老哥俱乐部

细胞简介：

大鼠口腔粘膜成纤维分离自口腔粘膜组织


；口腔（oral cavity）是消化道的起始部分。前借口裂与外界相通
，后经咽峡与咽相续
。口腔内有牙
、舌等器官
。口腔的前壁为唇、侧壁为颊、顶为腭、口腔底为黏膜和肌等结构。口腔借上
、下牙弓分为前外侧部的口腔前庭（oral vestibule）和后内侧部的固有口腔（oral cavity proper）；当上
、下颌牙咬合时，口腔前庭与固有口腔之间可借第三磨牙后方的间隙相通。成纤维细胞（Fibroblast）是疏松结缔组织的主要细胞成分，由胚胎时期的间充质细胞分化而来。成纤维细胞较大

，轮廓清楚，多为突起的纺锤形或星形的扁平状结构，其细胞核呈规则的卵圆形，核仁大而明显。成纤维细胞功能活动旺盛，细胞质嗜弱碱性，具明显的蛋白质合成和分泌活动，在一定条件下
，它可以实现跟纤维细胞的互相转化；成纤维细胞对不同程度的细胞变性、坏死和组织缺损的修复有着十分重要的作用
。刚分离的表皮成纤维细胞呈圆形、折光性良好
，悬浮于培养基中

。30min细胞贴壁，其中部分开始伸出伪足，表现为小的突起；6h后细胞基本贴壁
，伸展成梭形

，胞核清晰，分布较均匀
，散在生长，不聚集成团；细胞生长迅速

，5-7天即呈融合状态
，细胞排列紧密

，有的交叉重叠生长，平坦
、胞体较大
，细胞质透明
，细胞核较大，呈椭圆形，颜色淡。细胞融合，并彼此连接成网状；细胞呈突起的纺锤形或星形的扁平分布。

方法简介
：

公司实验室分离的大鼠口腔粘膜成纤维采用-胶原酶混合酶消化后差速贴壁制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测

公司实验室分离的大鼠口腔粘膜成纤维经Vimentin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上
，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养信息
：

培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 成纤维细胞样

传代特性 可传3代左右

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气
，95%
；CO2，5%

实验报告
：

一、分离与培养：

1
、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织
，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小
；

2
、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min
，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清
，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次
，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清
，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶
，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后
，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养
；二、免疫荧光鉴定：

1
、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2
、PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后在4℃条件下
，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下
，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗
，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5
、PBS冲洗细胞3次
，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6
、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

公司正在出售的产品
：

大鼠分泌型免疫球蛋白A(sIgA)检测试剂盒
，英文名
： sIgA ELISA Kit

Porcine melanoma metastasis surface adhesion molecule (MMSAM) ELISA Kit 猪黑色素瘤转移表面黏附分子(MMSAM)检测试剂盒

转基因植物Sad1基因核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法) 48T

CLIAKitforMBPELISAKit大鼠主要碱性蛋白

体液氧化应激活性氧(ROS)比色法测定试剂盒(单线态氧气)20次

ELISAKitCC16裸鼠克拉拉细胞蛋白

IL12A & IL12B重组小鼠 IL-12 (IL12A & IL12B Heterodimer) 蛋白 Protein

IgG-Fc片段低亲和力受体Ⅲb(FcγR3B)重组蛋白 Recombinant Fc Fragment Of IgG Low Affinity IIIb Receptor (FcgR3B)

PDIA4重组人 ERP72 / PDIA4 蛋白 Protein

CCL7 Protein Human 重组人 MCP-3 / CCL7 蛋白

HAVCR1 Protein Rat 重组大鼠 KIM-1 / TIM1 / HACVR1 蛋白

β-血小板球蛋白(βTG)重组蛋白 Recombinant Beta-Thromboglobulin (bTG)

CCL7 Protein Human 重组人 MCP-3 / CCL7 蛋白

CPM重组小鼠 Carboxypeptidase M / CPM 蛋白 Protein

CD63 Protein Cynomolgus 重组食蟹猴 CD63 / Tspan-30 / Tetraspanin-30 蛋白

PRTFDC1重组人 PRTFDC1 蛋白 Protein

小鼠抑瘤素M(OSM)ELISA 试剂盒 96T/48T

Human soluble E selectin (sE-selectin) ELISA Kit 人可溶性E选择素(sE-selectin)检测试剂盒

Humancytokeratin18,CK-18ELISAKit 人细胞角蛋白18(CK-18)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitfor6-keto-PGF1a(Mouse6-keto-prostaglandinF1a)ELISAKit小鼠6同前列腺素F1a

饮料D-葡萄糖酸内脂比色法定量检测试剂盒20次

Mousemalondialchehyche,MDAELISAKit小鼠二(MDA)检测试剂盒规格
：96T/48T

大鼠口腔粘膜成纤维细胞血管紧张素I(素、AngI)   96T/48T

固（ALD）   96T/48T

基质金属蛋白酶-9（MMP-9）   96T/48T

基质金属蛋白酶抑制剂-1（TIMP-1）   96T/48T

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好
，培养液是否有漏液
、浑浊等现象
，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书
，了解细胞相关信息
，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致
，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题
，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面
，显微镜下观察细胞状态。因运输问题
，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象
。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化
，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中
，置于培养箱中进行培养
。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因
，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况
，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代
。

9.注意
： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿
。