老哥俱乐部

产品仅供研究使用，不适用于人类或临床诊断
商品属性：

产品英文名称：Human TGF-β1 protein

产品中文名称：重组人转化生长因子-β1（TGF-β1）

规格：5 μg/100 μg/500 μg

货号：EY-01X8632
用途：仅供科研研究实验

特点&优势:

分子:TGF-β1

标签:无标签

种属:人

序列:氨基酸序列来源于： active form of人源/rhesus/canine TGFβ1 (NP_000651.3)。(Ala 279-Ser 390)表达的蛋白片段

。人源, 恒河猴和犬序列:相同。

活性:检测其抑制貂肺上皮细胞（Mv-1-lu）增殖的能力
，ED50 为 0.04-0.2 ng/ml。

蛋白长度：重组人/猕猴/犬类的TGF-β1由112个氨基酸组成
，理论分子量为12.8 KDa。在还原性和非还原性SDS-PAGE中显示的条带分别为13和动겸动

背景

转化生长因子(TGF)是指两类多肽类生长因子,转化生长因子-α和转化生长因子-β。转化生长因子-α是由巨噬细胞,脑细胞和表皮细胞产生,可诱导上皮发育
。人类转化生长因子－β有三个亚型,TGF-β1,TGF-β2,TGF-β3。转化生长因子-β (Transforming growth factor beta, TGF-β)是一多功能蛋白质
，可以影响多种细胞的生长，分化、细胞凋亡及免疫调节等功能。转化生长因子-β属于转化生长因子-β超家族蛋白
。转化生长因子-β可以结合到细胞表面的转化生长因子-β受体结合而激活其受体。转化生长因子-β受体是激酶受体
。其信号传递可以通过SMAD信号通路和/或DAXX信号通路。

本产品具有下列特点:

 1.操作简便
、快捷
。可直接加入到检测平板
。在96-孔板中检测时,无需洗涤或收获细胞,免去溶解步骤。

2. 无放射性。不需要配制液闪混合物,也不需要处理废弃物
。

3. 与MTT相比,使用更安全。不需要使用挥发性的有机溶剂来溶解甲臜产物。

4. 操作灵活,与MTT不同,平板读数后可放回温箱继续孵育,使颜色进一步生成。

操作步骤：

(一)获得目的基因

1、通过PCR方法:以含目的基因的克隆质粒为模板,按基因序列设计一对引物(在上游和下游引物分别引入不同的酶切位点),PCR循环获得所需基因片段。

2、通过RT-PCR方法:用TRIzol法从细胞或组织中提取总RNA,以mRNA为模板,逆转录形成cDNA第一链,以逆转录产物为模板进行PCR循环获得产物
。

(二)构建重组表达载体

1、载体酶切:将表达质粒用限制性内切酶(同引物的酶切位点)进行双酶切,酶切产物行琼脂糖电泳后,用胶回收Kit或冻融法回收载体大片段。

2、PCR产物双酶切后回收,在T4DNA连接酶作用下连接入载体。

(三)  获得含重组表达质粒的表达菌种

1、 将连接产物转化大肠杆菌DH5α,根据重组载体的标志(抗Amp或蓝白斑)作筛选,挑取单斑,碱裂解法小量抽提质粒,双酶切初步鉴定。

2
、 测序验证目的基因的插入方向及阅读框架均正确,进入下步操作。否则应筛选更多克隆,重复亚克隆或亚克隆至不同酶切位点。

3、 以此重组质粒DNA转化表达宿主菌的感受态细胞
。

(四)诱导表达

1、挑取含重组质粒的菌体单斑至2ml LB(含Amp50μg/ml)中37℃过夜培养
。

2、按1∶50比例稀释过夜菌,一般将1ml菌加入到含50mlLB培养基的300ml培养瓶中, 37℃震荡培养至OD600≌0.4-1.0(*0.6,大约需3hr)。

3
、取部分液体作为未诱导的对照组,余下的加入IPTG诱导剂至终浓度0.4mM作为实验组,两组继续37℃震荡培养3hr。

4
、分别取菌体1ml, 离心12000g×30s收获沉淀,用100μl 1%SDS重悬,混匀, 70℃10min。

5、离心12000g×1min,取上清作为样品,可做SDS-PAGE等分析。

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