產品名稱 :奧斯特線蟲通用LAMP試劑盒
產品特點 :奧斯特線蟲通用LAMP試劑盒上海老哥俱樂部生物相關產品 :重組小鼠 IFNA13 / Interferon alpha-13 蛋白人 SDC1 基因全長ORF克隆人 beta-Catenin / CTNNB1 杆狀病毒-昆蟲細胞裂解液 小鼠 SHP2 / PTPN11 人細胞裂解液
產品型號 :50次
更新日期 :2021-02-26
訪問次數 :374
50次奧斯特線蟲通用LAMP試劑盒的詳細資料 :
參數規格 :
產品名稱 | 奧斯特線蟲通用LAMP試劑盒 |
英文名稱 | Lamp kit for nematodes |
規格 | 50次 |
儲存條件
:
僅用於科研14℃或-20℃樣品收集
、處理及保存方法
1. 血清
:使用不含熱原和內毒素的試管
,操作過程中避免任何細胞刺激
,收集血液後
,3000 轉離心10 分鍾將血清和紅細胞迅速小心地分離
。
2. 血漿
:EDTA
、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉離心30 分鍾取上清
。
3. 細胞上清液
:3000 轉離心10 分鍾去除顆粒和聚合物
。
4. 組織勻漿
:將組織加入適量生理鹽水搗碎
。3000 轉離心10 分鍾取上清
。
5. 保存:如果樣本收集後不及時檢測
,請按一次用量分裝
,凍存於-20℃,避免反複凍融
,在室溫下解凍並確保樣品均勻地充分解凍
。
使用方法:
一
、樣品 DNA 的製備
用自選方法提取 Cps DNA
。注意
:DNA 純化方法是決定檢測靈敏度的關鍵因素
。如果不能很好純化樣品 DNA
,後麵的 PCR 再靈敏也不能提高整體檢測靈敏度
。
二
、製備 Cps 標準曲線(以 10-10E6 這 6 個 10 倍稀釋度為例
。由於標準品濃度非常高
,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進行
,千萬不能汙染樣品或本試劑盒的其他成分)
。為增加產品穩定性和避免擴散傳染性病原
,本產品不提供活體病毒做陽性對照
,隻提供沒有傳染性的
、可以直接使用的 DN**段作為陽性對照
。
1. 標記 6 個離心管
,分別為 6
,5
,4
,3
,2 和 1 號
。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 超純水(用帶芯槍頭
,下同)
。
3. 先將本試劑盒提供的陽性對照用 TE 緩衝液或超純水 10 倍梯度稀釋到10E7 拷貝/μL(注
:請不要將本試劑盒提供的標準品一次性稀釋至 10E7拷貝/μL
,建議每次稀釋 10 倍
,梯度稀釋至 10E7 拷貝/μL)
。
4. 在 6 號管中加入 5 μL 10E7 拷貝/μL 的 Cps 陽性對照(上步稀釋所得)
,充分震蕩 1 分鍾
,得 10E6 拷貝/μL 的陽性對照
。
5. 換槍頭
,從 6 號管中取 5 μL 溶液到 5 號管中
,充分震蕩 1 分鍾
,得 10E5拷貝/μL 的陽性對照
。
6. 換槍頭
,從 5 號管中取 5 μL 溶液到 4 號管中
,重複上麵的操作直到得到 6個稀釋度的陽性對照
。
7. NC 管中不加任何陽性對照
。
8. 從 1-6 號管中分別取 5 μL 和待測樣品一起進行定量 PCR(見下步)
,每個樣品做 3 次重複
。PCR 後得到每個陽性對照稀釋樣品的熒光 PCR Ct 值
,並以之為縱軸
,以濃度的對數值為橫軸
,繪製標準曲線
。
檢測步驟
:
一
、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)
、酶混合物(Enzymes MIX)
,冰上融化並振蕩混勻後
,10000rpm離心10s
。
設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽性對照)
,每個測試反應體係配製如下表
:
試劑 每個反應加入的量 N個反應加入的量
熒光PCR反應液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
(1) 計算好各試劑的使用量
,加入一適當體積潔淨離心管中
,充分混勻
,10000rpm離心10s
,向設定的N個PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液
,向每管中加入處理後樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL
,10000rpm瞬時離心10秒
。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內
。
循環條件:
1循環 50℃ for 2 min
預變性 1循環 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團
:設置為FAM
。淬滅基團
:NONE
,請勿選擇ROX參比熒光
。
草酰二 :118.09Two hydrazine :996-98-5 C2H6N4O2 ;NH2NHCOCONHNH2
3,3'-聯哢唑 :332.43,3'- bicarbazolyl :1984-49-2 C24H16N2
4-羥甲-4'-甲-2,2'-聯吡 :200.244-, -4'-, -2,2'-:81998-04-1 C12H12N2O
3-溴-5-甲-4-吡 :200.033- -5- methyl -4- pyridine formaldehyde :203569-15-7 C7H6BrNO
4-溴-4'-丙聯 :275.184- -4'- group :58743-81-0 C15H15Br
5--1-甲四唑 :5- 1 -甲四唑 :5422-44-6
川芎嗪Ligustrazine :136.19C8H12N2 :1124-11-4
5-溴噻唑 :164.025- thiazole bromide :3034-55-7 C3H2BrNS
醉椒素Drunk pepper :230.25916C14H14O3 :3155-48-4
奧斯特線蟲通用LAMP試劑盒大鼠 ICAM-1 / CD54 ELISA配對抗體
人 EXTL3 基因全長ORF克隆
甲型流感 H5N1 (A/common magpie/Hong Kong/5052/2007) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
人 CD70 / CD27L / TNFSF7 基因全長ORF克隆
人 FOXA1 基因全長ORF克隆
小鼠 MAP3K3 / MEKK3 基因全長ORF克隆
人 ORM2 基因全長ORF克隆
食蟹猴 CXCL9 基因全長ORF克隆
重組小鼠 IFNA13 / Interferon alpha-13 蛋白 (His 標簽)
人 SDC1 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽
人 beta-Catenin / CTNNB1 杆狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
小鼠 SHP2 / PTPN11 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
如果你對50次奧斯特線蟲通用LAMP試劑盒感興趣 ,想了解更詳細的產品信息 ,填寫下表直接與廠家聯係 : |