實驗報告 ：

一 、分離與培養 ：

1 、無菌條件下 ，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織 ，然後用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大小 ；

2 、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶） ，混懸10s ，置37℃條件下消化10min ，之後用滴管吹打製成單細胞懸液 ，自然沉澱並收集上清 ，用含10% FBS培養基終止消化後4℃放置 ；

3 、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液 ，混懸10s ，置37℃消化10 min後 ，按上述方法收集上清並終止消化後4℃放置 ，重複此步驟2-3次 ，直至組織被消化；

4 、用200目不鏽鋼篩網過濾細胞消化液 ，1200r/min 離心10min ，棄去上清 ，沉澱細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種於25cm2培養瓶 ，放置於37℃  ，5％CO2 培養箱中培養 ；

5 、差速貼壁1h後 ，吸出培養基 ，按實驗需要接種於6孔板中繼續培養 ；二 、免疫熒光鑒定 ：

1 、待心房肌細胞生長至80%融合時 ，棄去培養基 ，用溫育的PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min ；

2 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在4℃條件下 ，用0.1％Triton X-100透膜15min ；

3 、PBS衝洗細胞2次，每次10min ，然後在室溫條件下 ，用4% BSA封閉細胞30min ；

4 、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗 ，然後將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜 ；

5 、PBS衝洗細胞3次 ，每次10min ，按1 ：150的比例稀釋抗α-actin的二抗 ， 37℃條件下放置1h ；

6 、用PBS衝洗3次 ，每次10min ，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像並拍照 。

細胞簡介 ：

人肝動脈內皮分離自肝動脈組織 ；在胚胎期 ，肝髒有3條動脈供血 ，分別來源於胃左動脈 、腹腔動脈和腸係膜上動脈 ，這3條動脈分別的不同部位 。出生後 ，一般保留一條動脈 ，大部分為起源於腹腔動脈的動脈 ，由其分出左 、右肝動脈供應左 、右半肝 。偶爾也可見起源於胃左動脈的動脈或起源於腸係膜上動脈的動脈 。但也有2條動脈並存的情況 ，如起源於腹腔動脈和起源於胃左動脈（25%） ，起源於腹腔動脈和起源於腸係臘上動脈（10%） ，而起源於胃左動脈和起源於腸係膜上動脈的2條動脈同時存在的情況比較少見 。此外 ，還有5%像胚胎期一樣 ，3條動脈同時存在 。這種起源於腹腔動脈以外的肝動脈稱為迷走肝動脈 ，如果肝髒沒有起源於腹腔動脈的動脈供血時 ，此種異位起源的肝動脈稱替代動脈 ，如果在常見肝動脈類型外 ，還有一支這種異位起始的動脈的一部分血流 ，這種肝動脈稱副肝動脈。肝動脈內皮細胞是襯於肝動脈內表麵的單層扁平上皮 ，在炎症時高表達黏附分子 ，與血流中白細胞表麵黏附分子相互作用 ，從而介導白細胞穿越血管壁 ，亦屬一類非專職抗原提呈細胞 。它們吞噬異物 、細菌 、壞死和衰老的組織 ，還參與集體免疫活動 ，包括 ：①血管收縮及血管舒張 ，從而控製血壓 ；②凝血（血栓形成及纖維蛋白溶解） ；③動脈硬化 ；④血管生成 ；⑤炎症及腫脹（浮腫） ；⑥內皮細胞亦控製一些物質 ，如白血球進出血管 。

方法簡介 ：

公司實驗室分離的人肝動脈內皮采用混合酶消化法結合差速貼壁法 ，並通過內皮細胞專用培養基培養篩選製備而來 ，細胞總量約為5×10?cells/瓶 。

質量檢測

公司實驗室分離的人肝動脈內皮經CD31免疫熒光鑒定 ，純度可達90%以上 ，且不含有HIV-1 、HBV 、HCV 、支原體 、細菌 、酵母和真菌等 。

培養信息 ：

包被條件 PLL（0.1mg/ml） ，明膠（0.1%）

培養基 含FBS 、生長添加劑 、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態 內皮細胞樣

傳代特性 可傳2-3代

消化液 0.25%

培養條件 氣相 ：空氣 ，95% ；CO2 ，5%

注意事項 ：

1. 收到細胞後首先觀察細胞瓶是否完好 ，培養液是否有漏液 、渾濁等現象 ，若有上述現象發生請及時和老哥俱樂部聯係。

2. 仔細閱讀細胞說明書 ，了解細胞相關信息 ，如細胞形態 、所用培養基 、血清比例 、所需細胞因子等 ，確保細胞培養條件一致 ，若由於培養條件不一致而導致細胞出現問題 ，責任由客戶自行承擔 。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表麵 ，顯微鏡下觀察細胞狀態 。因運輸問題 ，部分細胞由於溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片 ，是正常現象 。觀察好細胞狀態後 ，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置於37℃培養箱放置4-6h 。

