老哥俱乐部

细胞简介：

膀胱壁由三层组织组成，由内外为粘膜层、肌层和外膜
。其中
，粘膜层为极薄的一层移行上皮组织
，和输尿管及尿道黏膜彼此连贯
。体外培养膀胱上皮细胞不仅为组织工程膀胱，尿道提供种植细胞的必要手段，也是研究移行上皮细胞肿瘤发生和的基础与前提
。

细胞特性：

1）组织来源于实验动物的正常膀胱组织。

2)细胞鉴定
：广谱角蛋白(PCK)荧光染色为阳性。

3)经鉴定细胞纯度高于90%。

4)不含有 HIV-1、 HBV
、HCV、支原体、
、酵母和。

5)细胞生长方式
：铺路石状细胞

，不规则细胞
，贴壁培养。

推荐培养基：

老哥俱乐部推荐使用 DELF原代 上皮 细胞培养体系 作为该细胞的培养基。

实验报告：

一、分离与培养
：

1、无菌条件下
，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次
，将组织剪成1mm3左右大小
；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置
；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置
，重复此步骤2-3次
，直至组织被消化；

4
、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶

，放置于37℃ 
，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后
，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次
，每次10min
，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min
；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次
，每次10min
，按1
：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h
；

6
、用PBS冲洗3次
，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照

。

公司正在出售的产品
：

人B因子（BF）elisa检测试剂盒

大鼠血管内皮细胞生长因子受体1(VEGFR-1/Flt1)elisa检测试剂盒

石蜡切片组织CDK4蛋白表达荧光显微镜检测试剂盒

小鼠3-α羟基类固醇脱氢酶(Akr1c9)elisa检测试剂盒

动物糖蛋白化学法糖基分解试剂盒

狗氨基乙酰丙酸,delta-脱水酶(ALAD)elisa分析检测试剂盒

人体Caveolin-1 RFLP基因分析试剂盒

小鼠成纤维细胞生长因子11(FGF11)elisa检测试剂盒

大鼠CD44分子(CD44)elisa检测试剂盒免费代测

微管相关末端结合蛋白2抗体 EB2

细胞凋亡水解酶样蛋白1抗体 CRNKL1

SIKE1蛋白抗体 SIKE1

TIP30蛋白抗体 TIP30

AF680标记的I型胶原单克隆抗体 Collagen I, Alexa Fluor 680 conjugated

AF750标记的过氧化酶活化受体γ抗体 PPAR Gamma, Alexa Fluor 750 conjugated

结肠癌抗原3抗体 SDCCAG3

精子形成相关凋亡蛋白2抗体 TSARG2/SPATA4

有丝分裂原和应激活化型蛋白激酶1抗体 MSK1

载脂蛋白L4抗体 APOL4

纺锤体样蛋白3抗体 SPIN3

富含亮蛋白LRP130抗体 LRP130/LRPPRC

G蛋白偶联受体70抗体 GPR70

HER4抗体 ErbB4

鸟苷酸激酶GMK抗体 GUK1

趋化因子受体1抗体 CX3CR1

大鼠肾上腺总RNA

鞘氨醇激酶1抗体  Anti-SPHK1

Cy3标记的兔抗鸡IgM

Rabbit Anti-Chicken IgM / Cy3

小鼠膀胱上皮细胞CAST1蛋白抗体

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题
，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片
，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h
。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min
，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min
，

，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片
，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因
，个别敏感细胞会出现不稳定的情况

，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用


。

8. 备注
：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞
，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1
：2传代 
。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿
。不是1个T25瓶传2个10cm皿。