老哥俱乐部

实验报告：

一、分离与培养
：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2
、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶）
，混悬10s，置37℃条件下消化10min
，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s
，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化
；

4
、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液
，1200r/min 离心10min
，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶
，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5
、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定
：

1
、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基
，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min

，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min
；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后在4℃条件下
，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4
、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次
，每次10min，按1


：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6
、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照

。

细胞简介：

鸡脂肪干分离自脂肪组织
；脂肪组织主要由大量群集的脂肪细胞构成
，聚集成 团 的脂肪细胞由薄层疏松结缔组织分隔成小叶；贮存的脂肪，在需要时可迅速分解成甘油和 脂肪酸
，经血液输送到各组织以供利用。它们影响胰岛素敏感性、血压水平
、内皮功能 、 纤溶活动及炎症反应，参与多种重要病理生理过程；脂肪组织已由过去单纯作为能量储存 的器官而成为一个极其重要的内分泌系统。脂肪干细胞(ADSCs)是一种具有多向分化潜能 的干细胞
，主要恢复组织细胞的修复功能
，促进细胞的再生，恢复年轻面容的同时，身体 机能也得到充分改善
，有效改善亚健康、早衰等疾病，由内而外真正的有效抵抗衰老。脂 肪干细胞具有很多优点
：①具有自我更新及多向分化的潜能
；②来源充足
；③对供区的创 伤较小；④获得率及体外扩增速率高。脂肪干细胞是目前被广泛应用于组织工程领域中理 想的种子细胞
。

方法简介
：

实验室分离的鸡脂肪干采用胶原酶消化法制备而来，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶

。

质量检测

实验室分离的鸡脂肪干经CD90免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不 含有HIV-1、HBV、HCV、支原体
、细菌、酵母和真菌等。

培养信息：

培养基
：基础培养基，含FBS、EGF、bFGF、Penicillin、Streptomycin等

换液频率：每2-3天换液一次

生长特性：贴壁

细胞形态：成纤维细胞样

传代特性
：可传3代左右

消化液：0.25%

培养条件：气相：空气
，95%；CO2

，5%

鸡脂肪干体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养
，以此保证该细胞的佳培养状态。

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好
，培养液是否有漏液、浑浊等现象
，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态

、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等
，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担
。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态
。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养
。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片
，记录细胞状态

，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况
，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注
：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1

：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿
。不是1个T25瓶传2个10cm皿。

公司正在出售的产品：

大鼠白介素26(IL-26)检测试剂盒 ，英文名： IL-26 ELISA Kit

Mouse leukoiene C4 (LTC4) ELISA Kit 小鼠白三烯C4(LTC4)检测试剂盒

ELISA 小鼠IgG(mouse IgG)  进口分装

CLIAKitforIL-9ELISAKit大鼠白介素9

通用型果胶生物酶比色法定量检测试剂盒20次

ELISAKitAChRab大鼠乙酰受体抗体

IL17A重组绒猴 IL17 / IL17A 蛋白 Protein

Nociceptin 孤菲肽(痛敏肽 0.2mgNociceptin 孤菲肽(痛敏肽)(抗原)

CSNK2A2重组人 CSNK2A2 / CK2A2 蛋白 (His & GST 标签) Protein

EMC8 Protein Human 重组人 EMC8 / COX4NB / NOC4 蛋白

SELP Protein Mouse 重组小鼠 SELP / selectin P / P-selectin 蛋白

Nociceptin 孤菲肽(痛敏肽 0.2mgNociceptin 孤菲肽(痛敏肽)(抗原)

EMC8 Protein Human 重组人 EMC8 / COX4NB / NOC4 蛋白

IL17A重组绒猴 IL17 / IL17A 蛋白 Protein

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CSNK2A2重组人 CSNK2A2 / CK2A2 蛋白 (His & GST 标签) Protein

小鼠碱性成纤维细胞生长因子9(bFGF-9)ELISA 试剂盒 96T/48T

Human bactericidal peptide (cecropin) ELISA Kit 人杀菌肽(cecropin)检测试剂盒

HumancecropinELISAKit 人杀菌肽(cecropin)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

Humanai-EndomysialAibodyIgA,EMAIgA检测试剂盒人抗肌内膜抗体IgA(EMAIgA)检测试剂盒规格：96T/48T

植物甲基化组蛋白H3-K9染色质免疫沉淀分析(CHIP)试剂盒10次

Humanvoltage-gatedcalciumchannel,VGCCELISAKit人钙离子通道抗体(VGCC)检测试剂盒规格：96T/48T

鸡脂肪干细胞小鼠促卵泡素(FSH)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

小鼠促甲状腺素释放激素(H)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

小鼠促甲状腺素(TSH)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

小鼠促黄体激素(LH)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装