老哥俱乐部

细胞简介：

脑血管是由内膜
、中层弹力层和外膜构成
，三层紧密贴合在一起。其中
，外膜是专门的支持组织，由结缔组织组成，主要成分是成纤维细胞，其在血管炎症反应、血管重塑等方面发挥重要作用。

细胞特性：

1）组织来源于实验动物的正常脑组织
。

2）细胞鉴定：波形蛋白（Vimentin）荧光染色为阳性。

3）经鉴定细胞纯度高于90%。

4）不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原体
、
、酵母和。

5）细胞生长方式：长梭形细胞，不规则细胞
，贴壁培养
。

推荐培养基
：

老哥俱乐部推荐使用 delf 原代 成纤维 细胞 培养体系 作为体外培养的培养基。

实验报告：

一、分离与培养：

1
、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织
，然后用PBS将此组织块清洗2次
，将组织剪成1mm3左右大小；

2
、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶）

，混悬10s
，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清

，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置
；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液
，混悬10s，置37℃消化10 min后
，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次
，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬
，接种于25cm2培养瓶
，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养
；

5
、差速贴壁1h后
，吸出培养基
，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二
、免疫荧光鉴定
：

1
、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4
、按1: 100的比例稀释α-actin一抗
，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜
；

5
、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次
，每次10min
，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照
。

注意事项
：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好
，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系
。

2. 仔细阅读细胞说明书
，了解细胞相关信息

，如细胞形态、所用培养基、血清比例
、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题
，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面
，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象
。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化
，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清
。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min
，
，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中
，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态

，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因
，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系
，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注
：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿
。

公司正在出售的产品：

12S-type(Alox12/Alox12p)ELISAkit

猴可溶性细胞间粘附分子1(sICAM-1)elisa分析检测试剂盒

sICAM-1 ELISA Kit

人泛素结合酶E2D1（UBC4/ 5的源物，酵母）(UBE2D1)elisa分析检测试剂盒

UBE2D1ELISAkit

动物组织钠/钾ATP酶（Na＋/K＋ －ATPase）活性比色法

人丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）elisa检测试剂盒

大鼠结合珠蛋白/触珠蛋白(Hpt/HP)elisa检测试剂盒

猪去乙酰化饥饿(dGHRL)elisa检测试剂盒免费代测

白细胞介素36γ抗体

IL36 gamma

红细胞腺苷脱氨酶3抗体

AMPD3

细胞脂质过氧化物（MDA）活性TBARS比色法定量检测试剂盒

总脂酶脂蛋白脂酶LPL/ 肝脂酶HL 测试盒 100管/48样 50管/24样 比色法

石蜡切片神经纤维荧光染色（PGP9.5）试剂盒

小鼠促红细胞生成素(EPO)elisa检测试剂盒

PPRC1蛋白抗体

PPRC1

CD2结合蛋白3抗体

CD2BP3

神经细胞胞浆蛋白9.5抗体（蛋白基因产物9.5）  Anti-UCHL1/PGP9.5

凋亡相关蛋白10抗体  Anti-PDCD10

神经母细胞瘤蛋白PHOX2B抗体  Anti-PHOX2B

磷酸化神经突触前膜胞内蛋白抗体  Anti-phospho-STXBP1(Ser515)

PE-Cy3标记的羊抗牛IgG H&L

原基因18家族STMN3蛋白抗体  Anti-STMN3

Cy5.5标记的兔抗鸡IgM

Rabbit Anti-Chicken IgM / Cy5.5

小鼠脑血管成纤维细胞磷酸化Ras相关GTP结合蛋白抗体