老哥俱乐部

细胞简介：

人关节韧带成纤维分离自关节韧带组织；韧带是纤维结缔组织
，将各个骨头在关节处连接起来，并在关节活动时加固关节稳定关节
。其中颞下颌关节、踝关 节、膝关节韧带组织研究较多，颞下颌关节两侧各有三条

，即颞下颌韧带、茎突下颌韧带和蝶下颌韧带。踝关节周围韧带根据其解剖位置可以分成3组
，外侧韧带 ，内侧三角韧带，胫腓联合韧带。膝关节的韧带有囊外韧带和囊内韧带,其共同作用为加强关节的稳定性
。囊外韧带主要有:髌韧带位于髌骨的下部，关节囊的前 方,是股四头肌肌腱的延续,向下附着于胫骨粗隆，两侧有侧副韧帶加强；囊内韧带:主要为交叉韧带:前交叉韧带附着于胫骨髁间隆起前份和股骨外侧髁的内侧面 ，防止胫骨过度前移;后交叉韧带附着于胫骨髁间隆起后份与股骨内侧髁的外侧面，防止胫骨过度后移。另外
，在膝关节内尚有膝横韧带
。任何关节韧带均可由于 外伤而发生损伤，但影响较大又较常见的是膝关节韧带损伤和踝关节韧带损伤。膝关节韧带损伤，常见者为膝关节侧副韧带损伤。多因膝关节微屈时，突然受到 内翻或外翻的冲击力所致。踝关节韧带损伤。多因行走或跑跳时误入不平之处所致。以外侧损伤多见
。韧带是致密纤维结缔组织，主要特点是细胞、基质成分少 
，纤维非常多、纤维粗大排列紧密
，且排列方向与承受张力的方向一致，有很强的保护和支持作用。韧带主要包含韧带成纤维细胞
。人关节韧带成纤维对研究关节韧带损伤有重要意义
。

方法简介
：

实验室分离的人关节韧带成纤维采用 - 胶原酶混合消化法结合差速贴壁法制备而来，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶
。

质量检测

实验室分离的人关节韧带成纤维经Vimentin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上
，且不含有HIV-1
、HBV

、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养信息
：

培养基
：基础培养基
，含FBS、bFGF、Insulin
、Penicillin、Streptomycin等

换液频率

：每2-3天换液一次

生长特性：贴壁

细胞形态：成纤维细胞样

传代特性：可传3代左右

消化液
：0.25%

培养条件：气相
：空气
，95%；CO2，5%

人关节韧带成纤维体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养
，以此保证该细胞的佳培养状态。

实验报告：

一
、分离与培养：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织
，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小

；

2
、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min
，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清
，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置
；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后
，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化

；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液

，1200r/min 离心10min
，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬
，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5
、差速贴壁1h后
，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养
；二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min
；

2、PBS冲洗细胞2次
，每次10min
，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下

，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜
；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min

，按1
：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

公司正在出售的产品

：

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小鼠褪黑素(MT/MLT)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

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小鼠透明质酸(HA)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好
，培养液是否有漏液
、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息
，如细胞形态
、所用培养基
、血清比例、所需细胞因子等
，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题

，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片
，是正常现象
。观察好细胞状态后
，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h
。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞
，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清
。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，
，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因
，个别敏感细胞会出现不稳定的情况
，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用

。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞
。收到细胞后次传代建议1：2传代
。

9.注意

： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿
。不是1个T25瓶传2个10cm皿。