細胞簡介 ：

大鼠滋養層幹分離自胎盤組織 ；胎盤（placenta）是哺乳動物妊娠期間由胚胎的胚膜和母體子宮內膜聯合長成的母子間交換物質的過渡性器官 ，由羊膜 、葉狀絨毛膜和底蛻膜構成 。胎兒在子宮中發育 ，依靠胎盤從母體取得營養 ，而雙方保持相當的獨立性 。胎盤還產生多種維持妊娠的激素 ，是一個重要的內分泌器官 。有些爬行類和魚類也以胎生方式繁殖後代 ，胚胎生長出一些輔助結構如卵黃囊 、鰓絲等與母體組織緊密結合 ，以達到母子間物質的交換，這樣的結構稱假胎盤 。滋養層幹細胞是胎盤組織細胞的祖細胞 ，與胚胎著床和胎盤的形成密切相關 。胚胎著床和胎盤形成是母體與胎兒建立聯係的關鍵時期 ，此時期滋養層細胞增殖速度快 ，滋養層幹細胞自我更新和分化旺盛 ，與多種妊娠相關疾病的發生 、發展及其增殖 、功能調節的失常有密切關係 。在哺乳動物胚胎發育過程中 ，胚胎細胞次分化形成內細胞團和滋養外胚層。滋養層幹細胞是胎盤細胞的前體細胞 ，在胎盤發育中有重要作用 。

方法簡介 ：

公司實驗室分離的大鼠滋養層幹采用囊胚組織貼壁法製備而來 ，細胞總量約為5×10?cells/瓶 。

質量檢測

公司實驗室分離的大鼠滋養層幹經HLA-E（白細胞抗原）免疫熒光鑒定 ，純度可達90%以上 ，且不含有HIV-1 、HBV 、HCV、支原體 、細菌 、酵母和真菌等 。

培養信息：

培養基 含FBS 、生長添加劑 、Penicillin 、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態 成纖維細胞樣

傳代特性 可傳3代左右

消化液 0.25%

培養條件 氣相 ：空氣 ，95% ；CO2 ，5%

實驗報告 ：

一 、分離與培養 ：

1 、無菌條件下 ，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織 ，然後用PBS將此組織塊清洗2次 ，將組織剪成1mm3左右大小 ；

2 、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶） ，混懸10s ，置37℃條件下消化10min ，之後用滴管吹打製成單細胞懸液 ，自然沉澱並收集上清 ，用含10% FBS培養基終止消化後4℃放置 ；

3 、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液 ，混懸10s ，置37℃消化10 min後 ，按上述方法收集上清並終止消化後4℃放置 ，重複此步驟2-3次 ，直至組織被消化 ；

4 、用200目不鏽鋼篩網過濾細胞消化液 ，1200r/min 離心10min ，棄去上清 ，沉澱細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸 ，接種於25cm2培養瓶 ，放置於37℃  ，5％CO2 培養箱中培養 ；

5 、差速貼壁1h後 ，吸出培養基 ，按實驗需要接種於6孔板中繼續培養 ；二 、免疫熒光鑒定 ：

1 、待心房肌細胞生長至80%融合時 ，棄去培養基 ，用溫育的PBS衝洗細胞2次 ，每次10min，然後用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min ；

2 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在4℃條件下 ，用0.1％Triton X-100透膜15min ；

3 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在室溫條件下 ，用4% BSA封閉細胞30min ；

4 、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗 ，然後將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜 ；

5 、PBS衝洗細胞3次 ，每次10min ，按1 ：150的比例稀釋抗α-actin的二抗 ， 37℃條件下放置1h ；

6 、用PBS衝洗3次 ，每次10min ，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像並拍照 。

公司正在出售的產品 ：

豬組織因子(TF)ELISA 試劑盒

Peroxisome proliferator activated receptor alpha (PPAR- alpha) ELISA Kit 人過氧化物酶體增殖物激活受體α(PPAR-α)檢測試劑盒

Rabbitalpha-granularmembraneprotein,GMP-140ELISAKit 兔血漿α顆粒膜蛋白(GMP-140)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforApo-H(HumanApolipoproteinH)ELISAKit人載脂蛋白H

