老哥俱乐部

细胞简介
：

鸡心脏微血管内皮分离自心脏组织
；心脏是脊椎动物身体中重要的一个器官，主要功能是为血液流动提供压力，把血液运行至身体各个部分。心脏由心肌构成，左心房、左心室、右心房、右心室四个腔组成
。左右心房之间和左右心室之间均由间隔隔开
，故互不相通，心房与心室之间有瓣膜（房室瓣）
，这些瓣膜使血液只能由心房流入心室，而不能倒流。心脏的作用是推动血液流动，向器官、组织提供充足的血流量，以供应氧和各种营养物质，并带走代谢的终产物（如二氧化碳、无机盐、尿素和尿酸等），使细胞维持正常的代谢和功能。心脏微血管内皮细胞是组成心脏微血管腔面单层扁平上皮样细胞
，它所产生和分泌的生物活性物质对维持血管张力
、调节血压
、抗血栓形成等有重要作用，在心脏血管疾病的发病机制中有重要病理生理学意义
。近年来大量研究表明，心肌微血管内皮细胞的功能和病理改变直接影响心肌细胞功能，也是诸多毒素、炎症因子及病毒等重要靶位，其作为体外研究的细胞模型在心肌缺血-再灌注发病机制和细胞间旁分泌细胞生长因子研究中起着重要作用。

方法简介
：

实验室分离的鸡心脏微血管内皮采用胶原酶 - 混合消化法结合密度梯度离心法、后通过内皮细胞专用培养基培养筛选制备而来，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶
。

质量检测

实验室分离的鸡心脏微血管内皮经CD31免疫荧光鉴定
，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV
、HCV、支原体、细菌
、酵母和真菌等。

培养信息：

包被条件：PLL（0.1mg/ml）
，明胶（0.1%）

培养基：含FBS、EGF、bFGF、IGF
、VEGF、Heparin、Hydrocortisone、Penicillin
、Streptomycin等

换液频率
：每2-3天换液一次

生长特性
：贴壁

细胞形态
：内皮细胞样

传代特性
：可传1-2代

消化液
：0.25%

培养条件
：气相：空气
，95%
；CO2，5%

鸡心脏微血管内皮体外培养周期有限


；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的佳培养状态。

实验报告
：

一、分离与培养：

1
、无菌条件下
，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小

；

2
、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3
、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化
；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min
，弃去上清
，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬
，接种于25cm2培养瓶
，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基
，按实验需要接种于6孔板中继续培养
；二

、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2
、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下

，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3
、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5
、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1
：150的比例稀释抗α-actin的二抗
， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

公司正在出售的产品：

大鼠巨噬细胞来源趋化因子(MDC)检测试剂盒 
，英文名
： MDC ELISA Kit

Mouse lipoprotein alpha (Lp- alpha) ELISA Kit 小鼠脂蛋白α(Lp-α)检测试剂盒

Ratierferon-inducibleprotein16,IFI16/p16ELISAKit 大鼠γ干扰素诱导蛋白16/p16(IFI16/p16)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforFN(MouseFibronectin)ELISAKit小鼠纤连蛋白

细胞肌酸激酶同工酶肌肉型(CK-MM)活性比色法定量检测试剂盒25次

RatphosphatidylinositolaibodyIgG/IgM,PIAb-IgG/IgMELISAKit大鼠0脂酰肌醇抗体IgG/IgM(PIAb-IgG/IgM)检测试剂盒规格：96T/48T

FGFR4重组小鼠 FGFR4 / CD334 蛋白 (His & Fc 标签) Protein

CDK7/Cyclin H/MAT1 周期素依赖性激酶7抗原 0.5mgCDK7/Cyclin H/MAT1 周期素依赖性激酶7抗原

AK2重组人 AK2 / Adenylate kinase 2 蛋白 (His & GST 标签) Protein

ELK1 Protein Human 重组人 ELK1 蛋白 (His & GST 标签)

THPO Protein Mouse 重组小鼠 Thrombopoietin / THPO / TPO 蛋白

CDK7/Cyclin H/MAT1 周期素依赖性激酶7抗原 0.5mgCDK7/Cyclin H/MAT1 周期素依赖性激酶7抗原

ELK1 Protein Human 重组人 ELK1 蛋白 (His & GST 标签)

FGFR4重组小鼠 FGFR4 / CD334 蛋白 (His & Fc 标签) Protein

THPO Protein Mouse 重组小鼠 Thrombopoietin / THPO / TPO 蛋白

AK2重组人 AK2 / Adenylate kinase 2 蛋白 (His & GST 标签) Protein

小鼠碱性0酸酶(ALP)ELISA 试剂盒 96T/48T

Rat soluble E selectin (sE-selectin) ELISA Kit 大鼠可溶性E选择素(sE-selectin)检测试剂盒

HumanAttacinELISAKit 人抗菌肽(Attacin)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

Humanai-EJ-aibody，EJ/GlyRS检测试剂盒人EJ抗体/抗甘氨酰NA合成酶抗体(EJ/GlyRS)检测试剂盒规格：96T/48T

植物脊髓过氧化酶(MPO)活性高质敏感比色法定量检测试剂盒20次

HumanvonWillebrandFactor,vWFELISAKit人血管性血友病因子/瑞斯托霉素辅因子(VWF)检测试剂盒规格
：96T/48T

鸡心脏微血管内皮细胞小鼠促上腺皮质激素(mouse ACTH)   作用：   ELISA   规格：      进口分装

小鼠Active Caspase-3   作用
：   ELISA   规格：      进口分装

小鼠Active Caspase-7   作用
：   ELISA   规格：      进口分装

小鼠Active Caspase-8   作用：   ELISA   规格
：      进口分装

注意事项
：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液
、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系

。

2. 仔细阅读细胞说明书
，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题
，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面
，显微镜下观察细胞状态
。因运输问题

，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞
，900 rpm-1000 rpm离心3 min

，弃上清
。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，
，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用
。

8. 备注

：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞
。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿

。不是1个T25瓶传2个10cm皿
。