老哥俱乐部

细胞简介：

人淋巴结成纤维分离自淋巴组织
；淋巴结是呈椭圆形或蚕豆形的淋巴组织小体，大小不一
，新鲜时呈灰红色。穿插于淋巴管的行程中，并与淋巴管相通连。淋巴结主要由淋巴组织和淋巴窦组成
，外面包以致密结缔组织被膜，被膜向淋巴结内伸入，形成许多间隔或小梁，构成淋巴结的网状支架，并把淋巴结实质分隔成许多部分。这些结缔组织由成纤维细胞构成，对淋巴管起到保护和支持作用。刚分离的成纤维细胞呈圆形
、折光性良好，悬浮于培养基中。30min细胞贴壁，其中部分开始伸出伪足
，表现为小的突起；6h后细胞基本贴壁，伸展成梭形，胞核清晰
，分布较均匀，散在生长
，不聚集成团；细胞生长迅速，5-7天即呈融合状态
，细胞排列紧密
，有的交叉重叠生长
，平坦、胞体较大，细胞质透明，细胞核较大，呈椭圆形
，颜色淡
。细胞融合，并彼此连接成网状
；细胞呈突起的纺锤形或星形的扁平分布
。

方法简介：

实验室分离的人淋巴结成纤维采用混合消化法结合差速贴壁法制备而来，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶。

质量检测

实验室分离的人淋巴结成纤维经Vimentin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体
、细菌、酵母和真菌等。

培养信息：

培养基
：基础培养基，含FBS
、bFGF
、Insulin、Penicillin、Streptomycin等

换液频率：每2-3天换液一次

生长特性：贴壁

细胞形态：成纤维细胞样

传代特性：可传3-5代左右；3代以内状态佳

消化液：0.25%

培养条件：气相：空气
，95%
；CO2，5%

人淋巴结成纤维体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养
，以此保证该细胞的佳培养状态
。

实验报告
：

一

、分离与培养：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶）

，混悬10s
，置37℃条件下消化10min
，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清
，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置
，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min

，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃
，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养
；二
、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基
，用温育的PBS冲洗细胞2次

，每次10min
，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2
、PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min
；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下
，用4% BSA封闭细胞30min
；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗

，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6
、用PBS冲洗3次

，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照
。

公司正在出售的产品
：

人脂蛋白相关0脂酶A2(Lp-PL-A2)检测试剂盒

Human tumor markers (CA724) ELISA Kit 人肿瘤标志物(CA724)检测试剂盒

HumanCaspase3,Casp-3ELISAKit 人胱天蛋白酶3(Casp-3)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

HumanImmuneRNA,Irna检测试剂盒人免疫核糖核酸(Irna)检测试剂盒规格：96T/48T

组织基质金属蛋白酶(MMP-1)活性比色法定量检测试剂盒20次

HumanLeukoieneB4，LT-B4ELISAKit人白三烯B4(LTB4)检测试剂盒规格：96T/48T

S100A2重组人 S100A2 蛋白 Protein

血小板内皮细胞粘附分子1(PECAM1)重组蛋白 Recombinant Platelet/Endothelial Cell Adhesion Molecule (PECAM1)

HA重组甲型流感 H1N1 (A/Brisbane/59/2007) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白 Protein

INHBB Protein Human 重组人 Inhibin beta B / INHBB / Activin B 蛋白

GLYCOPROTEIN Protein Sudan ebolavirus 重组苏丹埃博拉病毒 Glycoprotein / GP 蛋白

血小板内皮细胞粘附分子1(PECAM1)重组蛋白 Recombinant Platelet/Endothelial Cell Adhesion Molecule (PECAM1)

INHBB Protein Human 重组人 Inhibin beta B / INHBB / Activin B 蛋白

S100A2重组人 S100A2 蛋白 Protein

GLYCOPROTEIN Protein Sudan ebolavirus 重组苏丹埃博拉病毒 Glycoprotein / GP 蛋白

HA重组甲型流感 H1N1 (A/Brisbane/59/2007) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白 Protein

豚鼠白介素6(IL-6)检测试剂盒 ，英文名： IL-6 ELISA Kit

Two dipeptidyl peptidase IV (DPP IV) ELISA Kit 人二肽基肽酶Ⅳ(DPPⅣ)检测试剂盒

RabbitIerleukin1,IL-1ELISAKit 兔子白介素1(IL-1)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforBeta-EP(mouseBeta-Endorphin)ELISAKit小鼠β内啡肽

细菌亚盐还原酶定性检测试剂盒20次

RabbitHaptoglobin,Hpt/HPELISAKit兔结合珠蛋白/触珠蛋白(Hpt/HP)检测试剂盒规格
：96T/48T

人淋巴结成纤维细胞人整合素连接激酶1(ILK-1)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

人整合素αⅤβ3(IegrinαⅤβ3)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

人真胰岛素(TI)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

人粘膜相关上皮趋化因子(MEC/CCL28)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

注意事项
：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好
，培养液是否有漏液、浑浊等现象
，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息
，如细胞形态
、所用培养基、血清比例
、所需细胞因子等
，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面
，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片
，是正常现象

。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞
，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞
，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养
。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养
。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系
，告知细胞的具体情况
，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决
。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注
：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞
。收到细胞后次传代建议1

：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿
。不是1个T25瓶传2个10cm皿
。