老哥俱乐部

细胞简介：

甲状腺是脊椎动物非常重要的腺体
，属于器官。在哺乳动物它位于颈部甲状软骨下方，气管两旁。人类的甲状腺形似蝴蝶。甲状腺控制使用能量的速度、制造蛋白质
、调节身体对其他荷尔蒙的敏感性。

甲状腺有两层被膜
：气管前筋膜包绕甲状腺形成甲状腺鞘，称为甲状腺假被膜 ;甲状腺自身的外膜伸入腺实质内，将腺体分为若干小叶，即纤维囊，又称甲状腺真被膜，这是甲状腺成纤维细胞的主要聚集场所。腺鞘与纤维囊之间的间隙内有疏松结缔组织，血管
，神经和甲状旁腺等。

细胞特性：

1） 细胞来源于人正常甲状腺组织

。

2) 细胞鉴定：纤维连接蛋白（Fibronectin）或波形蛋白（Vimentin）荧光染色为阳性。

3) 经鉴定细胞纯度高于90%
。

4) 不含有 HIV-1、 HBV
、HCV
、支原体
、
、酵母和。

5) 细胞生长方式
：长梭状细胞，贴壁培养。

推荐培养基：

老哥俱乐部推荐使用 Delf 原代成纤维细胞 培养体系 作为体外培养的培养基
。

实验报告：

一、分离与培养
：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次
，将组织剪成1mm3左右大小；

2

、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液
，自然沉淀并收集上清
，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化
；

4
、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min
，弃去上清
，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶
，放置于37℃ 
，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时
，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2
、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后在室温条件下
，用4% BSA封闭细胞30min
；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5
、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1
：150的比例稀释抗α-actin的二抗
， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照
。

公司正在出售的产品：

小鼠内皮抑素(ES)ELISA 试剂盒

Rat basic fibroblast growth factor 6 (bFGF-6) ELISA Kit 大鼠碱性成纤维细胞生长因子6(bFGF-6)检测试剂盒

HumanfibrinopeptideA,FPAELISAKit 人血纤肽/纤维蛋白肽A(FPA)检测试剂盒 进口分装

Human8-epi-prostaglandinF2alpha,8-epi-PGF2α检测试剂盒人8-异构前列腺素F2α(8-epi-PGF2α)检测试剂盒

正常大鼠(SpragueDawley)肝组织微粒体组分(5毫克/毫升)500微升

Mouseai-IVIgGaibodyELISAKit小鼠抗IVIgG抗体检测试剂盒

CADM3重组小鼠 CADM3 / NECL1 / IGSF4B 蛋白 (His 标签) Protein

Beta-Amyloid (31-35 0.1mgBeta-Amyloid (31-35) β淀粉样肽31-35(多肽蛋白)

TXNL4B重组人 Dim2 / TXNL4B 蛋白 (His 标签) Protein

ACPP Protein Human 重组人 Prostatic Acid Phosphatase / ACPP 蛋白 (His 标签)

LIFR Protein Rat 重组大鼠 LIFR 蛋白 (His 标签)

Beta-Amyloid (31-35 0.1mgBeta-Amyloid (31-35) β淀粉样肽31-35(多肽蛋白)

ACPP Protein Human 重组人 Prostatic Acid Phosphatase / ACPP 蛋白 (His 标签)

CADM3重组小鼠 CADM3 / NECL1 / IGSF4B 蛋白 (His 标签) Protein

LIFR Protein Rat 重组大鼠 LIFR 蛋白 (His 标签)

TXNL4B重组人 Dim2 / TXNL4B 蛋白 (His 标签) Protein

植物激素脱落酸(ABA)ELISA 试剂盒

Human ai RNP aibody (RNP-Ab) ELISA Kit 人抗核糖核蛋白抗体(RNP-Ab)检测试剂盒

Porcineinsulin-likegrowthfactorsbindingprotein3,IGFBP-3ELISAKit 猪胰岛素样生长因子结合蛋白3(IGFBP-3)检测试剂盒 进口分装

CLIAKitforAFA(Humanai-filaggrinaibody)ELISAKit人抗角蛋白丝聚集素/丝集蛋白抗体

血液氧化型(GSSG)浓度比色法定量检测试剂盒50次

MousesubstancePreceptor,SP-RELISAKit小鼠P物质受体(SP-R)检测试剂盒

人甲状腺成纤维细胞整合素α2β1   英文名称：   Iegrin α2β1   规格：      英文缩写：   Iegrin α2β1

整合素α5β3   英文名称
：   Iegrin α5β3   规格
：      英文缩写：   Iegrin α5β3

β-整合素   英文名称
：   β-Iegrin   规格：      英文缩写
：   β-Iegrin

诱导型合酶   英文名称：   induced niic oxide syhas   规格：      英文缩写：   iNOS

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象
，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系

。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态
。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片
，是正常现象。观察好细胞状态后
，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，

，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中

，置于培养箱中进行培养
。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片
，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流

。由于运输的原因
，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系
，告知细胞的具体情况
，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。