞MAPKAPKINASE3激酶活性定量試劑盒(A/B/C)20次

ELISAKitIL-17大鼠白介素17

注意事項 ：

1. 收到細胞後首先觀察細胞瓶是否完好 ，培養液是否有漏液 、渾濁等現象 ，若有上述現象發生請及時和老哥俱樂部聯係 。

2. 仔細閱讀細胞說明書 ，了解細胞相關信息 ，如細胞形態 、所用培養基 、血清比例 、所需細胞因子等 ，確保細胞培養條件一致 ，若由於培養條件不一致而導致細胞出現問題 ，責任由客戶自行承擔 。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表麵 ，顯微鏡下觀察細胞狀態 。因運輸問題 ，部分細胞由於溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片 ，是正常現象 。觀察好細胞狀態後 ，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置於37℃培養箱放置4-6h 。

4. 貼壁細胞可以消化 ，懸浮細胞直接混勻收集細胞 ，900 rpm-1000 rpm離心3 min ，棄上清 。加5 mL PBS重懸細胞 ，再900 rpm-1000 rpm離心3 min ， ，用新鮮的*培養基重懸細胞 ，並接種到新的培養瓶或培養皿中 ，置於培養箱中進行培養 。

5. 請客戶用相同條件的培養基用於細胞培養 。

6. 建議客戶收到細胞後前3天各拍幾張細胞照片 ，記錄細胞狀態 ，便於和我司技術部溝通交流 。由於運輸的原因 ，個別敏感細胞會出現不穩定的情況 ，請及時和老哥俱樂部聯係 ，告知細胞的具體情況 ，以便老哥俱樂部的技術人員跟蹤回訪直至問題解決 。

7. 該細胞僅供科研使用 。

8. 備注 ：運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞 ，請換用按照說明書細胞培養條件新配製的*培養基來培養細胞 。收到細胞後次傳代建議1 ：2傳代  。

9.注意 ： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿 。不是1個T25瓶傳2個10cm皿 。