老哥俱乐部

细胞简介
：

大鼠骨髓树突状分离自骨髓
；骨髓是机体的造血组织，位于身体的许多骨骼内

。成年动物的骨髓分两种：红骨髓和黄骨髓
。红骨髓能制造红细胞、血小板和各种白细胞
。血小板有止血作用，白细胞能杀灭与抑制各种病原体
，包括细菌、病毒等；某些淋巴细胞能制造抗体
。因此，骨髓不但是造血器官
，它还是重要的免疫器官。骨髓是存在于长骨(如肱骨、股骨)的骨髓腔和扁平骨(如髂骨)的稀松骨质间的网眼中

，是一种海绵状的组织，能产生血细胞的骨髓略呈红色，称为红骨髓。出生时，红骨髓充满全身骨髓腔，随着年龄增大，脂肪细胞增多，相当部分红骨髓被黄骨髓取代，最后几乎只有扁平骨骨髓腔中有红骨髓
。骨髓DC细胞是由骨髓单核细胞诱导而成的；树突状细胞分为成熟树突状细胞和未成熟树突状细胞
，典型的未成熟树突状细胞呈半贴壁生长，在GM-CSF
、IL4的作用下形成葡萄串样集落，细胞大而形态不规则
，表面皱褶多，亦可见少量短刺状突，胞内细胞器丰富并可见吞噬泡，具有较强的迁移能力，伴随有部分未诱导成的单核细胞，贴壁形态多样
。而成熟的树突状细胞由未成熟DC进一步经TNFα、LPS等诱导而成
，多数呈悬浮生长， 细胞呈圆形，细胞体积进一步增大，表面大量粗细不等的树枝样突起(高倍镜或者电镜下可观察到 )，伴随少量贴壁未成熟细胞或者单核细胞。未成熟DC细胞长时间培养也可能导致自发分化成熟。DC细胞尚无特异性细胞表面分子标志，主要通过形态学
、组合性细胞表面标志
、在混合淋巴细胞反应中能激活初始T细胞等特征进行鉴定。其中成熟树突状细胞表面高表达主要组织相容性复合物(MHC)以及CD80、CD86等共刺激分子，进而激活T淋巴细胞，诱导免疫应答
，处于启动、调控、并维持免疫应答的中心环节；未成熟树突状细胞具有很强的抗原摄取加工能力，但由于缺乏多种共刺激分子不能使初始T细胞活化、增殖产生免疫应答，不能激活T细胞的信号，可导致T细胞无能，从而诱导免疫低反应或抗原免疫特异性耐受

。未成熟树突状细胞表面CD80
、CD86
、MHC-Ⅱ类分子等共刺激分子表达较低，一般在30%以下。

方法简介
：

实验室分离的大鼠骨髓成熟DC采用密度梯度离心法分离骨髓单个核细胞、培养过程添加细胞因子诱导而来，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶

。

质量检测

实验室分离的大鼠骨髓树突状(成熟DC细胞)经CD86免疫荧光鉴定、细胞形态等综合鉴定，纯度可达80%以上，且不含有HIV-1
、HBV、HCV、支原体

、细菌、酵母和真菌等。

培养信息
：

培养基：含FBS、生长添加剂、Penicillin
、Streptomycin等

换液频率
：每2-3天换液一次

生长特性：半贴壁半悬浮

细胞形态：圆形，树突状

传代特性：属于高度分化细胞；属于不增殖细胞群

消化液
：0.25%

培养条件：气相

：空气，95%；CO2，5%

大鼠骨髓树突状成熟DC细胞)体外培养周期有限
；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的培养状态。

实验报告：

一、分离与培养
：

1、无菌条件下
，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小
；

2
、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s
，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次
，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬
，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养
；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基
，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定
：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时
，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2
、PBS冲洗细胞2次
，每次10min
，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min
；

3、PBS冲洗细胞2次
，每次10min
，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min

；

4
、按1: 100的比例稀释α-actin一抗
，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min
，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗
， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次
，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

公司正在出售的产品：

大鼠钙激活1(CAPN1)检测试剂盒 
，英文名
： CAPN1 ELISA Kit

Porcine telomerase (TE) ELISA Kit 猪端粒酶(TE)检测试剂盒

转基因植物TE基因核酸检测试剂盒 48T

CLIAKitforMCAb(Mousemelanocyteaibody)ELISAKit小鼠黑色素细胞抗体

体液血管紧张素Ⅰ转化酶1(ACE1)活性荧光共振能量转移法(FRET)定量检测试剂盒20次

ELISAKitIgE马免疫球蛋白E

NTRK1重组大鼠 TrkA / NTRK1 蛋白 (Fc 标签) Protein

DR3/TRAMP (death receptor-3 0.5mgDR3/TRAMP (death receptor-3) DR3 死亡受体(抗原)

CTNNB1重组人 beta-Catenin / CTNNB1 蛋白 (His & GST 标签) Protein

CCL15 Protein Human 重组人 CCL15 / MIP-5 / MIP-1 delta 蛋白 (aa 46-113, His 标签)

CD36 Protein Mouse 重组小鼠 CD36 / SCARB3 蛋白

DR3/TRAMP (death receptor-3 0.5mgDR3/TRAMP (death receptor-3) DR3 死亡受体(抗原)

CCL15 Protein Human 重组人 CCL15 / MIP-5 / MIP-1 delta 蛋白 (aa 46-113, His 标签)

NTRK1重组大鼠 TrkA / NTRK1 蛋白 (Fc 标签) Protein

CD36 Protein Mouse 重组小鼠 CD36 / SCARB3 蛋白

CTNNB1重组人 beta-Catenin / CTNNB1 蛋白 (His & GST 标签) Protein

小鼠脂蛋白脂酶(LPL)ELISA 试剂盒 96T/48T

Human ai scleroderma aibody 70 (SCL70/topo 1) ELISA Kit 人抗硬皮病抗体70(SCL70/topoⅠ)检测试剂盒

Humahymus-dependeaigen,TD-AgELISAKit 人依赖性抗原(TD-Ag)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforAAA(HumanAi-adrenocoicalaibody)ELISAKit人抗肾上腺皮质抗体

胰岛素细胞脂肪诱导生成比色法定量检测试剂盒20次

MouseNeuroglobin,NGBELISAKit小鼠脑红蛋白(NGB)检测试剂盒规格：96T/48T

大鼠骨髓树突状细胞(成熟DC细胞)血清游离（FC）含量测定试剂盒   可见分光光度法   50管/48样

乙酰酯酶（AchE）试剂盒   可见分光光度法   50管/48样

组织及血液酸性0酸酶（ACP）试剂盒   可见分光光度法   50管/24样

组织及血液碱性0酸酶（AKP/ALP）试剂盒   可见分光光度法   50管/24样

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好
，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态
、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担
。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片
，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清
。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min
，
，用新鲜的*培养基重悬细胞
，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养
。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养


。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系

，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决
。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注
：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意
： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。