細胞簡介 ：

人關節韌帶成纖維分離自關節韌帶組織 ；韌帶是纖維結締組織 ，將各個骨頭在關節處連接起來 ，並在關節活動時加固關節穩定關節 。其中顳下頜關節 、踝關 節、膝關節韌帶組織研究較多 ，顳下頜關節兩側各有三條 ，即顳下頜韌帶 、莖突下頜韌帶和蝶下頜韌帶 。踝關節周圍韌帶根據其解剖位置可以分成3組 ，外側韌帶  ，內側三角韌帶 ，脛腓聯合韌帶 。膝關節的韌帶有囊外韌帶和囊內韌帶,其共同作用為加強關節的穩定性 。囊外韌帶主要有:髕韌帶位於髕骨的下部 ，關節囊的前 方,是股四頭肌肌腱的延續,向下附著於脛骨粗隆 ，兩側有側副韌帶加強 ；囊內韌帶:主要為交叉韌帶:前交叉韌帶附著於脛骨髁間隆起前份和股骨外側髁的內側麵  ，防止脛骨過度前移;後交叉韌帶附著於脛骨髁間隆起後份與股骨內側髁的外側麵 ，防止脛骨過度後移 。另外 ，在膝關節內尚有膝橫韌帶 。任何關節韌帶均可由於 外傷而發生損傷 ，但影響較大又較常見的是膝關節韌帶損傷和踝關節韌帶損傷 。膝關節韌帶損傷 ，常見者為膝關節側副韌帶損傷 。多因膝關節微屈時 ，突然受到 內翻或外翻的衝擊力所致 。踝關節韌帶損傷 。多因行走或跑跳時誤入不平之處所致 。以外側損傷多見 。韌帶是致密纖維結締組織 ，主要特點是細胞 、基質成分少  ，纖維非常多 、纖維粗大排列緊密 ，且排列方向與承受張力的方向一致 ，有很強的保護和支持作用 。韌帶主要包含韌帶成纖維細胞 。人關節韌帶成纖維對研究關節韌帶損傷有重要意義 。

方法簡介 ：

實驗室分離的人關節韌帶成纖維采用 - 膠原酶混合消化法結合差速貼壁法製備而來 ，細胞總量約為5×10⁵cells/瓶 。

質量檢測

實驗室分離的人關節韌帶成纖維經Vimentin免疫熒光鑒定 ，純度可達90%以上 ，且不含有HIV-1 、HBV 、HCV 、支原體 、細菌 、酵母和真菌等 。

培養信息 ：

培養基 ：基礎培養基 ，含FBS 、bFGF 、Insulin 、Penicillin 、Streptomycin等

換液頻率 ：每2-3天換液一次

生長特性 ：貼壁

細胞形態 ：成纖維細胞樣

傳代特性 ：可傳3代左右

消化液 ：0.25%

培養條件 ：氣相 ：空氣 ，95% ；CO2 ，5%

人關節韌帶成纖維體外培養周期有限 ；建議使用配套的專用生長培養基及正確的操作方法來培養 ，以此保證該細胞的佳培養狀態 。

實驗報告 ：

一 、分離與培養 ：

1 、無菌條件下 ，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織 ，然後用PBS將此組織塊清洗2次 ，將組織剪成1mm3左右大小 ；

2 、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶） ，混懸10s ，置37℃條件下消化10min ，之後用滴管吹打製成單細胞懸液 ，自然沉澱並收集上清 ，用含10% FBS培養基終止消化後4℃放置 ；

3 、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液 ，混懸10s ，置37℃消化10 min後 ，按上述方法收集上清並終止消化後4℃放置 ，重複此步驟2-3次 ，直至組織被消化 ；

4 、用200目不鏽鋼篩網過濾細胞消化液 ，1200r/min 離心10min ，棄去上清 ，沉澱細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸 ，接種於25cm2培養瓶 ，放置於37℃  ，5％CO2 培養箱中培養 ；

5 、差速貼壁1h後 ，吸出培養基 ，按實驗需要接種於6孔板中繼續培養 ；二 、免疫熒光鑒定 ：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時 ，棄去培養基 ，用溫育的PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min ；

2 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在4℃條件下 ，用0.1％Triton X-100透膜15min ；

