本公司代理ATCC細胞 ，提供Cas9穩定表達的人乳腺癌細胞 ；231-Cas9-546保存售前售後一條龍服務 ，若要獲取詳細的說明書或價格信息 ，點擊了解更多腫瘤細胞 。

細胞名稱  Cas9穩定表達的人乳腺癌細胞 ；231-Cas9-546保存
形態特性 上皮樣

生長特性 貼壁生長

特征特性 該細胞是采用慢病毒感染的方式使MDA-MB-231細胞穩定表達Cas9-Flag-Neo ，經400ug/mlG418篩選得到的單克隆 ，經Western Blotting驗證該克隆可以表達Cas9蛋白 ，可直接用Crispr技術編輯基因組DNA 。

培養條件 RPMI 1640 (w/o Hepes) 10%FBS ；400ug/ml G418

傳代方法 1:2~1:4傳代 ；每周2~3次 。

傳代情況 C3

凍存條件 基礎培養基+5%DMSO+20%FBS

細胞培養步驟 ：
一．Cas9穩定表達的人乳腺癌細胞 ；231-Cas9-546保存培養基及培養凍存條件準備 ：
1）準備MEM培養基(MEM:GIBCO,貨號11095-080) ，85% ；北美胎牛血清(United States ，GIBCO ，貨號16000-044) ，15% 。
2）培養條件 ： 氣相 ：空氣 ，95% ；二氧化碳 ，5% 。 溫度 ：37攝氏度 ，培養箱濕度為70%-80% 。
3）凍存液 ：90%*培養基 ，10%DMSO ，現用現配 。液氮儲存 。
二．細胞處理 ：
1）複蘇細胞 ：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍 ，加入4mL培養基混合均勻 。在1000RPM條件下離心4分鍾 ，棄去上清液 ，補加1-2mL培養基後吹勻 。然後將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜（或將細胞懸液加入10cm皿中 ，加入約8ml培養基 ，培養過夜） 。第二天換液並檢查細胞密度 。
2）細胞傳代 ：如果細胞密度達80%-90% ，即可進行傳代培養 。
對於貼壁細胞 ，傳代可參考以下方法 ：
1.棄去培養上清 ，用不含鈣 、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次 。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於培養瓶中 ，置於37℃培養箱中消化1-2分鍾 ，然後在顯微鏡下觀察細胞消化情況 ，若細胞大部分變圓並脫落 ，迅速拿回操作台 ，輕敲幾下培養瓶後加少量培養基終止消化 。
3.按6-8ml/瓶補加培養基 ，輕輕打勻後吸出 ，在1000RPM條件下離心4分鍾，棄去上清液 ，補加1-2mL培養液後吹勻 。
4.將細胞懸液按1 ：2到1 ：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中 。
3）細胞凍存 ：待細胞生長狀態良好時 ，可進行細胞凍存 。貼壁細胞凍存時 ，棄去培養基後加入少量 ，細胞變圓脫落後 ，加入約1ml含血清的培養基後加入凍存管中 ，再添加10%DMSO後進行凍存 。
注意事項 ：
1.收到Cas9穩定表達的人乳腺癌細胞 ；231-Cas9-546保存後 ，若發現幹冰已揮發幹淨 、凍存管瓶蓋脫落 、破損及細胞有汙染，請立即與老哥俱樂部聯絡 。
2.收到細胞先不開瓶蓋 ，瓶身擦拭酒精後放在培養箱靜置2-4小時（視細胞密度而定）穩定細胞狀態 。接著在倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況 ，並對細胞進行不同倍數拍照（建議收細胞時就整體外觀拍一張照片 ，觀察培養基的顏色和是否有漏液情況 ，隨後在顯微鏡下拍下細胞狀態 ，100* ，200*各一張） ，觀察記錄細胞在運輸過程中是否有汙染情況 。作為我方進行銷售依據。
3.由於細胞狀態受環境 、操作和運輸等多方麵因素影響 ，故本公司隻保證客戶收到細胞後一周內的細胞狀態 ，故客戶需要售後時需出示收到細胞的時間證明及客戶提供收貨時間和發現問題後客服人員溝通的時間證明 ，期間間隔時間不能大於7天 。
4.所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性 ，必須在二級生物安全台內操作，並請注意防護 ，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌後方能丟棄 。
​
100克Phenylalanine Deaminase Medium苯瓊脂培養基

