實驗報告 ：

一 、分離與培養 ：

1 、無菌條件下 ，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織 ，然後用PBS將此組織塊清洗2次 ，將組織剪成1mm3左右大小 ；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶） ，混懸10s ，置37℃條件下消化10min ，之後用滴管吹打製成單細胞懸液 ，自然沉澱並收集上清 ，用含10% FBS培養基終止消化後4℃放置 ；

3 、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液 ，混懸10s ，置37℃消化10 min後 ，按上述方法收集上清並終止消化後4℃放置 ，重複此步驟2-3次 ，直至組織被消化 ；

4 、用200目不鏽鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min ，棄去上清 ，沉澱細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸 ，接種於25cm2培養瓶 ，放置於37℃  ，5％CO2 培養箱中培養 ；

5 、差速貼壁1h後 ，吸出培養基 ，按實驗需要接種於6孔板中繼續培養 ；二 、免疫熒光鑒定 ：

1 、待心房肌細胞生長至80%融合時 ，棄去培養基 ，用溫育的PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min ；

2 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在4℃條件下 ，用0.1％Triton X-100透膜15min ；

3 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在室溫條件下 ，用4% BSA封閉細胞30min ；

4 、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗 ，然後將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜 ；

5 、PBS衝洗細胞3次 ，每次10min ，按1 ：150的比例稀釋抗α-actin的二抗 ， 37℃條件下放置1h ；

6 、用PBS衝洗3次 ，每次10min ，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像並拍照 。

細胞簡介 ：

人淋巴血管內皮分離自淋巴管組織 ；淋巴管由毛細淋巴管匯合而成。其形態結構與靜脈相似 ，但管徑較細 ，管壁較薄 ，瓣膜較多且發達 ，外形呈串珠狀 。淋巴管根據其位置分為淺 、深二種 。它們管位於皮下 ，常與淺靜脈伴行 ，收集皮膚和皮下組織的淋巴 。深淋巴管與深部血管伴行 ，收集肌肉和內髒的淋巴 。淺 、深淋巴管之間有廣泛的交通支 。淋巴管在向心行程中 ，通常經過一個或多個淋巴結 ，從而把淋巴細胞帶入淋巴液 。主要功能是濾過淋巴液 ，產生淋巴細胞和漿細胞 ，參與機體的免疫反應 。當局部感染時 ，細菌 、病毒或癌細胞等可沿淋巴管侵入 ，引起局部淋巴結腫大 。如該淋巴結不能阻止和消滅它們 ，則病變可沿淋巴管的流注方向擴散和轉移 。淋巴管內皮細胞（LEC）是襯覆於淋巴管內表麵的一種單層扁平上皮 ，是構成淋巴管壁的主要結構 ，參與維持體液平衡 ，調節淋巴細胞再循環和機體的免疫反應和組織液及蛋白質的運輸 ，在疾病過程中也起著重要作用 。近年研究表明 ，LEC還在傷口愈合 、淋巴管水腫和炎症擴散等病理過程中起重要作用 ，而且與腫瘤轉移密切相關 。淋巴管內皮細胞主要功能 ：①調節體液 、蛋白和組織壓力平衡 ；②為免疫係統的重要組成部分 。淋巴管內皮細胞與主要病生理變化 ：①囊腫型淋巴管瘤 ；②淋巴管炎；③淋巴結核 。

方法簡介 ：

公司實驗室分離的人淋巴血管內皮采用-膠原酶聯合消化法製備而來 ，細胞總量約為5×10?cells/瓶 。

質量檢測

公司實驗室分離的人淋巴血管內皮經CD31免疫熒光鑒定 ，純度可達90%以上 ，且不含有HIV-1 、HBV 、HCV 、支原體 、細菌 、酵母和真菌等 。

培養信息：

包被條件 PLL（0.1mg/ml） ，明膠（0.1%）

培養基 含FBS 、生長添加劑 、Penicillin 、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態 內皮細胞樣

傳代特性 可傳3代左右

消化液 0.25%

培養條件 氣相 ：空氣 ，95%；CO2 ，5%

注意事項 ：

1. 收到細胞後首先觀察細胞瓶是否完好 ，培養液是否有漏液 、渾濁等現象 ，若有上述現象發生請及時和老哥俱樂部聯係 。

2. 仔細閱讀細胞說明書 ，了解細胞相關信息 ，如細胞形態 、所用培養基 、血清比例 、所需細胞因子等 ，確保細胞培養條件一致 ，若由於培養條件不一致而導致細胞出現問題 ，責任由客戶自行承擔 。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表麵 ，顯微鏡下觀察細胞狀態 。因運輸問題 ，部分細胞由於溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片 ，是正常現象 。觀察好細胞狀態後 ，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置於37℃培養箱放置4-6h 。

4. 貼壁細胞可以消化 ，懸浮細胞直接混勻收集細胞 ，900 rpm-1000 rpm離心3 min ，棄上清 。加5 mL PBS重懸細胞 ，再900 rpm-1000 rpm離心3 min ， ，用新鮮的*培養基重懸細胞 ，並接種到新的培養瓶或培養皿中 ，置於培養箱中進行培養 。

5. 請客戶用相同條件的培養基用於細胞培養 。

6. 建議客戶收到細胞後前3天各拍幾張細胞照片 ，記錄細胞狀態 ，便於和我司技術部溝通交流 。由於運輸的原因 ，個別敏感細胞會出現不穩定的情況 ，請及時和老哥俱樂部聯係 ，告知細胞的具體情況 ，以便老哥俱樂部的技術人員跟蹤回訪直至問題解決 。

7. 該細胞僅供科研使用 。

8. 備注 ：運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞 ，請換用按照說明書細胞培養條件新配製的*培養基來培養細胞 。收到細胞後次傳代建議1 ：2傳代  。

9.注意 ： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿 。不是1個T25瓶傳2個10cm皿 。

公司正在出售的產品 ：

大鼠肉毒堿棕櫚酰基轉移酶2(CPT2)檢測試劑盒  ，英文名 ： CPT2 ELISA Kit

Mouse angiotensinogen (aGT) ELISA Kit 小鼠血管緊張素原(aGT)檢測試劑盒

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CLIAKitforGzms-A(MousegranzymesA)ELISAKit小鼠顆粒酶A

細胞長鏈羥脂酰脫氫酶(HYDROXYACYLCOADEHYDROGENASE)活性比色法定量檢測試劑盒20次

Raturokinaseplasminogenactivator,uPAELISAKit大鼠型纖溶酶原激活物(uPA)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

NMNAT1重組人 NMNAT1 / NMNAT 蛋白 Protein

SPAG5/map126 相關抗原5(多肽抗原 0.5mgSPAG5/map126 相關抗原5(多肽抗原)

GPC3重組人 Glypican 3 / GPC3 / OCI-5 蛋白 Protein

HIST2H4A Protein Human 重組人 Histone H4 / HIST2H4A 蛋白

PTPN1 Protein Human 重組人 PTP1B / PTPN1 蛋白

SPAG5/map126 相關抗原5(多肽抗原 0.5mgSPAG5/map126 相關抗原5(多肽抗原)

HIST2H4A Protein Human 重組人 Histone H4 / HIST2H4A 蛋白

NMNAT1重組人 NMNAT1 / NMNAT 蛋白 Protein

PTPN1 Protein Human 重組人 PTP1B / PTPN1 蛋白

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小鼠N-乙酰-β-D-基葡萄糖苷酶(NAG)ELISA 試劑盒 96T/48T

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