3 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在室溫條件下 ，用4% BSA封閉細胞30min ；

4 、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗 ，然後將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜 ；

5 、PBS衝洗細胞3次 ，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗 ， 37℃條件下放置1h ；

6 、用PBS衝洗3次 ，每次10min ，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像並拍照 。

公司正在出售的產品 ：

小鼠脫氫表雄酮酯(DHEA-S)ELISA 試劑盒

One Japanese encephalitis aibody IgG (JE IgG) ELISA Kit 人流行性乙型腦抗體IgG(JE IgG)檢測試劑盒

HumanBcellreceptor,BCRELISAKit 人B細胞受體(BCR)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

ChickenNuclearfactor-kappaB,NF-κB檢測試劑盒雞核因子κB(NF-κB)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

載玻片細胞P38蛋白表達熒光顯微鏡檢測試劑盒10/20次

mousefollicle-stimulatinghormone,FSHELISAKit小鼠促卵泡素(FSH)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

PRLR重組小鼠 PRLR / Prolactin Receptor 蛋白 (His & Fc 標簽) Protein

BMP4(bone morphogenetic protein 4 0.5mgBMP4(bone morphogenetic protein 4) 骨形態發生蛋白4(抗原)

KIT重組人 KIT / c-KIT / CD117 蛋白 (aa 540-972, His & GST 標簽) Protein

CFD Protein Human 重組人 Adipsin / Complement Factor D / CFD 蛋白

CSF2RB Protein Rat 重組大鼠 CD131 / CSF2RB / IL3RB / IL5RB 蛋白 (Fc 標簽)

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PRLR重組小鼠 PRLR / Prolactin Receptor 蛋白 (His & Fc 標簽) Protein

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小鼠褪黑素(MT/MLT)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human keratan sulfate (KS) ELISA Kit 人角質素(KS)檢測試劑盒

Humannonmethylatedoligonucleotide,NONELISAKit 人非甲基化寡核苷酸(NON)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

ChickensecretoryimmunoglobulinA,SIgA檢測試劑盒雞分泌型免疫球蛋白A(SIgA)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

載玻片細胞PARP蛋白表達熒光顯微鏡檢測試劑盒10/20次

MouseFibronectin,FNELISAKit小鼠纖連蛋白(FN)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

人關節韌帶成纖維細胞小鼠脫酶(ID)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠褪黑素(MT/MLT)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠透明質酸結合蛋白(HABP)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠透明質酸(HA)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

注意事項 ：

1. 收到細胞後首先觀察細胞瓶是否完好 ，培養液是否有漏液 、渾濁等現象 ，若有上述現象發生請及時和老哥俱樂部聯係 。

2. 仔細閱讀細胞說明書 ，了解細胞相關信息 ，如細胞形態 、所用培養基 、血清比例 、所需細胞因子等 ，確保細胞培養條件一致 ，若由於培養條件不一致而導致細胞出現問題 ，責任由客戶自行承擔 。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表麵 ，顯微鏡下觀察細胞狀態 。因運輸問題 ，部分細胞由於溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片 ，是正常現象 。觀察好細胞狀態後 ，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置於37℃培養箱放置4-6h 。

4. 貼壁細胞可以消化 ，懸浮細胞直接混勻收集細胞 ，900 rpm-1000 rpm離心3 min ，棄上清 。加5 mL PBS重懸細胞 ，再900 rpm-1000 rpm離心3 min ， ，用新鮮的*培養基重懸細胞 ，並接種到新的培養瓶或培養皿中 ，置於培養箱中進行培養 。

5. 請客戶用相同條件的培養基用於細胞培養 。

6. 建議客戶收到細胞後前3天各拍幾張細胞照片 ，記錄細胞狀態 ，便於和我司技術部溝通交流 。由於運輸的原因 ，個別敏感細胞會出現不穩定的情況 ，請及時和老哥俱樂部聯係 ，告知細胞的具體情況 ，以便老哥俱樂部的技術人員跟蹤回訪直至問題解決 。

7. 該細胞僅供科研使用 。

8. 備注 ：運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞 ，請換用按照說明書細胞培養條件新配製的*培養基來培養細胞 。收到細胞後次傳代建議1 ：2傳代  。

9.注意 ： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿 。不是1個T25瓶傳2個10cm皿 。