細胞簡介 ：

人脈絡膜黑色素分離自眼球脈絡膜組織 ；脈絡膜在視網膜和鞏膜之間 ，含有豐富血管和色素細胞 ，對外力衝擊的耐受性較視網膜差 ，當眼球受到從前麵來的外力的衝擊作用通過玻璃體傳到後極部時 ，堅硬的鞏膜在其外麵又有抵抗作用 ，使脈絡膜在內外兩種作用夾攻下而發生破裂和出血 。脈絡膜呈暗褐色 ，圍繞視神經乳頭部有照膜 ，為青綠色帶金屬光澤的三角形區 。脈絡膜是眼球中膜的後2/3處的薄膜 ，由纖維組織 、小血管和毛細血管組成 ，軟而薄 ，棕紅色 ，在鞏膜和視網膜之間 ，續連於睫狀體後方 。脈絡膜的血循環營養視網膜外層 ，其含有的豐富色素起遮光暗房作用 。主要功能是營養視網膜外層及玻璃體 ，並有遮光作用 ，使反射的物象清楚 。同時對視覺係統起保護作用 ，對整個視覺神經有調節作用 。續連於睫狀體後方 ，含豐富的血管和色素細胞 ，有營養和遮光作用 。

方法簡介：

公司實驗室分離的人脈絡膜黑色素細胞先用消化 、後-膠原酶混合消化結合專用培養基篩選法製備而來 ，細胞總量約為5×10?cells/瓶 。

質量檢測

公司實驗室分離的人脈絡膜黑色素經Dopa染色檢測 ，純度可達90%以上 ，且不含有HIV-1 、HBV 、HCV 、支原體 、細菌、酵母和真菌等 。

培養信息 ：

培養基 含FBS 、生長添加劑 、Penicillin 、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次 ；

生長特性 貼壁

細胞形態 長梭形

傳代特性 可傳1-2代

消化液 0.25%

培養條件 氣相 ：空氣 ，95% ；CO2 ，5%

實驗報告 ：

一 、分離與培養 ：

1 、無菌條件下 ，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織 ，然後用PBS將此組織塊清洗2次 ，將組織剪成1mm3左右大小 ；

2 、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶） ，混懸10s ，置37℃條件下消化10min ，之後用滴管吹打製成單細胞懸液 ，自然沉澱並收集上清 ，用含10% FBS培養基終止消化後4℃放置 ；

3 、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液 ，混懸10s，置37℃消化10 min後 ，按上述方法收集上清並終止消化後4℃放置 ，重複此步驟2-3次 ，直至組織被消化 ；

4 、用200目不鏽鋼篩網過濾細胞消化液 ，1200r/min 離心10min ，棄去上清 ，沉澱細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸 ，接種於25cm2培養瓶 ，放置於37℃  ，5％CO2 培養箱中培養 ；

5 、差速貼壁1h後 ，吸出培養基 ，按實驗需要接種於6孔板中繼續培養 ；二 、免疫熒光鑒定 ：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時 ，棄去培養基 ，用溫育的PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min ；

2 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在4℃條件下 ，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在室溫條件下 ，用4% BSA封閉細胞30min ；

4 、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗 ，然後將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜 ；

5 、PBS衝洗細胞3次 ，每次10min ，按1 ：150的比例稀釋抗α-actin的二抗 ， 37℃條件下放置1h ；

6 、用PBS衝洗3次 ，每次10min ，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像並拍照 。

公司正在出售的產品 ：

兔子白介素1(IL-1)ELISA 試劑盒

Human von Willebrand factor / ristocetin cofactor (VWF) ELISA Kit 人血管性血友病因子/瑞斯托黴素輔因子(VWF)檢測試劑盒

HumanBlockingaibody,BAELISAKit 人封閉抗體(BA)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

Humaneyemuscleaibody,EMAb檢測試劑盒人抗眼肌抗體(EMAb)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

組織TIE2激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)20次

humanoncostatinMreceptor,OSMRELISAKit人製瘤素M受體(OSMR)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

TNFSF12重組食蟹猴 / 人 TNFSF12 蛋白 (Fc 標簽) Protein

MAPK-1/2 原活化蛋白激酶(抗原 0.5mgMAPK-1/2 原活化蛋白激酶(抗原)

