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產品名稱 ：人椎間盤髓核細胞

英文名稱 ：Human Intervertebral Disc Nucleus Pulposu Cells

英文簡稱 ：NPCs

組織來源 ：椎間盤組織

產品規格 ：5×105cells/T25細胞培養瓶

分離椎間盤組織 ；椎間盤是位於脊柱兩椎體之間 ，分為中央部的髓核，富於彈性的膠狀物質 ；周圍部的纖維環 ，由多層纖維軟骨環按同心圓排列 。上下有軟骨板 ，是透明軟骨複蓋於椎體上 ，下麵骺環中間的骨麵 。上下的軟骨板與纖維環一起將髓核密封起來 。纖維環由膠原纖維束的纖維軟骨構成 ，位於髓核的四周 。纖維環的纖維束相互斜行交叉重疊 ，使纖維環成為堅實的組織 ，能承受較大的彎曲和扭轉負荷 。髓核 ，是乳白色半透明膠狀體 ，富於彈性 ，為椎間盤結構的一部分 ，位於兩軟骨板與纖維環之間 。由縱橫交錯的纖維網狀結構即軟骨細胞和蛋白多糖黏液樣基質構成的彈性膠凍物質 。嬰幼兒時期的髓核含水量為80%-90% ，即使到了老年 ，其含水量也在70%上下 。髓核在出生時體積大而鬆散 ，位於椎間盤的中央 ，至成年時位置移至椎間盤的中後部 ；在成年以前構成髓核的主要物質是大量蛋白多糖複合體 、膠原纖維和纖維軟骨 ，隨著年齡的增長 ，髓核中的蛋白多糖解聚增多 ，水分逐漸減少 ，膠原增粗並逐漸被纖維軟骨所替代 。

實驗室分離的人椎間盤髓核采用膠原酶-混合消化法並結合軟骨細胞專用培養基培養篩選製備而來 ，細胞總量約為5×10⁵cells/瓶 。

質量檢測 ：

實驗室分離的人椎間盤髓核經Ⅱ型膠原蛋白免疫熒光鑒定 ，純度可達90%以上 ，且不含有HIV-1 、HBV 、HCV 、支原體 、細菌 、酵母和真菌等 。

培養基含FBS 、生長添加劑 、Penicillin 、Streptomycin等

換液頻率每3-4天換液一次

生長特性貼壁

細胞形態梭形 、多角形

傳代特性可傳5代左右 ；3代以內狀態

消化液0.25%

培養條件氣相 ：空氣 ，95% ；CO2 ，5%

視天氣狀況和運輸距離遠近,公司與客戶協商後選擇下述方式中的一種進行 。

1)1mL凍存細胞懸液裝於1.8ml的凍存管中,置於裝滿幹冰的泡沫保溫盒中進行運輸;收到細胞後請盡快解凍複蘇細胞進行培養,如無法立刻進行複蘇操作,凍存細胞可在-80℃的條件下保存1個月 。

T-25培養瓶充滿培養基後進行常溫運輸;收到細胞後請鏡下觀察細胞生長狀態,如鋪瓶率超過85%請立即進行傳代操作,如懸浮的細胞較多,請將培養瓶至於培養箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細胞能夠再次貼壁 。

① 組織塊培養法

組織塊培養是常用 、簡便易行和成功率較高的原代培養方法 。其基本方法是將剪成的小組織團塊接種於培養瓶(或皿)中 ，瓶壁可預先塗以膠原薄層 ，以利於組織塊粘著於瓶壁 ，使周邊細胞能沿瓶壁向外生長 。

② 消化培養法

③ 懸浮細胞培養法

對於懸浮生長的細胞 ，如白血病細胞 、淋巴細胞、骨髓細胞 、胸水和腹水中的癌細胞和免疫細胞無需消化 ，可采用低速離心分離 ，直接培養 ，或經淋巴細胞分層液分離後接種培養 。

④器官培養

器官培養是指從供體取得器官或組織塊後 ，不進行組織分離而直接在體外的特定環境條件下培養 ，器官培養可保持器官組織的相對完整性 ，可用於重點觀察細胞間的聯係 、排列情況和相互影響 ，以及局部環境的生物調節作用 。

取材→分離→培養和維持

1 、取材

人和動物細胞的取材是原代細胞培養成功的首要條件 ，直接影響細胞的體外培養 。

(1) 取材的基本要求

① 取材要注意新鮮和保鮮

② 應嚴格無菌

③ 防止機械損傷

④ 去除無用組織和避免幹燥

⑤ 應注意組織類型 、分化程度 、年齡等

⑥ 作好記錄

2 、分離

人或動物體內(或胚胎組織)由於多種細胞結合緊密 ，不利於各個細胞在體外培養中生長繁殖 ，必須將現有的組織塊充分散開 ，使細胞解離出來 。

(1)懸浮細胞的分離方法

組織材料若來自血液、羊水 、胸水或腹水的懸液材料 ，的方法是采用1000r/min的低速離心10分鍾 。經離心後由於各種細胞的比重不同可在分層液中形成不同層 ，這樣可根據需要收獲目的細胞 。

(2)實體組織材料的分離方法

對於實體組織材料 ，由於細胞間結合緊密 ，為了使組織中的細胞充分分散 ，形成細胞懸液 ，可采用機械分散法(物理裂解)和消化分離法 。

① 機械分散法

特點:簡便 、快速,但對組織機械損傷大 ，而且細胞分散效果差,適用於處理纖維成分少的軟組織。

② 消化分離法

組織消化法是把組織剪切成較小團塊(或糊狀)，應用酶的生化作用和非酶的化學作用進一步使細胞間的橋連結構鬆動 ，使團塊膨鬆 ，由塊狀變成絮狀 ，此時再采用機械法 ，用吸管吹打分散或電磁攪拌或在搖珠瓶中振蕩 ，使細胞團塊得以較充分的分散 ，製成少量細胞群團和大量單個細胞的細胞懸液 ，接種培養後 ，細胞容易貼壁生長 。