老哥俱乐部

细胞简介
：

神经元，又称神经细胞，是构成神经系统结构和功能的基本单位。

神经元是具有长突触（轴突）的细胞，它由细胞体和细胞突起构成。在长的轴突上套有一层鞘，组成神经纤维，它的末端的细小分支叫做神经末梢
。细胞体位于脑、脊髓和神经节中，细胞突起可延伸至全身各器官和组织中
。

细胞特性：

1）组织来源于实验动物小鼠的正常脑组织。

2)细胞鉴定：NSE荧光染色为阳性
。

3)经鉴定细胞纯度高于90%。

4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原体、、酵母和。

5)细胞生长方式：不规则细胞，贴壁培养。

推荐培养基
：

老哥俱乐部推荐使用 delf 原代 神经元 细胞培养体系 作为体外培养的培养基。

实验报告：

一、分离与培养

：

1
、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2
、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶）
，混悬10s
，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清

，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3
、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液
，混悬10s
，置37℃消化10 min后
，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置
，重复此步骤2-3次
，直至组织被消化
；

4
、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬

，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2
、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下
，用0.1％Triton X-100透膜15min
；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下
，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗
，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜
；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h
；

6、用PBS冲洗3次，每次10min

，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好

，培养液是否有漏液、浑浊等现象
，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系
。

2. 仔细阅读细胞说明书
，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基

、血清比例
、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象
。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化
，悬浮细胞直接混匀收集细胞
，900 rpm-1000 rpm离心3 min
，弃上清
。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞
，并接种到新的培养瓶或培养皿中
，置于培养箱中进行培养
。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养
。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片
，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况

，请及时和老哥俱乐部联系
，告知细胞的具体情况
，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注
：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞

。收到细胞后次传代建议1：2传代 
。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。

公司正在出售的产品：

人干扰素诱导T细胞趋化因子(ITAC/CXCL11)elisa分析检测试剂盒

干扰素调节因子5重组兔单克隆抗体

IRF5

自噬相关蛋白8A抗体

APG8A

磷脂酶D（Phospholipase D）总活性荧光定量检测试剂盒

人膀胱肿瘤抗原(BTA)elisa分析检测试剂盒

大鼠雌二醇受体(ER)elisa检测试剂盒

小鼠胰岛素样生长因子1(IGF1)elisa检测试剂盒

前列腺相关蛋白MSMP抗体

MSMP

20号染色体开放阅读框78抗体

c20orf78

宫颈癌原癌基因8抗体  Anti-TTC23

维甲酸相关孤儿受体β抗体  Anti-ROR beta

核受体相关因子-1抗体  Anti-Nurr1

细胞膜铁转运蛋白FP1抗体  Anti-SLC40A1

囊泡相关膜蛋白2重组兔单克隆抗体

VAMP2

DELE蛋白抗体

DELE

钠-糖共转运载体1抗体  Anti-SGLT1/GLT 1

还原型辅酶Ⅱ/磷酸酰胺腺嘌呤二核苷酸抗体  Anti-NADPH

核糖体蛋白S6激酶家族RSK3抗体  Anti-RSK3/Ribosomal S6 kinase 3

味觉受体蛋白家族2亚基7抗体  Anti-TAS2R7/T2R7

大鼠富亮α2糖蛋白1(LRG1)elisa分析检测试剂盒

S100钙结合蛋白A11抗体  Anti-S100A11

PE-Cy7标记的驴抗豚鼠IgG H&L

Donkey Anti-Guinea Pig IgG H&L / PE-Cy7

小鼠脑皮层神经元细胞锌指蛋白BED5抗体