TPH1重組人 Tryptophan Hydroxylase 1 / TPH1 蛋白 Protein

IL1R2 Protein Human 重組人 IL1R2 / IL1RB / CD121b 蛋白

MERTK Protein Mouse 重組小鼠 MERTK / Mer 蛋白 (His & GST 標簽)

MAPK-1/2 原活化蛋白激酶(抗原 0.5mgMAPK-1/2 原活化蛋白激酶(抗原)

IL1R2 Protein Human 重組人 IL1R2 / IL1RB / CD121b 蛋白

TNFSF12重組食蟹猴 / 人 TNFSF12 蛋白 (Fc 標簽) Protein

MERTK Protein Mouse 重組小鼠 MERTK / Mer 蛋白 (His & GST 標簽)

TPH1重組人 Tryptophan Hydroxylase 1 / TPH1 蛋白 Protein

豚鼠降鈣素基因相關肽(CGRP)檢測試劑盒  ，英文名 ： CGRP ELISA Kit

Human factor related apoptosis (FAS/CD95) ELISA Kit 人凋亡相關因子(FAS/CD95)檢測試劑盒

MonkeyMacrophageMigrationInhibitoryFactor,MIFELISAKit巨噬細胞移動抑製因子(MIF)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforbFGF-9(Humanbasicfibroblastgrowthfactor9)ELISAKit人堿性成纖維細胞生長因子9

細菌同還原酶(aldo-ketoreductase)總活性比色法定量檢測試劑20次

rabbitIerleukin6,IL-6ELISAKit兔子白介素6(IL-6)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

人脈絡膜黑色素細胞溶酶體相關膜蛋白3   英文名稱 ：   Human Lysosomal Associated membrane protein 3   規格 ：      英文縮寫 ：   LAMP3

人乳酸脫氫酶   英文名稱 ：   Human Lactate Dehydrogenase   規格：      英文縮寫 ：   LDH

人   英文名稱 ：   lysozyme   規格 ：      英文縮寫 ：   LZM/LYS

甘露聚糖結合凝集素絲酸肽酶-2   英文名稱 ：   mannan-binding lectin associated serine proteases   規格 ：      英文縮寫 ：   MASP-2

注意事項 ：

1. 收到細胞後首先觀察細胞瓶是否完好 ，培養液是否有漏液 、渾濁等現象 ，若有上述現象發生請及時和老哥俱樂部聯係 。

2. 仔細閱讀細胞說明書 ，了解細胞相關信息 ，如細胞形態 、所用培養基 、血清比例 、所需細胞因子等 ，確保細胞培養條件一致 ，若由於培養條件不一致而導致細胞出現問題 ，責任由客戶自行承擔 。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表麵 ，顯微鏡下觀察細胞狀態 。因運輸問題 ，部分細胞由於溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片 ，是正常現象 。觀察好細胞狀態後 ，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置於37℃培養箱放置4-6h 。

4. 貼壁細胞可以消化，懸浮細胞直接混勻收集細胞 ，900 rpm-1000 rpm離心3 min ，棄上清 。加5 mL PBS重懸細胞 ，再900 rpm-1000 rpm離心3 min ， ，用新鮮的*培養基重懸細胞 ，並接種到新的培養瓶或培養皿中 ，置於培養箱中進行培養 。

5. 請客戶用相同條件的培養基用於細胞培養 。

6. 建議客戶收到細胞後前3天各拍幾張細胞照片 ，記錄細胞狀態 ，便於和我司技術部溝通交流 。由於運輸的原因 ，個別敏感細胞會出現不穩定的情況 ，請及時和老哥俱樂部聯係 ，告知細胞的具體情況 ，以便老哥俱樂部的技術人員跟蹤回訪直至問題解決 。

7. 該細胞僅供科研使用 。

8. 備注 ：運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞 ，請換用按照說明書細胞培養條件新配製的*培養基來培養細胞 。收到細胞後次傳代建議1 ：2傳代  。

9.注意 ： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿 。不是1個T25瓶傳2個10cm皿 。