4. 貼壁細胞可以消化 ，懸浮細胞直接混勻收集細胞 ，900 rpm-1000 rpm離心3 min ，棄上清 。加5 mL PBS重懸細胞 ，再900 rpm-1000 rpm離心3 min ， ，用新鮮的*培養基重懸細胞 ，並接種到新的培養瓶或培養皿中 ，置於培養箱中進行培養 。

5. 請客戶用相同條件的培養基用於細胞培養 。

6. 建議客戶收到細胞後前3天各拍幾張細胞照片 ，記錄細胞狀態 ，便於和我司技術部溝通交流 。由於運輸的原因 ，個別敏感細胞會出現不穩定的情況 ，請及時和老哥俱樂部聯係 ，告知細胞的具體情況 ，以便老哥俱樂部的技術人員跟蹤回訪直至問題解決 。

7. 該細胞僅供科研使用 。

8. 備注 ：運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞 ，請換用按照說明書細胞培養條件新配製的*培養基來培養細胞 。收到細胞後次傳代建議1 ：2傳代  。

9.注意 ： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿 。不是1個T25瓶傳2個10cm皿 。

公司正在出售的產品 ：

小鼠內毒素(ET)ELISA 試劑盒

P Nixonn Ron (Prednisolone) ELISA Kit 人龍(Prednisolone)檢測試劑盒

Human26Sproteasome,26SPSMELISAKit 人26S蛋白酶體(26SPSM)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

HumanAbnormalprothrombin,APT檢測試劑盒人異常原(APT)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

正常女性人體肝組織微粒體組分(5毫克/毫升)500微升

Mouseaidiuretichormone/vasopressin/argininevasopressin,ADH/VP/AVPELISAKit小鼠抗利尿激素/血管加壓素/精加壓素(ADH/VP/AVP)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

EGFR重組小鼠 EGFR / HER1 / ErbB1 蛋白 (Fc 標簽) Protein

半乳糖凝集素9(GAL9)重組蛋白 Recombinant Galectin 9 (GAL9)

LYZL2重組人 Lysozyme 2 / LYZL2 蛋白 Protein

CDON Protein Human 重組人 CDON / CDO 蛋白

IL2RA Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 IL2RA 蛋白

Alpha-Synuclein 核突觸蛋白(抗原 0.5mgAlpha-Synuclein 核突觸蛋白(抗原)

CDON Protein Human 重組人 CDON / CDO 蛋白

LYPD3重組小鼠 C4.4A / LYPD3 蛋白 Protein

ENPEP Protein Rat 重組大鼠 ENPEP / Aminopeptidase A 蛋白 (aa 41-945, His 標簽)

NLK重組人 nemo-like kinase / NLK 蛋白 (His & GST 標簽) Protein

小鼠B6(VB6)ELISA 試劑盒 96T/48T

Rat bone morphogenetic protein 6 (BMP-6) ELISA Kit 大鼠骨形成蛋白6(BMP-6)檢測試劑盒

HumanCCAAT/enhancerbindingproteinbeta,C/EBPβELISAKit 人CCAAT增強子結合蛋白β(C/EBPβ)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

ChickenLipopolysaccharides,LPS檢測試劑盒雞脂多糖/內毒素(LPS)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

載玻片細胞MAPK蛋白表達熒光顯微鏡檢測試劑盒10/20次

MouseGasoiestinalcancerMarker-CA199ELISAKit小鼠胃腸癌標誌物CA199檢測試劑盒規格 ：96T/48T

人肝動脈內皮細胞小鼠細胞凋亡因子 (mouse Fas)   作用 ：   ELISA   規格 ：   96T   美國 R&D

小鼠細胞凋亡因子配體 (mouse Fas-Ligand)   作用 ：   ELISA   規格 ：   96T   美國 R&D

mouse Flt3 Ligand   作用 ：   ELISA   規格 ：   96T   美國 R&D

小鼠粒細胞集落刺激因子 (mouse G-CSF)   作用 ：   ELISA   規格 ：   96T   美國 R&D