老哥俱乐部

细胞简介：

大鼠Ⅱ型肺泡上皮分离自肺组织；肺泡由单层上皮细胞构成的半球状囊泡
。肺中的支气管经多次反复分枝成无数细支气管

，它们的末端膨大成囊，囊的四周有很多突出的小囊泡，即为肺泡
。小肺泡细胞
，又称I型肺泡细胞，厚约0.1微米
，基底部是基底膜
，无增殖能力。大肺泡细胞
，又称Ⅱ型肺泡细胞
，分泌表面活性物质（二棕榈酰），以降低肺泡表面张力。Ⅱ型肺泡细胞位于Ⅰ型肺泡细胞之间，数量较Ⅰ型肺泡细胞多，但覆盖面积比Ⅰ型肺泡细胞小。细胞立方形或圆形,顶端突入肺泡腔
。细胞核圆形，胞质着色浅

、呈泡沫状
。电镜下
，细胞游离而有少量微绒毛
，胞质内富含线粒体和溶酶体，有较发达的粗面内质网和高尔基复合体。核上方有较多的分泌颗粒，电子密度高、大小不等，直径约0.1-1.0μm颗粒内含有平行排列的板层状结构，称为嗜饿性板层小体
。小体内的主要成分为磷脂
，以二棕榈酰为主，此外还有糖胺多糖及蛋白质等。颗粒内物质释放出来后，在肺泡表面形成一层粘液层，称为表面活性物质（surfactant）
。表面活性物质有降低肺泡表面张力、稳定肺泡大小的作用。呼气时肺泡缩小，表面活性物质密度增加，表面张力降低
，防止肺泡过度塌陷；吸气时肺泡扩张，表面活性物质密度减小，肺泡回缩力加大，可防止肺泡过度膨胀
。表面活性物质的缺乏或变性均可引起肺不张，过度通气可造成表面活性物质缺乏
；吸入毒气可直接破坏表面活性物质。Ⅱ型肺泡细胞有分裂、增殖并分化为Ⅰ型肺泡细胞的潜能
，故具有修复受损伤上皮的作用。

方法简介
：

公司实验室分离的大鼠Ⅱ型肺泡上皮采用弹性蛋白酶灌注消化法结合差速贴壁法，并通过上皮细胞专用培养基培养筛选制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测

公司实验室分离的大鼠Ⅱ型肺泡上皮经SP-C免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养信息
：

包被条件 鼠尾胶原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培养基 含FBS
、生长添加剂
、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 上皮细胞样

传代特性 可传1-2代

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气，95%；CO2，5%

实验报告：

一
、分离与培养
：

1、无菌条件下
，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶）
，混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清
，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置
；

3
、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液
，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4
、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液

，1200r/min 离心10min
，弃去上清
，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶
，放置于37℃
，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时

，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次
，每次10min
，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3

、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下
，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5
、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

公司正在出售的产品
：

小鼠血管紧张素 I (mouse ANG I)   作用：   ELISA   规格：   96T   美国 Phoenix

小鼠血管紧张素 II (mouse ANG II)   作用：   ELISA   规格：   96T   美国 Phoenix

mouse CD 40L ELISA Kit   作用：   ELISA   规格：   96T   奥地利 Bender

大鼠 C 反应蛋白 (rat CRP)   作用：   ELISA   规格
：   96T   美国 ADI

小鼠仙台病毒(Sendai)试剂盒 96T/48T

Rat bone morphogenetic protein 4 (BMP-4) ELISA Kit 大鼠骨成型蛋白4(BMP-4)试剂盒

Humanproteinase-aineuophilcytoplasmicaibody,PR3-ANCAELISAKit 人蛋白酶3特异性抗中性粒细胞胞质抗体(PR3-ANCA)试剂盒 96T/48T 进口分装

Chickenheparansulfate,HS试剂盒鸡类肝素(HS)试剂盒规格

：96T/48T

载玻片细胞CDK4蛋白表达荧光显微镜试剂盒10/20次

MouseHeatShockProtein70,Hsp-70ELISAKit小鼠热休克蛋白70(HSP-70)试剂盒规格：96T/48T

CCL2重组小鼠 CCL2 / MCP-1 / MCP1 蛋白 Protein

1α(MEP1α)重组蛋白 Recombinant Meprin A Alpha (MEP1a)

RIOK1重组人 RIOK1 / RIO kinase 1 蛋白 (His & GST 标签) Protein

CDC37 Protein Human 重组人 CDC37 / CDC37A 蛋白 (GST 标签)

IgG Protein Rabbit 重组兔 IgG-Fc 蛋白 (185 Thr/Ala, Asn 284/Ser)

1α(MEP1α)重组蛋白 Recombinant Meprin A Alpha (MEP1a)

CDC37 Protein Human 重组人 CDC37 / CDC37A 蛋白 (GST 标签)

CCL2重组小鼠 CCL2 / MCP-1 / MCP1 蛋白 Protein

IgG Protein Rabbit 重组兔 IgG-Fc 蛋白 (185 Thr/Ala, Asn 284/Ser)

RIOK1重组人 RIOK1 / RIO kinase 1 蛋白 (His & GST 标签) Protein

大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞猪组织因子(TF)ELISA 试剂盒

Peroxisome proliferator activated receptor alpha (PPAR- alpha) ELISA Kit 人过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPAR-α)试剂盒

Rabbitalpha-granularmembraneprotein,GMP-140ELISAKit 兔血浆α颗粒膜蛋白(GMP-140)试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforApo-H(HumanApolipoproteinH)ELISAKit人载脂蛋白H

溴脱氧尿核苷(BrdU)溶液(100毫摩尔)1毫升

Porcinemyelinbasicprotein,MBPELISAKit猪髓0脂碱性蛋白(MBP)试剂盒规格：96T/48T

注意事项
：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系
。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息
，如细胞形态、所用培养基
、血清比例
、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致
，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担
。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min
，弃上清
。加5 mL PBS重悬细胞
，再900 rpm-1000 rpm离心3 min

，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中
，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态
，便于和我司技术部沟通交流
。由于运输的原因
，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系
，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注
：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1
：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿
。不是1个T25瓶传2个10cm皿。