細胞簡介 ：

人肝癌組織源分離自患有肝癌病人的肝癌組織 ；肝癌即肝髒惡性腫瘤 ，可分為原發性和繼發性兩大類 。原發性肝髒惡性腫瘤起源於肝髒的上皮或間葉組織 ，前者稱為原發性肝癌 ，是我國高發的 ，危害極大的惡性腫瘤 ；後者稱為肉瘤 ，與原發性肝癌相比較較為少見 。繼發性或稱轉移性肝癌係指全身多個器官起源的惡性腫瘤侵犯至肝髒 。一般多見於胃 、膽道 、胰腺 、結直腸 、卵巢 、子宮 、肺 、乳腺等器官惡性腫瘤的肝轉移 。原發性肝癌的病因及確切分子機製尚不清楚 ，目前認為其發病是多因素 、多步驟的複雜過程 ，受環境和飲食雙重因素影響 。流行病學及實驗研究資料表明 ，乙型肝炎病毒（HBV）和丙型肝炎病毒（HCV）感染 、飲水汙染 、酒精 、肝硬化 、性激素 、亞硝胺類物質 、微量元素等都與肝癌發病相關 。繼發性肝癌（轉移性肝癌）可通過不同途徑 ，如隨血液 、淋巴液轉移或直接侵潤肝髒而形成疾病 。

方法簡介 ：

公司實驗室分離的癌組織源采用膠原酶消化 、經Percoll離心純化製備而來 ，細胞總量約為5×10?cells/瓶 。

質量檢測

公司實驗室分離的人肝癌組織源經檢測 ，純度可達90%以上 ，且不含有HIV-1 、HBV 、HCV 、支原體 、細菌 、酵母和真菌等 。

培養信息 ：

培養基 含FBS 、生長添加劑 、Penicillin 、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態 梭形 、多角形

傳代特性 可傳5代左右 ；3代以內狀態佳

消化液 0.25%

培養條件 氣相 ：空氣 ，95% ；CO2 ，5%

實驗報告 ：

一 、分離與培養 ：

1 、無菌條件下 ，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織 ，然後用PBS將此組織塊清洗2次 ，將組織剪成1mm3左右大小 ；

2 、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶） ，混懸10s ，置37℃條件下消化10min ，之後用滴管吹打製成單細胞懸液 ，自然沉澱並收集上清 ，用含10% FBS培養基終止消化後4℃放置 ；

3 、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液 ，混懸10s ，置37℃消化10 min後 ，按上述方法收集上清並終止消化後4℃放置 ，重複此步驟2-3次 ，直至組織被消化 ；

4 、用200目不鏽鋼篩網過濾細胞消化液 ，1200r/min 離心10min ，棄去上清 ，沉澱細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸 ，接種於25cm2培養瓶 ，放置於37℃  ，5％CO2 培養箱中培養 ；

5 、差速貼壁1h後 ，吸出培養基 ，按實驗需要接種於6孔板中繼續培養 ；二 、免疫熒光鑒定 ：

1 、待心房肌細胞生長至80%融合時 ，棄去培養基 ，用溫育的PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min ；

2 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在4℃條件下 ，用0.1％Triton X-100透膜15min ；

3 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在室溫條件下 ，用4% BSA封閉細胞30min ；

4 、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗 ，然後將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜 ；

5 、PBS衝洗細胞3次 ，每次10min，按1 ：150的比例稀釋抗α-actin的二抗 ， 37℃條件下放置1h ；

6 、用PBS衝洗3次 ，每次10min ，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像並拍照 。

公司正在出售的產品 ：

大鼠淋巴毒素β(LTβ)檢測試劑盒  ，英文名 ： LTβ ELISA Kit

Mouse inhibin A (INH-A) ELISA Kit 小鼠抑製素A(INH-A)檢測試劑盒

RatEndomeiumAibody,EMAbELISAKit 大鼠抗子宮內膜抗體(EMAb)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforGamma-ECS(HumanGamma-glamylsysteinesyhetase)ELISAKit人γ穀氨酰半胱合成酶