溴脫氧尿核苷(BrdU)溶液(100毫摩爾)1毫升

Porcinemyelinbasicprotein,MBPELISAKit豬髓0脂堿性蛋白(MBP)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

CCL2重組小鼠 CCL2 / MCP-1 / MCP1 蛋白 Protein

1α(MEP1α)重組蛋白 Recombinant Meprin A Alpha (MEP1a)

RIOK1重組人 RIOK1 / RIO kinase 1 蛋白 (His & GST 標簽) Protein

CDC37 Protein Human 重組人 CDC37 / CDC37A 蛋白 (GST 標簽)

IgG Protein Rabbit 重組兔 IgG-Fc 蛋白 (185 Thr/Ala, Asn 284/Ser)

1α(MEP1α)重組蛋白 Recombinant Meprin A Alpha (MEP1a)

CDC37 Protein Human 重組人 CDC37 / CDC37A 蛋白 (GST 標簽)

CCL2重組小鼠 CCL2 / MCP-1 / MCP1 蛋白 Protein

IgG Protein Rabbit 重組兔 IgG-Fc 蛋白 (185 Thr/Ala, Asn 284/Ser)

RIOK1重組人 RIOK1 / RIO kinase 1 蛋白 (His & GST 標簽) Protein

小鼠仙台病毒(Sendai)檢測試劑盒 96T/48T

Rat bone morphogenetic protein 4 (BMP-4) ELISA Kit 大鼠骨成型蛋白4(BMP-4)檢測試劑盒

Humanproteinase-aineuophilcytoplasmicaibody,PR3-ANCAELISAKit 人蛋白酶3特異性抗中性粒細胞胞質抗體(PR3-ANCA)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

Chickenheparansulfate,HS檢測試劑盒雞類肝素(HS)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

載玻片細胞CDK4蛋白表達熒光顯微鏡檢測試劑盒10/20次

MouseHeatShockProtein70,Hsp-70ELISAKit小鼠熱休克蛋白70(HSP-70)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

大鼠滋養層幹細胞小鼠血管緊張素 I (mouse ANG I)   作用 ：   ELISA   規格 ：   96T   美國 Phoenix

小鼠血管緊張素 II (mouse ANG II)   作用 ：   ELISA   規格 ：   96T   美國 Phoenix

mouse CD 40L ELISA Kit   作用 ：   ELISA   規格 ：   96T   奧地利 Bender

大鼠 C 反應蛋白 (rat CRP)   作用 ：   ELISA   規格 ：   96T   美國 ADI

注意事項 ：

1. 收到細胞後首先觀察細胞瓶是否完好 ，培養液是否有漏液 、渾濁等現象 ，若有上述現象發生請及時和老哥俱樂部聯係 。

2. 仔細閱讀細胞說明書 ，了解細胞相關信息 ，如細胞形態 、所用培養基 、血清比例 、所需細胞因子等 ，確保細胞培養條件一致 ，若由於培養條件不一致而導致細胞出現問題，責任由客戶自行承擔 。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表麵 ，顯微鏡下觀察細胞狀態 。因運輸問題 ，部分細胞由於溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片 ，是正常現象 。觀察好細胞狀態後 ，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置於37℃培養箱放置4-6h 。

4. 貼壁細胞可以消化 ，懸浮細胞直接混勻收集細胞 ，900 rpm-1000 rpm離心3 min ，棄上清 。加5 mL PBS重懸細胞 ，再900 rpm-1000 rpm離心3 min ， ，用新鮮的*培養基重懸細胞 ，並接種到新的培養瓶或培養皿中 ，置於培養箱中進行培養 。

5. 請客戶用相同條件的培養基用於細胞培養 。

6. 建議客戶收到細胞後前3天各拍幾張細胞照片 ，記錄細胞狀態 ，便於和我司技術部溝通交流。由於運輸的原因 ，個別敏感細胞會出現不穩定的情況 ，請及時和老哥俱樂部聯係 ，告知細胞的具體情況 ，以便老哥俱樂部的技術人員跟蹤回訪直至問題解決 。

7. 該細胞僅供科研使用。

8. 備注 ：運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞 ，請換用按照說明書細胞培養條件新配製的*培養基來培養細胞 。收到細胞後次傳代建議1 ：2傳代  。

9.注意 ： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿 。不是1個T25瓶傳2個10cm皿 。