細胞簡介 ：

脾是重要的器官 ，有造血 、濾血 、衰老血細胞及參與反應等功能 。也是細胞遷移和接受抗原刺激後發生應到 、產生效應分子的重要場所 。

脾髒作為機體大的器官 ，占全身組織總量的 25% ，含有大量的細胞和巨噬細胞 ，是機體細胞和體液的中心，通過多種機製發揮抗腫瘤作用. 脾髒切除導致細胞和體液功能的紊亂 ，影響腫瘤的發生和發展 。

細胞特性 ：

1）細胞來源於人正常脾髒組織 。

2)不含有 HIV-1 、 HBV 、HCV 、支原體 、 、酵母和 。

3)細胞生長方式 ：細胞是混合體係 ，少量貼壁生長 ，大部分懸浮生長 。

推薦培養基 ：

老哥俱樂部推薦使用 人原代脾外周血單個核細胞培養基 作為體外培養的培養基 。

實驗報告 ：

一 、分離與培養 ：

1 、無菌條件下 ，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織 ，然後用PBS將此組織塊清洗2次 ，將組織剪成1mm3左右大小 ；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶） ，混懸10s ，置37℃條件下消化10min ，之後用滴管吹打製成單細胞懸液 ，自然沉澱並收集上清 ，用含10% FBS培養基終止消化後4℃放置 ；

3 、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液 ，混懸10s ，置37℃消化10 min後 ，按上述方法收集上清並終止消化後4℃放置 ，重複此步驟2-3次 ，直至組織被消化 ；

4 、用200目不鏽鋼篩網過濾細胞消化液 ，1200r/min 離心10min ，棄去上清 ，沉澱細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸 ，接種於25cm2培養瓶 ，放置於37℃  ，5％CO2 培養箱中培養 ；

5 、差速貼壁1h後 ，吸出培養基，按實驗需要接種於6孔板中繼續培養 ；二 、免疫熒光鑒定 ：

1 、待心房肌細胞生長至80%融合時 ，棄去培養基 ，用溫育的PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min ；

2 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在4℃條件下 ，用0.1％Triton X-100透膜15min ；

3 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在室溫條件下 ，用4% BSA封閉細胞30min ；

4 、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗 ，然後將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜 ；

5 、PBS衝洗細胞3次 ，每次10min ，按1 ：150的比例稀釋抗α-actin的二抗 ， 37℃條件下放置1h ；

6 、用PBS衝洗3次 ，每次10min ，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像並拍照 。

注意事項 ：

1. 收到細胞後首先觀察細胞瓶是否完好 ，培養液是否有漏液 、渾濁等現象 ，若有上述現象發生請及時和老哥俱樂部聯係 。

2. 仔細閱讀細胞說明書 ，了解細胞相關信息 ，如細胞形態 、所用培養基 、血清比例 、所需細胞因子等 ，確保細胞培養條件一致 ，若由於培養條件不一致而導致細胞出現問題 ，責任由客戶自行承擔 。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表麵 ，顯微鏡下觀察細胞狀態 。因運輸問題 ，部分細胞由於溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片 ，是正常現象 。觀察好細胞狀態後 ，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置於37℃培養箱放置4-6h 。

4. 貼壁細胞可以消化 ，懸浮細胞直接混勻收集細胞 ，900 rpm-1000 rpm離心3 min ，棄上清 。加5 mL PBS重懸細胞 ，再900 rpm-1000 rpm離心3 min ， ，用新鮮的*培養基重懸細胞，並接種到新的培養瓶或培養皿中 ，置於培養箱中進行培養 。

5. 請客戶用相同條件的培養基用於細胞培養 。

6. 建議客戶收到細胞後前3天各拍幾張細胞照片 ，記錄細胞狀態 ，便於和我司技術部溝通交流 。由於運輸的原因 ，個別敏感細胞會出現不穩定的情況 ，請及時和老哥俱樂部聯係 ，告知細胞的具體情況 ，以便老哥俱樂部的技術人員跟蹤回訪直至問題解決 。

7. 該細胞僅供科研使用 。

8. 備注 ：運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞 ，請換用按照說明書細胞培養條件新配製的*培養基來培養細胞 。收到細胞後次傳代建議1 ：2傳代  。

9.注意 ： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿 。不是1個T25瓶傳2個10cm皿 。

公司正在出售的產品 ：

人結合珠蛋白/觸珠蛋白(Hpt/HP)elisa分析檢測試劑盒

人B7-H4 elisa分析檢測試劑盒

20％中性Formalin固著液

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髓磷酯髓鞘蛋白1單克隆抗體 PLP1

PE標記人CD4單克隆抗體 Human CD4-PE

PSF2蛋白抗體 PSF2

19號染色體開放閱讀框44抗體 C19orf44

20號染色體開放閱讀框26抗體 C20orf26

磺基轉移酶抗體1C2抗體 SULT1C2

肌球蛋白重鏈9抗體 MYH9

嗅覺受體52E1抗體 OR52E1

血紅素抗體 Hemoglobin

蛋白激酶C mu型抗體 PRKD1/PKC mu

蛋白質磷酸酶2A亞基3抗體 PPP2R3

FAM58A蛋白抗體 FAM58A

FITC標記人/小鼠ZAP-70單克隆抗體 human/mouse ZAP-70/FITC

磷酸化周期蛋白依賴激酶抑製因子1C抗體 Phospho-p57 Kip2 (Thr310)

卵母細胞TRO抗體 Magphinin

汞離子檢測試劑盒

粘附分子JAML蛋白抗體

JAML

載脂蛋白C4抗體

人脾外周血單個核細胞APOC4