老哥俱乐部

细胞简介

：

脾是重要的器官
，有造血、滤血、衰老血细胞及参与反应等功能
。也是细胞迁移和接受抗原刺激后发生应到
、产生效应分子的重要场所
。

脾由被膜
、小梁
、白髓、红髓
、边缘区几部分组成

。其中，小梁间的网状组织结构则形成了脾组织的细微支架。小梁内的平滑肌细胞可以通过舒张或伸缩调节脾的含血量
。

细胞特性
：

1） 细胞来源于人正常脾脏组织。

2) 细胞鉴定：α-SMA荧光染色为阳性。

3) 经鉴定细胞纯度高于90%。

4) 不含有 HIV-1、 HBV、HCV
、支原体
、、酵母和。

5) 细胞生长方式：长梭形细胞
，贴壁培养。

推荐培养基：

老哥俱乐部推荐使用 平滑肌细胞培养基 作为体外培养的培养基。

实验报告
：

一、分离与培养：

1
、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次
，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s

，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液
，自然沉淀并收集上清
，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3
、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次
，直至组织被消化
；

4
、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶
，放置于37℃ 
，5％CO2 培养箱中培养
；

5、差速贴壁1h后
，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定：

1
、待心房肌细胞生长至80%融合时
，弃去培养基
，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min
；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下
，用4% BSA封闭细胞30min；

4
、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次
，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗
， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

公司正在出售的产品
：

大鼠BH3结构域凋亡诱导蛋白(Bid)检测试剂盒 ，英文名
： Bid ELISA Kit

Mouse bone morphogenetic protein 2 (BMP-2) ELISA Kit 小鼠骨成型蛋白2(BMP-2)检测试剂盒

Mousehiston-H2bELISAKit 小鼠组蛋白H2b(histon-H2b)检测试剂盒 进口分装

CLIAKitforhumahyroidstimulatingimmunoglobulin,TSIELISAKit人甲状腺刺激免疫球蛋白

通用型亚盐比色法定量检测试剂盒

ELISAKitCG大鼠绒毛膜

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IL17RA重组人 IL17RA / CD217 蛋白 (His 标签) Protein

GMFG Protein Human 重组人 GMFG / Glia maturation factor, gamma 蛋白 (His 标签)

IGFBP3 Protein Human 重组人 IGFBP3 / IBP3 蛋白 (His 标签)

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小鼠白介素15(IL-15)ELISA 试剂盒

Rat glial fibrillary acidic protein (GFAP) ELISA Kit 大鼠神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)检测试剂盒

Humancross-linkedC-telopeptidesofTypeⅠcollagen,CⅠCPELISAKit 人Ⅰ型前胶原C末端肽(CⅠCP)检测试剂盒 进口分装

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转基因棉花MON15985品系试剂盒20次

Humansmallbreastepithelialmucin,SBEMELISAKit人小表皮粘蛋白(SBEM)检测试剂盒

人脾小梁平滑肌细胞兔子肝细胞生长因子(HGF)检测试剂盒     试剂盒   组装/原装

兔子端粒酶(TE)检测试剂盒     试剂盒   组装/原装

兔子凋亡诱导因子(AIF)检测试剂盒     试剂盒   组装/原装

兔子凋亡信号调节激酶I(ASK-1)检测试剂盒     试剂盒   组装/原装

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好
，培养液是否有漏液
、浑浊等现象

，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书
，了解细胞相关信息，如细胞形态
、所用培养基、血清比例
、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致
，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态
。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象
。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h
。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min
，
，用新鲜的*培养基重悬细胞
，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养
。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养
。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态

，便于和我司技术部沟通交流
。由于运输的原因
，个别敏感细胞会出现不稳定的情况
，请及时和老哥俱乐部联系
，告知细胞的具体情况
，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注
：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代
。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。