① 組織塊培養法

組織塊培養是常用 、簡便易行和成功率較高的原代培養方法 。其基本方法是將剪成的小組織團塊接種於培養瓶(或皿)中 ，瓶壁可預先塗以膠原薄層 ，以利於組織塊粘著於瓶壁 ，使周邊細胞能沿瓶壁向外生長 。

② 消化培養法

③ 懸浮細胞培養法

對於懸浮生長的細胞 ，如白血病細胞 、淋巴細胞 、骨髓細胞 、胸水和腹水中的癌細胞和免疫細胞無需消化 ，可采用低速離心分離 ，直接培養 ，或經淋巴細胞分層液分離後接種培養 。

④器官培養

器官培養是指從供體取得器官或組織塊後 ，不進行組織分離而直接在體外的特定環境條件下培養 ，器官培養可保持器官組織的相對完整性 ，可用於重點觀察細胞間的聯係 、排列情況和相互影響 ，以及局部環境的生物調節作用 。

產品名稱 ：大鼠椎間盤纖維環細胞

英文名稱 ：Rat Intervertebral Disc Fibroblast Cells

組織來源 ：椎間盤組織

產品規格 ：5×105cells/T25細胞培養瓶

大鼠椎間盤纖維環分離自椎間盤組織 ；椎間盤是位於脊柱兩椎體之間 ，由軟骨板 、纖維環 、髓核組成的一個密封體 。上下有軟骨板 ，是透明軟骨複蓋於椎體上 ，下麵骺環中間的骨麵 。上下的軟骨板與纖維環一起將髓核密封起來 。纖維環由膠原纖維束的纖維軟骨構成 ，位於髓核的四周 。纖維環的纖維束相互斜行交叉重疊 ，使纖維環成為堅實的組織 ，能承受較大的彎曲和扭轉負荷 。纖維環的前側及兩側較厚 ，而後側較薄 。纖維環的前部有強大的前縱韌帶 ，後側的後縱韌帶較窄 、較薄 。纖維環細胞密度為9000個細胞/mm3 ，其外層的細胞呈梭型 ，主要屬於纖維細胞 ，內層細胞呈圓形 ，主要屬於軟骨細胞 。在培養的情況下 ，用透射電鏡觀察則有許多共同的超微結構表現 ，它們的核較圓 ，核仁較明顯 。細胞質內可見大量的附有核糖體顆粒的粗麵內質網和滑麵內質網 。細胞質內線粒體多 ，為橢圓形 ，有的可看到雙層單位膜 ，由單位膜包繞初級深酶體和次級深酶體 。細胞質內有一係列的扁平囊及小泡主成的高爾基複合體和分泌顆粒 ，纖維環細胞合成分泌蛋白多糖及膠原纖維的能力很旺盛 ，保證纖維環生理代謝活動所需的構造物質的供給 。一但這種供給減少 ，纖維環的生物性能就會減弱 ，椎間盤開始退變 。

公司實驗室分離的大鼠椎間盤纖維環采用膠原酶-聯合消化法並結合軟骨細胞專用培養基培養篩選製備而來 ，細胞總量約為5×10?cells/瓶 。

質量檢測

公司實驗室分離的大鼠椎間盤纖維環經Ⅰ型膠原蛋白免疫熒光鑒定 ，純度可達90%以上 ，且不含有HIV-1 、HBV 、HCV 、支原體 、細菌 、酵母和真菌等 。

培養基 含FBS 、生長添加劑 、Penicillin 、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態 梭形 、多角形

傳代特性 可傳5代左右 ；3代以內狀態佳

消化液 0.25%

培養條件 氣相 ：空氣 ，95% ；CO2，5%

取材→分離→培養和維持

1 、取材

人和動物細胞的取材是原代細胞培養成功的首要條件 ，直接影響細胞的體外培養 。

(1) 取材的基本要求

① 取材要注意新鮮和保鮮

② 應嚴格無菌

③ 防止機械損傷

④ 去除無用組織和避免幹燥

⑤ 應注意組織類型 、分化程度 、年齡等

⑥ 作好記錄

2 、分離

人或動物體內(或胚胎組織)由於多種細胞結合緊密 ，不利於各個細胞在體外培養中生長繁殖 ，必須將現有的組織塊充分散開 ，使細胞解離出來 。

(1)懸浮細胞的分離方法

組織材料若來自血液 、羊水 、胸水或腹水的懸液材料 ，的方法是采用1000r/min的低速離心10分鍾 。經離心後由於各種細胞的比重不同可在分層液中形成不同層 ，這樣可根據需要收獲目的細胞 。