250克Pseudomonas Agar P假單胞P瓊脂

250克Pseudomonas Agar F假單胞F瓊脂

10克Dulcitol Semisolid Agar衛矛醇半固體瓊脂

250克NO.4 Agar Base號瓊脂

250克Wagstsuma Agar Base我妻氏血瓊脂培養基基礎

250克L Nac1 Peptone Water60%/L氯化鈉蛋白腖肉湯

250克42℃ Growth Medium42℃生長培養基

TG  兔抗甲狀腺球蛋白   規格 0.1ml*

TFR2/Transferrin Receptor 2  轉鐵蛋白受體2抗體   規格 0.2ml*

TFPI-2  組織因子途徑抑製劑-2抗體   規格 0.1ml*

TFPI/LACI  組織因子途徑抑製劑抗體   規格 0.1ml*

TFF3  三葉肽因子3抗體   規格 0.1ml*

TFF2  三葉肽因子2抗體   規格 0.1ml*

TFF1/BCEI  癌雌激素誘導蛋白抗體   規格 0.1ml*

TFEB  T淋巴細胞轉錄調節因子TFEB抗體   規格 0.1ml*

TFE3  轉錄因子E3   規格 0.1ml*

TFDP3  轉錄因子DP3抗體（肝癌相關抗原661）   規格 0.2ml*

TFDP2/DP2  轉錄因子E2F二聚體蛋白2抗體   規格 0.2ml*

TFCP2C  轉錄因子CP2抗體   規格 0.2ml*
Cas9穩定表達的人乳腺癌細胞 ；231-Cas9-546保存Mouse Anti-rat IgG/Alexa Fluor 350  Alexa Fluor 350標記的小鼠抗大鼠IgG   規格 0.1ml*

Mouse anti-rat IgG ascites  小鼠抗大鼠IgG腹水   規格 1ml*

Mouse Anti-rat IgG  小鼠抗大鼠IgG   規格 1mg*

Mouse Anti-Rabbit IgM/RBITC  羅丹明標記的小鼠抗兔IgM   規格 0.1ml*

Mouse Anti-Rabbit IgM/PE-Cy7  PE-Cy7標記的小鼠抗兔IgM   規格 0.1ml*

Mouse Anti-Rabbit IgM/PE-Cy5.5  PE-Cy5.5標記的小鼠抗兔IgM   規格 0.1ml*

Mouse Anti-Rabbit IgM/PE-CY5  PE-CY5標記的小鼠抗兔IgM   規格 0.1ml*

Mouse Anti-Rabbit IgM/PE-Cy3  PE-Cy3標記的小鼠抗兔IgM   規格 0.1ml*

Mouse Anti-Rabbit IgM/PE  PE標記的小鼠抗兔IgM   規格 0.1ml*

Mouse Anti-Rabbit IgM/HRP  辣根過氧化物酶標記的小鼠抗兔IgM   規格 0.1ml*

Mouse Anti-Rabbit IgM/Gold  膠體金標記的小鼠抗兔IgM   規格 2ml*

Mouse Anti-Rabbit IgM/FITC  FITC標記的小鼠抗兔IgM   規格 0.1ml*

Cas9穩定表達的人乳腺癌細胞 ；231-Cas9-546保存在運輸的過程中 ，細胞培養瓶中的貼壁細胞有可能從瓶壁中脫落下來 ，因此客戶在收到貨以後的*時間是要先觀察產品的狀況 ，顯微鏡下觀察會出現細胞懸浮的情況 ，出現此狀態時 ，請不要立即打開培養瓶 ，應立即將培養瓶置於細胞培養箱過夜 ，並於次日在顯微鏡下觀察 ，此時多數細胞會重新貼附於瓶壁 。如果發現細胞仍不能貼壁 ，請試著用台盼藍染色法鑒定細胞活力 ，如台盼藍染色證實細胞活力正常請按懸浮細胞的方法處理 ；如若證實細胞無活力 ，請在收到貨後48小時內將細胞狀態反饋給我公司 ，老哥俱樂部將盡快幫助解決 。