老哥俱乐部

细胞简介
：

鸡主动脉平滑肌分离自主动脉组织
；主动脉是体循环的动脉主干。其运行路径为：升主动脉起于左心室，至右侧第2胸肋关节高度移行为主动脉弓
，弓行向左后至第4胸椎体下缘移行为降主动脉；在第12胸椎体高度穿膈的主动脉裂孔移行为腹主动脉，以上为胸主动脉
，至第4腰椎体下缘分为左、右髂总动脉；髂总动脉在骶髂关节高度分为髂内
、外动脉。主动脉平滑肌细胞原代分离培养3天后，可见细胞贴壁伸展，细胞形态大小不一，呈梭形
、不规则形、三角形或扇形，核卵圆形、居中
；2周后细胞汇合
，多数细胞伸展呈长梭形
，胞浆丰富，有分枝状突起
，细胞平行排列成单层或部分区域多层重叠生长
，高低起伏
；细胞密度低时，常交织成网状

；密度高时，则排列为旋涡状或栅栏状
。传代后细胞生长较快
，4-6天即可汇合，并保持上述形态学特征和生长特点。主动脉平滑肌细胞在心血管疾病发生、发展中具有重要作用
，以主动脉平滑肌细胞为实验研究对象

，探讨心血管疾病相关发病机制是目前研究的热点；体外培养的主动脉平滑肌细胞对于研究其生理功能
、药物作用以及各种致病因素作用下的病理生理改变具重要意义。

方法简介：

实验室分离的鸡主动脉平滑肌采用-胶原酶联合消化法结合差速贴壁法制备而来，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶。

质量检测

实验室分离的鸡主动脉平滑肌经α-SMA免疫荧光鉴定
，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1
、HBV、HCV、支原体、细菌
、酵母和真菌等
。

培养信息：

培养基：含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率：每2-3天换液一次

生长特性：贴壁

细胞形态：成纤维细胞样

传代特性
：可传3代左右

消化液
：0.25%

培养条件
：气相
：空气
，95%；CO2
，5%

鸡主动脉平滑肌体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的佳培养状态。

实验报告：

一
、分离与培养
：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小
；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液
，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s
，置37℃消化10 min后
，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min
，弃去上清
，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基

，按实验需要接种于6孔板中继续培养
；二
、免疫荧光鉴定：

1

、待心房肌细胞生长至80%融合时
，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次
，每次10min
，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min
；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min


；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后在室温条件下
，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗
，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1
：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6
、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

公司正在出售的产品：

大鼠巨细胞集落刺激因子(GM-CSF)检测试剂盒 ，英文名： GM-CSF ELISA Kit

Mouse connective tissue growth factor (CTGF) ELISA Kit 小鼠结缔组织生长因子(CTGF)检测试剂盒

Mousecalciumchannelblockers,CCBELISAKit 小鼠钙通道阻滞剂(CCB)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforHumanparamyxovirusparotitisIgMELISAKit人腮腺病毒IgM

同位素标记法组织端粒酶活性AP电泳分析试剂盒10次

ELISAKitpACCase大鼠0酸化乙酰羧化酶

AMY2A重组食蟹猴 AMY2A / Alpha-amylase 蛋白 (Fc 标签) Protein

IL-12(Interleukin-12 0.5mgIL-12(Interleukin-12) 白介素12抗原(白细胞介素-12)

S100A14重组人 S100A14 / S114 蛋白 Protein

FSTL5 Protein Human 重组人 FSTL5 蛋白

IFNB1 Protein Mouse 重组小鼠 IFNB1 / IFN-beta / Interferon beta 蛋白 (Fc 标签)

IL-12(Interleukin-12 0.5mgIL-12(Interleukin-12) 白介素12抗原(白细胞介素-12)

FSTL5 Protein Human 重组人 FSTL5 蛋白

AMY2A重组食蟹猴 AMY2A / Alpha-amylase 蛋白 (Fc 标签) Protein

IFNB1 Protein Mouse 重组小鼠 IFNB1 / IFN-beta / Interferon beta 蛋白 (Fc 标签)

S100A14重组人 S100A14 / S114 蛋白 Protein

小鼠肠脂肪酸结合蛋白(iFABP)ELISA 试剂盒 96T/48T

Human glucocoicoid receptor beta (GR- beta) ELISA Kit 人糖皮质激素受体β(GR-β)检测试剂盒

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HumanBladdeumoraigen,BTA检测试剂盒人膀胱抗原(BTA)检测试剂盒规格
：96T/48T

植物总氨基酸含量荧光定量检测试剂盒20次

HumansubstancePreceptor,SP-RELISAKit人P物质受体(SP-R)检测试剂盒规格：96T/48T

鸡主动脉平滑肌细胞兔组织因子途径抑制物(TFPI)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

兔子组织因子(TF)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

兔子组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

兔子组织多肽抗原(TPA)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象

，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书

，了解细胞相关信息
，如细胞形态、所用培养基、血清比例
、所需细胞因子等
，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题
，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面
，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象

。观察好细胞状态后
，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min
，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min
，，用新鲜的*培养基重悬细胞

，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养
。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片
，记录细胞状态
，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况
，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注
：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代 

。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿
。