細胞骨架(肌動蛋白微絲;F-ACTIN)綠色熒光染色試劑盒10次

RatProstaticAcidPhosphatase,PAPELISAKit大鼠前列腺酸性0酸酶(PAP)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

APCS重組小鼠 Serum amyloid P component / APCS / SAP 蛋白 Protein

CNGA2(Cyclic Nucleotide Gated Cation Alpha 2 0.5mgCNGA2(Cyclic Nucleotide Gated Cation Alpha 2) 環核苷酸陽離子通道蛋白α2抗原

BNIP3L重組人 BNIP3L 蛋白 Protein

F3 Protein Human 重組人 Coagulation Factor III / Tissue Factor / CD142 蛋白 (Fc 標簽)

FZD1 Protein Mouse 重組小鼠 Frizzled-1 / FZD1 蛋白

CNGA2(Cyclic Nucleotide Gated Cation Alpha 2 0.5mgCNGA2(Cyclic Nucleotide Gated Cation Alpha 2) 環核苷酸陽離子通道蛋白α2抗原

F3 Protein Human 重組人 Coagulation Factor III / Tissue Factor / CD142 蛋白 (Fc 標簽)

APCS重組小鼠 Serum amyloid P component / APCS / SAP 蛋白 Protein

FZD1 Protein Mouse 重組小鼠 Frizzled-1 / FZD1 蛋白

BNIP3L重組人 BNIP3L 蛋白 Protein

小鼠橫紋肌輔肌動蛋白α (sm Actinin-α)ELISA 試劑盒 96T/48T

Rat thioredoxin (x) ELISA Kit 大鼠硫氧化還原蛋白(x)檢測試劑盒

humanUlasensitivityThyroxine,u-T4ELISAKit 人高敏甲狀腺素(u-T4)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

humanai-neuophilcytoplasmicaibody,cANCA檢測試劑盒人抗中性粒細胞胞漿抗體(cANCA)檢測試劑盒規格：96T/48T

植物染色質免疫沉澱分析(CHIP)試劑盒(包括抗體)10次

humanulasensitivethyroid-stimulatinghormone,U-TSHELISAKit人高靈敏度促甲狀腺激素(U-TSH)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

人肝癌組織源細胞小鼠β細胞素(BTC)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠β葡萄糖酸苷酶(βGD)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠β葡糖苷酶(β-glucosidase)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠β酚(β-naphthol)LISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

注意事項 ：

1. 收到細胞後首先觀察細胞瓶是否完好 ，培養液是否有漏液 、渾濁等現象 ，若有上述現象發生請及時和老哥俱樂部聯係 。

2. 仔細閱讀細胞說明書 ，了解細胞相關信息 ，如細胞形態 、所用培養基 、血清比例 、所需細胞因子等 ，確保細胞培養條件一致 ，若由於培養條件不一致而導致細胞出現問題 ，責任由客戶自行承擔 。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表麵 ，顯微鏡下觀察細胞狀態 。因運輸問題 ，部分細胞由於溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片 ，是正常現象 。觀察好細胞狀態後 ，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置於37℃培養箱放置4-6h 。

4. 貼壁細胞可以消化 ，懸浮細胞直接混勻收集細胞 ，900 rpm-1000 rpm離心3 min ，棄上清 。加5 mL PBS重懸細胞 ，再900 rpm-1000 rpm離心3 min ， ，用新鮮的*培養基重懸細胞 ，並接種到新的培養瓶或培養皿中 ，置於培養箱中進行培養 。

5. 請客戶用相同條件的培養基用於細胞培養 。

6. 建議客戶收到細胞後前3天各拍幾張細胞照片 ，記錄細胞狀態 ，便於和我司技術部溝通交流 。由於運輸的原因 ，個別敏感細胞會出現不穩定的情況 ，請及時和老哥俱樂部聯係 ，告知細胞的具體情況 ，以便老哥俱樂部的技術人員跟蹤回訪直至問題解決 。

7. 該細胞僅供科研使用 。

8. 備注 ：運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞 ，請換用按照說明書細胞培養條件新配製的*培養基來培養細胞 。收到細胞後次傳代建議1 ：2傳代  。

9.注意 ： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿 。不是1個T25瓶傳2個10cm皿 。