老哥俱乐部

实验报告：

一、分离与培养：

1
、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s

，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3
、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液
，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化
；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min
，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养
；

5
、差速贴壁1h后，吸出培养基
，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定

：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下
，用0.1％Triton X-100透膜15min
；

3
、PBS冲洗细胞2次

，每次10min
，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min
；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5
、PBS冲洗细胞3次
，每次10min，按1

：150的比例稀释抗α-actin的二抗
， 37℃条件下放置1h
；

6
、用PBS冲洗3次，每次10min
，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

细胞简介

：

大鼠髋臼软骨分离自髋关节软骨组织，髋关节是人体最大
、关节之一，是典型的球臼关节。髋关节既具有良好的内在稳定性，也具有灵活的活动性。髋臼位于髋骨外侧面中央，呈半球形深凹

，直径约30~50mm，表面覆盖厚约2mm的透明关节软骨，呈半月形分布
。中央是髋臼窝
，无软骨覆盖
，由哈佛腺充填
，可以随关节内压力的增减挤出或者吸入关节液，以维持关节内压力的平衡。髋臼边缘的环形关节盂唇可以加深
、加宽髋臼，使髋臼容纳股骨头的大部并处于稳定的位置，加强了髋关节的稳定性。幼稚的关节软骨细胞位于关节软骨组织的表层，单个分布、体积较小、呈椭圆形
，长轴与关节软骨表面平行，越向深层的关节软骨细胞体积之间增大呈圆形
，细胞核圆形或卵圆形、染色浅，细胞质弱嗜碱性，常见数量不一的脂滴
。成熟的关节软骨细胞多2-8个成群分布于关节软骨陷窝内，这些关节软骨细胞由同一个母细胞分裂增殖而成，称为同源细胞群。电镜下，关节软骨细胞有突起和皱褶，细胞质内有大量的粗面内质网和发达的高尔基复合体及少量的线粒体
。在组织切片中，关节软骨细胞收缩为不规则形，在软骨囊和细胞之间出现较大的腔隙
。体外培养的关节软骨细胞对于研究其生理功能
、药物作用以及各种致病因素作用下的病理生理改变具重要意义。

方法简介：

公司实验室分离的大鼠髋臼软骨采用胶原酶联合消化制备而来
，细胞总量约为5×105cells/瓶
。

质量检测

公司实验室分离的大鼠髋臼软骨经Ⅱ型胶原蛋白免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV
、HCV、支原体
、细菌
、酵母和真菌等

。

培养信息：

培养基 含FBS、生长添加剂
、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次
；

生长特性 贴壁

细胞形态 梭形、多角形

传代特性 可传3代左右

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气，95%
；CO2，5%

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液
、浑浊等现象
，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书
，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基
、血清比例
、所需细胞因子等
，确保细胞培养条件一致
，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担
。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片
，是正常现象。观察好细胞状态后
，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h

。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min

，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养
。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片
，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流
。由于运输的原因
，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决
。

7. 该细胞仅供科研使用
。

8. 备注
：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞
，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代

。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。

公司正在出售的产品：

大鼠分泌型0脂酶A2(sPLA2)检测试剂盒 ，英文名： sPLA2 ELISA Kit

Porcine maix metalloproteinase 9 (MMP-9) ELISA Kit 猪基质金属蛋白酶9(MMP-9)检测试剂盒

转基因植物Sad1基因核酸检测试剂盒 48T

CLIAKitforMBLR(HumanMannmabindinglectieceptor)ELISAKit人甘露糖凝集素受体

体液氧化应激活性氧(ROS)比色法定量检测试剂盒(羟自由基)20次

ELISAKitAFP裸鼠甲种胎儿球蛋白/甲胎蛋白

CD28重组小鼠 CD28 蛋白 (His & Fc 标签) Protein

CGRP (calcitonin gene related peptide, CGRP 0.5mgCGRP (calcitonin gene related peptide, CGRP) 降钙素基因相关肽

CMBL重组人 CMBL 蛋白 Protein

CCL7 Protein Human 重组人 MCP-3 / CCL7 蛋白

MBL1 Protein Mouse 重组小鼠 MBL1 蛋白

IgG-Fc片段低亲和力受体Ⅲb(FcγR3B)重组蛋白 Recombinant Fc Fragment Of IgG Low Affinity IIIb Receptor (FcgR3B)

CCL7 Protein Human 重组人 MCP-3 / CCL7 蛋白

IL12A & IL12B重组小鼠 IL-12 (IL12A & IL12B Heterodimer) 蛋白 Protein

HAVCR1 Protein Rat 重组大鼠 KIM-1 / TIM1 / HACVR1 蛋白

PDIA4重组人 ERP72 / PDIA4 蛋白 Protein

小鼠乙型肝核心抗体(HBcAb)ELISA 试剂盒 96T/48T

Human soluble P selectin (sP-selectin) ELISA Kit 人可溶性P选择素(sP-selectin)检测试剂盒

Humancytokeratin19,CK-19ELISAKit 人细胞角蛋白19(CK-19)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitfor6-keto-PGF1a(Human6-keto-prostaglandinF1a)ELISAKit人6同前列腺素F1a

饮料D-葡萄糖酸盐比色法定量检测试剂盒20次

Mousemajorhistocompatibilitycomplex-Ⅲ,MHC-Ⅲ/H-2ⅢELISAKit小鼠主要组织相容性复合体Ⅲ类(MHC-Ⅲ/H-2Ⅲ)检测试剂盒规格
：96T/48T

大鼠髋臼软骨细胞血管紧张素Ⅱ一型受体抗原   英文名称
：   Angiotensin 2 Receptor 1 Aigen   英文缩写：   AT1R   规格：  

抗血管紧张素‖受体︱型自身抗体   英文名称：    Angiotensin 2 Receptor 1 Aoaibodies   英文缩写：   AT1R-AA   规格
：  

血管紧张素Ⅰ   英文名称：   AngiotensinⅠ   英文缩写
：   ANGⅠ   规格
：  

血管紧张素Ⅱ   英文名称

：   Angiotensin Ⅱ   英文缩写：   ANGⅡ   规格
：