產品名稱 :莢膜組織胞漿菌LAMP試劑盒
產品特點 :莢膜組織胞漿菌LAMP試劑盒上海老哥俱樂部生物相關產品中含有聚合酶鏈式反應所需要各種試劑組分 ,如 :引物 、dNTPs 、緩衝液 、Taq酶等 ,PCR反應液混合液中加入檢測樣品 ,即可進行PCR擴增反應 。PCR擴增產物經瓊脂糖電泳染色判斷 ,陽性樣本將在相應大小的片段處出現特異性條帶 。
產品型號 :50次
更新日期 :2021-02-20
訪問次數 :345
50次莢膜組織胞漿菌LAMP試劑盒的詳細資料 :
使用方法:
一
、樣品 DNA 的製備
用自選方法提取 Cps DNA
。注意
:DNA 純化方法是決定檢測靈敏度的關鍵因素
。如果不能很好純化樣品 DNA
,後麵的 PCR 再靈敏也不能提高整體檢測靈敏度
。
二
、製備 Cps 標準曲線(以 10-10E6 這 6 個 10 倍稀釋度為例
。由於標準品濃度非常高
,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進行
,千萬不能汙染樣品或本試劑盒的其他成分)
。為增加產品穩定性和避免擴散傳染性病原
,本產品不提供活體病毒做陽性對照
,隻提供沒有傳染性的
、可以直接使用的 DN**段作為陽性對照
。
1. 標記 6 個離心管
,分別為 6
,5
,4
,3
,2 和 1 號
。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 超純水(用帶芯槍頭
,下同)
。
3. 先將本試劑盒提供的陽性對照用 TE 緩衝液或超純水 10 倍梯度稀釋到10E7 拷貝/μL(注
:請不要將本試劑盒提供的標準品一次性稀釋至 10E7拷貝/μL
,建議每次稀釋 10 倍
,梯度稀釋至 10E7 拷貝/μL)
。
4. 在 6 號管中加入 5 μL 10E7 拷貝/μL 的 Cps 陽性對照(上步稀釋所得)
,充分震蕩 1 分鍾
,得 10E6 拷貝/μL 的陽性對照
。
5. 換槍頭
,從 6 號管中取 5 μL 溶液到 5 號管中
,充分震蕩 1 分鍾
,得 10E5拷貝/μL 的陽性對照
。
6. 換槍頭
,從 5 號管中取 5 μL 溶液到 4 號管中
,重複上麵的操作直到得到 6個稀釋度的陽性對照
。
7. NC 管中不加任何陽性對照
。
8. 從 1-6 號管中分別取 5 μL 和待測樣品一起進行定量 PCR(見下步)
,每個樣品做 3 次重複
。PCR 後得到每個陽性對照稀釋樣品的熒光 PCR Ct 值
,並以之為縱軸
,以濃度的對數值為橫軸
,繪製標準曲線
。
參數規格 :
產品名稱 | 莢膜組織胞漿菌LAMP試劑盒 |
英文名稱 | Lamp kit for Hislasma capsulatum |
規格 | 50次 |
儲存條件
:
僅用於科研14℃或-20℃樣品收集
、處理及保存方法
1. 血清
:使用不含熱原和內毒素的試管
,操作過程中避免任何細胞刺激
,收集血液後
,3000 轉離心10 分鍾將血清和紅細胞迅速小心地分離
。
2. 血漿
:EDTA
、檸檬酸鹽或肝素抗凝
。3000 轉離心30 分鍾取上清
。
3. 細胞上清液
:3000 轉離心10 分鍾去除顆粒和聚合物
。
4. 組織勻漿
:將組織加入適量生理鹽水搗碎
。3000 轉離心10 分鍾取上清
。
5. 保存
:如果樣本收集後不及時檢測
,請按一次用量分裝
,凍存於-20℃
,避免反複凍融
,在室溫下解凍並確保樣品均勻地充分解凍
。
檢測步驟
:
一
、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)
、酶混合物(Enzymes MIX)
,冰上融化並振蕩混勻後
,10000rpm離心10s
。
設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽性對照)
,每個測試反應體係配製如下表
:
試劑 每個反應加入的量 N個反應加入的量
熒光PCR反應液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
(1) 計算好各試劑的使用量
,加入一適當體積潔淨離心管中
,充分混勻
,10000rpm離心10s
,向設定的N個PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液
,向每管中加入處理後樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL
,10000rpm瞬時離心10秒
。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內
。
循環條件:
1循環 50℃ for 2 min
預變性 1循環 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號
。報告基團
:設置為FAM
。淬滅基團
:NONE
,請勿選擇ROX參比熒光
。
2,6-二羥萘分子式 :160.17英文名稱 :2,6- two hydroxy naphthalene :581-43-1分子量 : C10H8O2
1-氯丙英文名稱 :1- Cl分子式 :分子量 : :
甲酰分子式 :60.06英文名稱 :Methyl hydrazine :624-84-0分子量 : CH4N2O
溴1,3-二芴咪唑分子式 :477.39英文名稱 :1,3- two fluorenyl imidazole bromide :分子量 : C29H21N2Br
氯1,3-二(9-甲蒽)咪唑(熒光型離子液體)分子式 :485.02英文名稱 :Chlorinated 1,3- two (9- methyl group) with an (fluorescent type of ionic liquid) :分子量 : C33H25N2Cl
5-喹啉分子式 :144.17英文名稱 :5- amino group :611-34-7分子量 : C9H8N2
2-乙酰-2-噻唑啉分子式 :129.18英文名稱 :2- acetyl -2- thiazole :29926-41-8分子量 : C5H7NOS
1,2,4,5-四溴分子式 :393.7英文名稱 :Four - 1,2,4,5- :636-28-2分子量 : C6H2Br4
4-甲-5-(2-乙酰氧乙)噻唑分子式 :185.24英文名稱 :4- methyl -5- (2- acetyl ethyl) thiazole :656-53-1分子量 : C8H11NO2S
莢膜組織胞漿菌LAMP試劑盒小鼠 PEBP1 基因全長ORF克隆
重組小鼠 CCL3 / Mip1a 蛋白
大鼠 ATP5C1 基因全長ORF克隆
小鼠 RSPO1 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽
人 VSIG4 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶FLAG標簽
人 PRND 基因全長ORF克隆
人 SRSF1 基因全長ORF克隆
人 PTH1R / PTHR1 / PTH1 Receptor 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
人 VEGFR3 / FLT4 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
人 FCRL3 基因全長ORF克隆
重組小鼠 CD40L / CD154 / TNFSF5 蛋白 (Fc 標簽)
大鼠 CD40 / TNFRSF5 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
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