使用方法:
一 、樣品 DNA 的製備
用自選方法提取 Cps DNA 。注意 ：DNA 純化方法是決定檢測靈敏度的關鍵因素 。如果不能很好純化樣品 DNA ，後麵的 PCR 再靈敏也不能提高整體檢測靈敏度 。
二 、製備 Cps 標準曲線（以 10-10E6 這 6 個 10 倍稀釋度為例 。由於標準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進行 ，千萬不能汙染樣品或本試劑盒的其他成分） 。為增加產品穩定性和避免擴散傳染性病原 ，本產品不提供活體病毒做陽性對照 ，隻提供沒有傳染性的 、可以直接使用的 DN**段作為陽性對照 。
1. 標記 6 個離心管 ，分別為 6 ，5 ，4 ，3 ，2 和 1 號 。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 超純水（用帶芯槍頭 ，下同） 。
3. 先將本試劑盒提供的陽性對照用 TE 緩衝液或超純水 10 倍梯度稀釋到10E7 拷貝/μL（注 ：請不要將本試劑盒提供的標準品一次性稀釋至 10E7拷貝/μL ，建議每次稀釋 10 倍 ，梯度稀釋至 10E7 拷貝/μL） 。
4. 在 6 號管中加入 5 μL 10E7 拷貝/μL 的 Cps 陽性對照(上步稀釋所得) ，充分震蕩 1 分鍾 ，得 10E6 拷貝/μL 的陽性對照 。
5. 換槍頭 ，從 6 號管中取 5 μL 溶液到 5 號管中 ，充分震蕩 1 分鍾 ，得 10E5拷貝/μL 的陽性對照 。
6. 換槍頭 ，從 5 號管中取 5 μL 溶液到 4 號管中 ，重複上麵的操作直到得到 6個稀釋度的陽性對照 。
7. NC 管中不加任何陽性對照 。
8. 從 1-6 號管中分別取 5 μL 和待測樣品一起進行定量 PCR（見下步） ，每個樣品做 3 次重複 。PCR 後得到每個陽性對照稀釋樣品的熒光 PCR Ct 值 ，並以之為縱軸 ，以濃度的對數值為橫軸 ，繪製標準曲線 。

參數規格 ：

儲存條件 ：
僅用於科研14℃或－20℃樣品收集 、處理及保存方法
1. 血清 ：使用不含熱原和內毒素的試管 ，操作過程中避免任何細胞刺激 ，收集血液後 ，3000 轉離心10 分鍾將血清和紅細胞迅速小心地分離 。
2. 血漿 ：EDTA 、檸檬酸鹽或肝素抗凝 。3000 轉離心30 分鍾取上清 。
3. 細胞上清液 ：3000 轉離心10 分鍾去除顆粒和聚合物 。
4. 組織勻漿 ：將組織加入適量生理鹽水搗碎 。3000 轉離心10 分鍾取上清 。
5. 保存 ：如果樣本收集後不及時檢測 ，請按一次用量分裝 ，凍存於-20℃ ，避免反複凍融 ，在室溫下解凍並確保樣品均勻地充分解凍 。
​
檢測步驟 ：
一 、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX) 、酶混合物(Enzymes MIX) ，冰上融化並振蕩混勻後 ，10000rpm離心10s 。
設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽性對照) ，每個測試反應體係配製如下表 ：
試劑 每個反應加入的量 N個反應加入的量
熒光PCR反應液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
（1） 計算好各試劑的使用量 ，加入一適當體積潔淨離心管中 ，充分混勻 ，10000rpm離心10s ，向設定的N個PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液 ，向每管中加入處理後樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL ，10000rpm瞬時離心10秒 。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內 。
循環條件:
1循環 50℃ for 2 min
預變性 1循環 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號 。報告基團 ：設置為FAM 。淬滅基團 ：NONE ，請勿選擇ROX參比熒光 。

對羥甲鈉Sodium hydroxy benzoic acid ：160.1 C7H5NaO3 ：114-63-6

3,5-二甲-4-吡唑 ：222.033,5- two methyl -4- ：2033-45-6 C5H7IN2

過氧鉀 ：71.1Potassium peroxide ：12030-88-5 KO2

乙酰丙酮鈷(II)二水合物 ：257.15Cobalt (II) two hydrate：123334-29-2 C10H14CoO4·2H2O

1-(*乙酰)咪唑 ：1（*乙酰）咪唑 ：65744

氯亞鉑酸鉀 ：415.09Potassium chloride, potassium chloride：10025-99-7 Cl4K2Pt

潘紅花紅Pan Honghuahong ： ：

2-乙酰-3-溴-5-甲吡 ：229.072- acetyl -3- -5- ：142404-83-9 C8H9BrN2O

6-硝吲唑 ：163.136- nitroindazole ：7597-18-4 C7H5N3O2

桔青黴LAMP試劑盒小鼠 BBS4 基因全長ORF克隆

人 ANGPTL2 基因全長ORF克隆

大鼠 NCAPH2 基因全長ORF克隆

大鼠 CTH 基因全長ORF克隆

人 GK5 基因全長ORF克隆

食蟹猴 TNFSF13 基因全長ORF克隆

人 GFRA2 基因全長ORF克隆

人 PROK1 / EG-VEGF 基因全長ORF克隆

重組人 CCL3 / Mip1a 蛋白 (His 標簽)

重組人 Ephrin-A1 / EFNA1 蛋白 (His 標簽)

人 S1PR2 基因全長ORF克隆

人 NR0B1 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