(2)實體組織材料的分離方法

對於實體組織材料 ，由於細胞間結合緊密 ，為了使組織中的細胞充分分散 ，形成細胞懸液 ，可采用機械分散法(物理裂解)和消化分離法 。

① 機械分散法

特點:簡便 、快速,但對組織機械損傷大 ，而且細胞分散效果差,適用於處理纖維成分少的軟組織 。

② 消化分離法

組織消化法是把組織剪切成較小團塊(或糊狀) ，應用酶的生化作用和非酶的化學作用進一步使細胞間的橋連結構鬆動 ，使團塊膨鬆 ，由塊狀變成絮狀 ，此時再采用機械法 ，用吸管吹打分散或電磁攪拌或在搖珠瓶中振蕩 ，使細胞團塊得以較充分的分散 ，製成少量細胞群團和大量單個細胞的細胞懸液 ，接種培養後 ，細胞容易貼壁生長 。

小鼠堿性0酸酶   英文名稱 ：   Mouse Alkaline phosphatase   規格 ：      英文縮寫 ：   ALP

小鼠同種異體移植性因子1   英文名稱 ：   Mouse Allograft Inflamuatory Factor 1   規格 ：      英文縮寫 ：   AIF-1

小鼠血管生成素樣蛋白2   英文名稱 ：   Mouse Angiopoietin like protein 2   規格 ：      英文縮寫 ：   ANGPTL2

小鼠血管生成素樣蛋白4   英文名稱 ：   Mouse Angiopoietin Like Protein 4   規格 ：      英文縮寫 ：   ANGPTL4

小鼠0酸化蛋白激酶C(P-PKC)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human prostacycline (PGI) ELISA Kit 人前列環素(PGI)試劑盒

Humanα-Smoothmuscleactin,α-SMAELISAKit 人α平滑肌肌動蛋白(α-SMA)試劑盒 96T/48T 進口分裝

HumanAdenovirusIgG,ADV-IgG試劑盒人腺病毒IgG(ADV-IgG)試劑盒規格 ：96T/48T

植酸待測樣品處理試劑盒20次

Mousealpha-fetoproteinLensculinarisaggliin2,AFP-L2ELISAKit小鼠小扁結合型甲胎蛋白/甲胎蛋白異質體2(AFP-L2)試劑盒規格 ：96T/48T

PREP重組小鼠 Prolyl endopeptidase / PREP 蛋白 Protein

鈣非依賴性0脂酶A2(iPLA2)重組蛋白 Recombinant Phospholipase A2, Calcium Independent (iPLA2)

MAP1LC3B重組人 LC3B / MAP1LC3B 蛋白 Protein

DAPK3 Protein Human 重組人 DAPK3 / ZIPK 蛋白 (GST 標簽)

CXCL13 Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 CXCL13 / BCA-1 / BLC 蛋白

T-細胞免疫調節因子1(TCIRG1)重組蛋白 Recombinant T-Cell, Immune Regulator 1 (TCIRG1)

DAPK3 Protein Human 重組人 DAPK3 / ZIPK 蛋白 (GST 標簽)

AARS重組小鼠 AARS / alanyl-tRNA synthetase 蛋白 Protein

EPCAM Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 / 恒河猴 EpCAM / TROP-1 / TACSTD1 蛋白

CXCL11重組人 I-TAC / CXCL11 蛋白 Protein

大鼠椎間盤纖維環細胞大鼠載脂蛋白E(APOE)試劑盒  ，英文名 ： APOE ELISA Kit

Mouse phospho protein kinase C (P-PKC) ELISA Kit 小鼠0酸化蛋白激酶C(P-PKC)試劑盒

MouseIerleukin9,IL-9ELISAKIT 小鼠白介素9(IL-9)試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforHumanfractalkine/CX3CL1ELISAKit人趨化因子

細胞/組織多聚賴載玻片製備試劑盒5次(50至100片)

ELISAKitMMP-9大鼠基質金屬蛋白酶9/明膠酶B

視天氣狀況和運輸距離遠近,公司與客戶協商後選擇下述方式中的一種進行 。

1)1mL凍存細胞懸液裝於1.8ml的凍存管中,置於裝滿幹冰的泡沫保溫盒中進行運輸;收到細胞後請盡快解凍複蘇細胞進行培養,如無法立刻進行複蘇操作,凍存細胞可在-80℃的條件下保存1個月 。

T-25培養瓶充滿培養基後進行常溫運輸;收到細胞後請鏡下觀察細胞生長狀態,如鋪瓶率超過85%請立即進行傳代操作,如懸浮的細胞較多,請將培養瓶至於培養箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細胞能夠再次貼壁 。本公司的所有產品僅用於科學研究或者工業科研等非醫療目的 ，不可用於人類或動物的臨床診斷或治療 ，非藥用 ，非食用