老哥俱乐部

本公司代理ATCC细胞
，提供Cas9稳定表达的人乳腺癌细胞；231-Cas9-546保存售前售后一条龙服务
，若要获取详细的说明书或价格信息，点击了解更多肿瘤细胞
。

细胞名称  Cas9稳定表达的人乳腺癌细胞；231-Cas9-546保存
形态特性 上皮样

生长特性 贴壁生长

特征特性 该细胞是采用慢病毒感染的方式使MDA-MB-231细胞稳定表达Cas9-Flag-Neo
，经400ug/mlG418筛选得到的单克隆，经Western Blotting验证该克隆可以表达Cas9蛋白，可直接用Crispr技术编辑基因组DNA
。

培养条件 RPMI 1640 (w/o Hepes) 10%FBS

；400ug/ml G418

传代方法 1:2~1:4传代；每周2~3次。

传代情况 C3

冻存条件 基础培养基+5%DMSO+20%FBS

细胞培养步骤：
一．Cas9稳定表达的人乳腺癌细胞；231-Cas9-546保存培养基及培养冻存条件准备：
1）准备MEM培养基(MEM:GIBCO,货号11095-080)，85%；北美胎牛血清(United States
，GIBCO，货号16000-044)
，15%。
2）培养条件： 气相：空气，95%
；二氧化碳，5%
。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%*培养基，10%DMSO

，现用现配。液氮储存
。
二．细胞处理
：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀

。在1000RPM条件下离心4分钟
，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀
。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基

，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代

：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1.弃去培养上清
，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况
，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台
，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化
。
3.按6-8ml/瓶补加培养基

，轻轻打匀后吸出

，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4.将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
3）细胞冻存
：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存

。贴壁细胞冻存时
，弃去培养基后加入少量
，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存
。
注意事项：
1.收到Cas9稳定表达的人乳腺癌细胞；231-Cas9-546保存后，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与老哥俱乐部联络。
2.收到细胞先不开瓶盖，瓶身擦拭酒精后放在培养箱静置2-4小时（视细胞密度而定）稳定细胞状态。接着在倒置显微镜下观察细胞生长情况
，并对细胞进行不同倍数拍照（建议收细胞时就整体外观拍一张照片
，观察培养基的颜色和是否有漏液情况
，随后在显微镜下拍下细胞状态，100*
，200*各一张）
，观察记录细胞在运输过程中是否有污染情况
。作为我方进行销售依据。
3.由于细胞状态受环境、操作和运输等多方面因素影响
，故本公司只保证客户收到细胞后一周内的细胞状态，故客户需要售后时需出示收到细胞的时间证明及客户提供收货时间和发现问题后客服人员沟通的时间证明
，期间间隔时间不能大于7天
。
4.所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃

。
​
100克Phenylalanine Deaminase Medium苯琼脂培养基

250克Pseudomonas Agar P假单胞P琼脂

250克Pseudomonas Agar F假单胞F琼脂

10克Dulcitol Semisolid Agar卫矛醇半固体琼脂

250克NO.4 Agar Base号琼脂

250克Wagstsuma Agar Base我妻氏血琼脂培养基基础

250克L Nac1 Peptone Water60%/L氯化钠蛋白胨肉汤

250克42℃ Growth Medium42℃生长培养基

TG  兔抗甲状腺球蛋白   规格 0.1ml*

TFR2/Transferrin Receptor 2  转铁蛋白受体2抗体   规格 0.2ml*

TFPI-2  组织因子途径抑制剂-2抗体   规格 0.1ml*

TFPI/LACI  组织因子途径抑制剂抗体   规格 0.1ml*

TFF3  三叶肽因子3抗体   规格 0.1ml*

TFF2  三叶肽因子2抗体   规格 0.1ml*

TFF1/BCEI  癌雌激素诱导蛋白抗体   规格 0.1ml*

TFEB  T淋巴细胞转录调节因子TFEB抗体   规格 0.1ml*

TFE3  转录因子E3   规格 0.1ml*

TFDP3  转录因子DP3抗体（肝癌相关抗原661）   规格 0.2ml*

TFDP2/DP2  转录因子E2F二聚体蛋白2抗体   规格 0.2ml*

TFCP2C  转录因子CP2抗体   规格 0.2ml*
Cas9稳定表达的人乳腺癌细胞；231-Cas9-546保存Mouse Anti-rat IgG/Alexa Fluor 350  Alexa Fluor 350标记的小鼠抗大鼠IgG   规格 0.1ml*

Mouse anti-rat IgG ascites  小鼠抗大鼠IgG腹水   规格 1ml*

Mouse Anti-rat IgG  小鼠抗大鼠IgG   规格 1mg*

Mouse Anti-Rabbit IgM/RBITC  罗丹明标记的小鼠抗兔IgM   规格 0.1ml*

Mouse Anti-Rabbit IgM/PE-Cy7  PE-Cy7标记的小鼠抗兔IgM   规格 0.1ml*

Mouse Anti-Rabbit IgM/PE-Cy5.5  PE-Cy5.5标记的小鼠抗兔IgM   规格 0.1ml*

Mouse Anti-Rabbit IgM/PE-CY5  PE-CY5标记的小鼠抗兔IgM   规格 0.1ml*

Mouse Anti-Rabbit IgM/PE-Cy3  PE-Cy3标记的小鼠抗兔IgM   规格 0.1ml*

Mouse Anti-Rabbit IgM/PE  PE标记的小鼠抗兔IgM   规格 0.1ml*

Mouse Anti-Rabbit IgM/HRP  辣根过氧化物酶标记的小鼠抗兔IgM   规格 0.1ml*

Mouse Anti-Rabbit IgM/Gold  胶体金标记的小鼠抗兔IgM   规格 2ml*

Mouse Anti-Rabbit IgM/FITC  FITC标记的小鼠抗兔IgM   规格 0.1ml*

Cas9稳定表达的人乳腺癌细胞；231-Cas9-546保存在运输的过程中，细胞培养瓶中的贴壁细胞有可能从瓶壁中脱落下来，因此客户在收到货以后的*时间是要先观察产品的状况，显微镜下观察会出现细胞悬浮的情况

，出现此状态时

，请不要立即打开培养瓶，应立即将培养瓶置于细胞培养箱过夜
，并于次日在显微镜下观察，此时多数细胞会重新贴附于瓶壁
。如果发现细胞仍不能贴壁，请试着用台盼蓝染色法鉴定细胞活力，如台盼蓝染色证实细胞活力正常请按悬浮细胞的方法处理
；如若证实细胞无活力，请在收到货后48小时内将细胞状态反馈给我公司，老哥俱乐部将尽快帮助解决

。