老哥俱乐部

细胞简介：

膀胱逼尿肌具有一定外加张力作用下自发兴奋收缩的能力
，且不能被神经阻滞抑制
，说明膀胱可以发生肌源性的收缩
，有学者用组化的方法在膀胱内发现了与胃肠道 Cajal间质细胞类似的细胞。目前学术界普遍认为Cajal细胞在膀胱中充当起搏细胞的角色，Cajal细胞存在于膀胱平滑肌束周围
，与神经关系密切。

细胞特性
：

1）组织来源于实验动物的正常膀胱组织。

2)细胞鉴定：c-kit荧光染色为阳性。

3)经鉴定细胞纯度高于90%。

4)不含有 HIV-1、 HBV

、HCV、支原体
、、酵母和
。

5)细胞生长方式：梭形细胞，不规则细胞，贴壁培养。

推荐培养基：

老哥俱乐部推荐使用 Delf原代间质细胞培养体系 作为体外培养的培养基
。

实验报告
：

一、分离与培养：

1

、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织
，然后用PBS将此组织块清洗2次
，将组织剪成1mm3左右大小
；

2
、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液
，混悬10s，置37℃消化10 min后
，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置
，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4
、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min

，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ 
，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二
、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基
，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3
、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min

；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min
，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次

，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

公司正在出售的产品
：

大鼠CC趋化因子受体9(CCR9)检测试剂盒
，英文名： CCR9 ELISA Kit

Rabbit tissue type plasminogen activator (t-PA) ELISA Kit 兔子组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)检测试剂盒

MousegranzymesB,Gzms-BELISAKit 小鼠颗粒酶B(Gzms-B)检测试剂盒 进口分装

CLIAKitforHumaniggeringReceptorExpressesonMyeloidCells-1,EM-1ELISAKit人髓系细胞触发受体-1

通用型盐含量荧光定量检测试剂盒

ELISAKitGFAP大鼠神经胶质纤维酸性蛋白

HA重组甲型流感 H5N1 (A/Duck/Hong Kong/p46/97) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白 (His 标签) Protein

Resistin 抵抗素抗原 0.5mgResistin 抵抗素抗原

EFNA3重组人 Ephrin-A3 / EFNA3 蛋白 (His 标签) Protein

ANXA8 Protein Human 重组人 Annexin A8 / ANXA8 蛋白 (His 标签)

CSF3R Protein Human 重组人 G-CSFR / CD114 / CSF3R 蛋白

Resistin 抵抗素抗原 0.5mgResistin 抵抗素抗原

ANXA8 Protein Human 重组人 Annexin A8 / ANXA8 蛋白 (His 标签)

HA重组甲型流感 H5N1 (A/Duck/Hong Kong/p46/97) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白 (His 标签) Protein

CSF3R Protein Human 重组人 G-CSFR / CD114 / CSF3R 蛋白

EFNA3重组人 Ephrin-A3 / EFNA3 蛋白 (His 标签) Protein

猪基质金属蛋白酶抑制因子1(TIMP-1)ELISA 试剂盒

Human collagenase II (Collagenase II) ELISA Kit 人胶原酶II(Collagenase II)检测试剂盒

PorcineEsadiolreceptor,ERELISAKit 猪雌二醇受体(ER)检测试剂盒 进口分装

CLIAKitforAlpha-SMA(HumanAlpha-Smoothmuscleactin)ELISAKit人α平滑肌肌动蛋白

血液肌酐(CREATININE)酶连续反应比色法定量检测试剂盒20次

Plaphosphatidylglycerol,PGELISAKit植物0脂酰甘油(PG)检测试剂盒

小鼠膀胱间质细胞猪端粒酶(TE)ELISAKit   ELISA. 

猪促生长激素释放激素(GHRH)ELISAKit   ELISA. 

猪促卵泡素(FSH)ELISAKit   ELISA. 

猪Ⅰ型前胶原羧基端肽(PⅠCP)ELISAKit   ELISA.

注意事项

：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液
、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致
，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题
，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面
，显微镜下观察细胞状态

。因运输问题
，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片
，是正常现象
。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min
，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞
，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，
，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养
。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养
。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片
，记录细胞状态
，便于和我司技术部沟通交流
。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系
，告知细胞的具体情况
，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用
。

8. 备注
：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。